Хід роботи

1. У грунтовому розрізі зачистити одну зі стінок.

2. Зробити ножем вертикальну щілину й закласти в неї стерильні предметні скельця, щільно притуляючи їх до грунту.

3. Закопати розріз, відмітивши кілком місцезнаходження препаратів.

4. Після закінчення строку експозиції (не менше 1 місяця) скельця обережно відокремити від грунту.

5. Підсушити на повітрі.

6. Зафіксувати в полум’ї спиртівки.

7. Обережно відмити препарат водою від крупних частинок грунту (для цього можна залишити скло в стакані з водою в нахиленому положенні на декілька годин).

8. Провести забарвлення 1%-им карболовим еритрозином впродовж 1 години у вологій камері.

9. Промити дистильованою водою, висушити.

10. Розглянути під мікроскопом.

11. Вивчити та замалювати “мікробні пейзажі” на скельцях обростання. Відмітити наявність на скельцях гіф грибів, колоній бактерій, клітин найпростіших.

Питання для самоперевірки

1. Які методи використовуються для вивчення природного розподілу мікроорганізмів і взаємовідносин між різними групами організмів безпосередньо в грунті?

2. У чому полягає суть методу скелець обростання Холодного? Переваги та недоліки методу.

3. Охарактеризувати якісний склад і просторовий розподіл мікроорганізмів, які складають мікробний ценоз або пейзаж досліджуваних грунтів.

Лабораторна робота 5

Облік ризосферної та кореневої мікрофлори методом послідовних відмивань за О.З.Теппер

Мета роботи: відпрацювати методику виявлення ризосферних мікроорганізмів методом послідовних відмивань коренів за О.З.Теппер.

Теоретична частина

Виростаючи на ґрунті, рослини вступають у тісний взаємозв’язок із мікрофлорою, що знаходиться в ньому. В ділянці ґрунту, що прилягає до коренів рослин, мікроорганізмів у декілька разів більше, ніж у ґрунті, що знаходиться на деякій відстані від коренів. Це відбувається завдяки тому, що в процесі життєдіяльності корені рослин виділяють різні органічні речовини: безазотисті – органічні кислоти, цукри, спирти та інші, а в деяких випадках і азотовмісні, наприклад, амінокислоти. В кореневих виділеннях виявлені також біологічно активні речовини такі, як вітаміни, стимулятори росту та інші. Крім органічних сполук корені виділяють різні мінеральні речовини. Корені створюють безпосередньо навколо себе сприятливий водно-повітряний режим, який пов’язаний із покращенням структури грунту біля кореня. Все це говорить про те, що рослини можуть сприяти розвитку мікрофлори в своїй прикореневій зоні. В той же час умови біля коренів можуть виявитись і несприятливими для розвитку окремих видів мікроорганізмів. У кожних рослин склад прикореневої мікрофлори не є тотожним; це пояснюється, насамперед, тим, що кореневі виділення окремих видів рослин теж не однакові. Зона ґрунту навколо коренів, яка збагачена мікроорганізмами, називається ризосферою. В свою чергу мікроорганізми ризосфери забезпечують мінералізацію органічних речовин і мобілізацію речовин гумусу безпосередньо в зоні поглинання поживних речовин кореневою системою рослин. Крім того, вони виділяють у цю зону велику кількість гетероауксинів, вітамінів, амінокислот, ферментів і інших факторів росту. Ці стимулятори росту підсилюють ферментативні процеси в рослинах, сприяють посиленню кореневого живлення й більш енергійному обміну речовин рослин.

До складу мікрофлори ризосфери в деяких видів трав'янистих і деревних рослин входять гриби. Вони утворюють навколо кореня чохол із гіф, який має назву мікориза. Мікориза приймає активну участь у забезпеченні рослин амінокислотами, мінеральними речовинами та водою. Вони поглинають і утилізують продукти екзосмосу коренів, перетворюють речовини, що пригнічують розвиток рослин. Взаємозв'язок між ризосферними мікроорганізмами, мікоризою й рослинами буває настільки значний і специфічний, що без них рослини не можуть нормально розвиватися.

Встановлено, що мікрофлора коренів різко відрізняється від мікрофлори ґрунту, як за кількісним, так і за якісним складом. Є також відмінності у видовому складі мікрофлори коренів різних сільськогосподарських рослин. Це обумовлено, очевидно, різним складом кореневих виділень рослин.

У даний час розрізняють: а) власне кореневу мікрофлору , що знаходиться на поверхні коренів – мікрофлору ризоплани ; б) прикореневу мікрофлору ґрунту, що примикає безпосередньо до коренів - мікрофлору ризосфери, тобто мікрофлору ґрунтових шарів, розташованих на відстані до 1 см від коренів.

Запропоновано багато методів виявлення та виділення ризосферних мікроорганізмів (методи Н. А. Красильникова, Е. Ф. Березової й ін.). Достовірні результати по виявленню ризосферних мікроорганізмів у лабораторних умовах дає метод послідовного відмивання коренів, запропонований Е. С. Теппер.

Обладнання і матеріали: корені рослин, 5 колб із 99 мл стерильної дистильованої води, 2 колби з 99 мл води та піском (10 г) на кожну бригаду, порцелянові ступки, ножиці, пінцети, піпетки градуйовані на 1 мл, чашки з МПА по 7 шт. на бригаду, шпатель, бактеріологічна петля, стекла, фарби, мікроскоп.