Ультрафильтрация и обратный осмос

Достоинства хроматографических методов

1.Разделение носит динамический характер, причём акты сорбции и десорбции происходят многократно.

2.При разделении используются различные типы взаимодействия сорбатов и неподвижной фазы: от чисто физических до хемосорбционных.

3.На разделяемые вещества возможно накладывать различные поля, которые расширяют возможности хроматографии за счёт изменения разделения

4.Хроматография гибридный метод включающий разделение и определение веществ.

5.Хроматография позволяет решать как аналитические задачи так и препаративные.

ИОНООБМЕННАЯ

ХРОМАТОГРАФИЯ

Позволяет разделять ионы и молекулы на основе их заряда. Взаимодействие образца и заряда основано на кулоновском взаимодействии ДОСТОИНСТВА

- возможность определять большое число неорганических и органических ионов, а также одновременно определять катионы и анионы;

–высокая чувствительность (до 1 нг/мл без предварительного концентрирования;

–высокая селективность и экспрессность;

–малый объем анализируемой пробы (не более 2 мл образца);

–широкий диапазон определяемых концентраций (от 1 нг/мл до 10000 мг/л);

–возможность использования различных детекторов и их комбинаций, что позволяет обеспечить селективность и малое время определения;

–возможность полной автоматизации определения;

–во многих случаях полное отсутствие предварительной пробоподготовки.

*Классификация ионообменников

АФФИННАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ

(ОТ ЛАТИНСКОГО КОРНЯ «AFFINIS» — РОДСТВЕННЫЙ, ИМЕЮЩИЙ СРОДСТВО),

Метод разделения биологических молекул основанный на специфическом взаимодействии между белком или белковым компонентом со специфическим лигандом.

Образование комплекс фермента с лигандом происходит за счет сродства.

Наиболее часто используемые взаимодействия

Фермент – субстрат, ингибитор, кофактор; Антитело – антиген, вирус, клетка;

Лектин – полисахарид, гликопротеин, рецептор на клеточной поверхности, клетка;

Нуклеиновые кислоты – комплементарные последовательности, гистоны, ДНК или РНК полимеразы, белки связывающие нуклеиновые кислоты;

Гормон, витамин – рецептор, белок-переносчик;

Глутатион – гутатион-S-трансфераза или связанный с ней протеин;

Ионы металов – белки с полигистидиновым тегом, белки с цистеиновыми и/или триптофановыми остатками на поверхности.

Механизм разделения веществ в аффинной хроматографии: а – иммобилизация лиганда (ковалентно); б – связывание целевого вещества (нековалентно) и удаление сопутст-

вующих примесей; в – десорбция целевого вещества

ВОЗМОЖНЫЕ СОЧЕТАНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ГРУПП ЛИГАНДОВ И МАТРИЦ