Определение концентрации гормона роста

В настоящее время измерение содержания СТГ в плазме крови практически всегда проводят методом иммуноанализа. В то же время существуют другие системы детекции, но выбор метода определения СТГ в крови по-прежнему не теряет своей важности. До появления метода оценки СТГ с помощью иммуноанализа исследователи обычно полагались на биологические методы определения, для которых, как правило, были необходимы крысы. Некоторые из этих методик применяются в лабораториях, где работают авторы этой главы, и сегодня (Roth et al., 1963; Hunter, Greenwood, 1964). Поскольку использование этих методик часто позволяет получать интересные результаты, которые не всегда согласуются с оценками, полученными методом иммуноанализа, мы считаем оправданным рассмотрение здесь их деталей.

Биологические методы определения стт: опыт публикаций прежних лет

Эти тесты, которые были разработаны более 50 лет назад, отражают рост знаний об анаболических, липолитических и диабетогенных эффектах СТГ. Существенные детали некоторых тестов, применявшихся в то время, прекрасно описаны в обзоре 1962 г. (Papkoff, Li, 1962).

В отношении тестов на увеличение массы тела применимы следующие общие требования: для проведения теста необходимо большое количество крыс (10 на один уровень дозы); инъекции могут производиться подкожно или внутрибрюшинно; могут быть использованы нормальные крысы либо с удаленным гипофизом; тесты оценки массы тела отличаются довольно низкой чувствительностью (требуется доза 50 мг в день для взрослых самок и 10 мг в день для незрелых крыс с удаленным гипофизом); показатель точности (рассчитывается путем деления стандартного отклонения на наклон кривой) превышает 0,2; примеси других гормонов (например, тироксина) в препаратах СТГ, полученных из естественных источников, могут оказывать синергичное действие, что приведет к получению завышенных значений оценки. Несмотря на все эти недостатки, традиционный тест на увеличение массы тела, который заключается в измерении прироста массы тела незрелых крыс после подкожного введения СТГ на протяжении 10 дней, в соответствии с законами США остается обязательным для оценки биоидентичности и эффективности препаратов СТГ, получаемых с помощью генно-инженерных технологий.

Что касается тибиатеста или теста определения изменений ширины линии эпифизарного хряща большеберцовой кости крыс под влиянием СТГ (tibial line GH bioassay, Greenspan et al., 1949), основным его преимуществом по сравнению с тестом на увеличение массы тела является заметно более высокая чувствительность (реакция обнаруживается при использовании общей дозы, равной 5 мг, за период 4 суток). В этом тесте производится определение ширины некальцифицированной эпифизарной хрящевой пластинки большеберцовой кости крысы, отделенной от окрашенной нитратом серебра кальцифицированной порции пластинки. Этот тест использовался авторами данной главы при проведении различных исследований, в том числе направленных на изучение эффектов двигательной активности/постельного режима на уровень СТГ в крови.

Список биологических активностей гормона роста человека постоянно расширяется. Как отмечал Страсбургер (Strasburger, 1994), уже достаточно давно известно, что СТГ является анаболическим белком, который стимулирует продольный рост костей. Кроме того, было установлено, что он обладает лактогенным эффектом, агонистическими и антагонистическими свойствами по отношению к инсулину, оказывает липолитическое воздействие, в печени стимулирует орнитиндекарбоксилазу, принимает участие в регуляции натриевого и водного обмена, а также модулирует функцию иммунной системы.

Тесты с использованием культивируемых клеточных линий лимфоцитов IM-9 и адипоцитов ЗТЗ-F422A представляют собой появившиеся относительно недавно, заслуживающие внимания биологические методы определения СТГ in vitro на клетках. По нашим данным, они не применялись для оценки активности СТГ в плазме после занятий физическими упражнениями, поэтому мы не рассматриваем их более детально.