Раздел 2. Объекты и методы исследования

Работа выполнялась в лаборатории кафедры микологии и фитоиммунологии ХНУ им. В.Н. Каразина в 2013-2015 гг. Полевая часть работы, а именно отбор проб больных растений производился на базе агрофирмы «Урожай» Валковского района Харьковской области в 2013 г.

Объектами исследования были семена и пораженные части растений кукурузы гибрида M2893, изоляты гриба Fusarium moniliforme Sheld., выделенные собственноручно, а также четыре современных фунгицидных протравителя семян, названия и краткая характеристика которых представлена в таблице 1.

2.1. Выделение гриба в чистую культуру и подготовка растений к инокуляции

Из пораженных семян кукурузы в чистую культуру нами были выделены изоляты гриба F. moniliforme. Выделение в чистую культуру проводилось с использованием стандартных микологических методов. Посев осуществлялся в чашки Петри на агаризованную питательную среду Чапека [4; 5].

Культивирование изолятов для наращивания ими достаточной биомассы и формирования конидий проводилось при комнатной температуре (18-20⁰С) в течение 7 суток [4; 5].

2.2. Методы инокуляции растений

Семена кукурузы помещали в пластиковые стаканчики с универсальной почвой и выращивали в ростовой камере. Дальнейшие исследования проводили с 14-ти дневными проростками, достигшие стадии четырех листочков. Опыт проводился в трехкратной повторности [4;5].

В рамках дипломной работы нами проводилось заражение листьев кукурузы. При заражении листьев, листья 14-ти дневных проростков кукурузы аккуратно срезали стерильным лезвием у черешка и помещали на увлажненную фильтровальную бумагу в чашки Петри. На подготовленные листья осторожно помещали высечки культуры гриба диаметром 5 мм, мицелием вниз. Последующая инкубациярастений проводилась в течение 10 суток. Диаметр некротической зоны измеряли на 3, 7 и 10 сутки [4].

2.3. Оценка чувствительности культур f. Moniliforme к фунгицидам

Для оценки чувствительности гриба F. moniliforme к фунгицидам были выбраны два метода: бумажных дисков и лунок [4].

При тестировании методом бумажных дисков предварительно вырезали диски из фильтровальной бумаги диаметром 2 см. Колбы для разведения фунгицидов и бумажные диски предварительно стерилизовали в сухожаровом шкафу. Перед непосредственным выполнением опыта в стерильных колбах готовили растворы фунгицидов с нормой расхода, указанной в таблице 1. В качестве контроля использовалась стерильная дистиллированная вода. С помощью стерильного пинцета бумажные диски смачивали в растворе фунгицида и помешали на поверхность среды Чапека в Чашки Петри в центральной их части. После этого производили крестообразный засев культур гриба в четырех местах по краям чашки Петри. Инкубирование чашек с культурами производили при комнатной температуре. Измерение зоны отсутствия роста колонии производили на 3, 7 и 14 сутки (от края диска к краю колонии). Для каждой чашки рассчитывали средне значение. Опыт проводился в трехкратной повторности [5].

При использовании метода лунок раствор фунгицида вносили в предварительно изготовленные лунки в среду Чапека в центральной части чашек Петри. Для изготовления лунок в не полностью застывший агар помещали небольшие фрагменты стеклянных палочек длиной 20-22 мм и шириной 4 мм, которые стерильным пинцетом изымались после застывания среды. Объем среды в каждой чашке Петри составлял 20 мл. Затем производили крестообразный засев культур гриба в четырех местах по краям чашки Петри, а в лунки с помощью шприца вносилось необходимое количество рабочего раствора препарата. Инкубирование чашек с культурами производили при комнатной температуре. Измерение зоны отсутствия роста проводилась на 3, 7 и 14 сутки. Опыт проводился в трехкратной повторности [42; 43].

Полученные результаты обобщались по формуле Эбботта:

К = (Дк-До/Дк) × 100%, где

К – отсутствие роста колонии;

Дк – диаметр колонии в контроле, мм;

К – диаметр колонии в опытном варианте, мм [4; 5].

Таблица 1. Обобщающая характеристика изучаемых фунгицидов

Фунгицид	Действующее вещество, г/л	Норма расхода, л/т	Содержание в исходном растворе, %	расход препарата на 10 мл, мл	Фирма производитель
Максим XL	25 г/л флудиоксонилу 10 г/л металаксилу-М	1	0,25 г/л флудиоксонилу 0,1 г/л металаксилу-М	1	Syngenta (Швейцария)
Иншур Перформ	40 г/л пираклостробин 80 г/л тритиконазол	0,5	0,4 г/л пираклостробин 0,8 г/л тритиконазол	0,5	BASF (Германия)
Кинто Дуо	20 г/л тритиконазол 60 г/л прохлораз	2	0,2 г/л тритиконазол 0,6 г/л прохлораз	2	BASF (Германия)
Февер	300 г/л протиоконазол	0,9	3 г/л протиоконазол	0,9	Bayer (Германия)
Витавакс	200 г/л карбоксин 200 г/л тирам	3	2 г/л карбоксин 2 г/л тирам	3	Crompton Greaves Limited (Великобритания)