Грамположительные кокки

Грамположительные кокки (аэробы и/или факультативные анаэробы) представлены семейством Micrococcaceae, включающим род Micrococcus и Staphylococcus, и семейством Streptococcaceae.

Семейство Micrococcaceae. Первоначально проводят изучение характера роста колоний на 10-процентном желточно-солевом и 5-процентном кровяном агаре. Затем рекомендуется произвести окраску мазков из колоний по Граму. Для дифференциации Staphylococcus от Micrococcus используют следующие тесты: размеры клеток, ферментация глюкозы в анаэробных условиях и образование пигмента (табл. 2).

Таблица 2 

Дифференциация micrococcus от staphylococcus

----------------------------+-----------------+-------------------

¦ Тесты ¦ Micrococcus ¦ Stafylococcus ¦

+---------------------------+-----------------+------------------+

¦Размеры клеток ¦0,5 - 3,5 мкм ¦0,5 - 1,5 мкм ¦

¦Ферментация глюкозы в ¦- ¦+ ¦

¦анаэробных условиях ¦ ¦ ¦

¦Образование пигмента на ¦От желтого до ¦От золотистого до ¦

¦плотных средах ¦розового ¦белого ¦

----------------------------+-----------------+-------------------

Примечание: Некоторые штаммы S. saprophyticus слабо ферментируют глюкозу.

Для дифференциации различных видов Staphylococcus следует определить плазмокоагулазу, ферментацию маннита в аэробных и анаэробных условиях, ДНК-азную активность, наличие протеина A, чувствительность к новобиоцину (табл. 3). При необходимости эпидемиологического обследования проводят фаготипирование золотистых стафилококков. Для определения факторов патогенности Staphylococcus epidermidis, выделяемых из клинического материала (кровь, закрытые полости, раны), рекомендуем учитывать следующие свойства: образование гемолизина при росте на плотных кровесодержащих средах, лецитиназы - при росте на ЖСА и фосфатазную активность.

Таблица 3 

Дифференциация различных видов staphylococcus

--------------------------------+------+-----------+--------------

¦ Тесты ¦Aureus¦Epidermidis¦Saprophyticus¦

+-------------------------------+------+-----------+-------------+

¦Плазмокоагулаза ¦+ ¦- ¦- ¦

¦Ферментация маннита: ¦ ¦ ¦ ¦

¦ аэробно ¦+ ¦+ <1> ¦+ <1> ¦

¦ анаэробно ¦+ ¦- ¦- ¦

¦ДНК-азная активность ¦+ ¦- ¦- ¦

¦Протеин A ¦+ ¦- ¦- ¦

¦Чувствительность к новобиоцину ¦+ <2> ¦+ ¦- ¦

--------------------------------+------+-----------+--------------

--------------------------------

<1> Некоторые штаммы дают отрицательную реакцию.

<2> Чувствительные штаммы МПК меньше 0,6 мкг/мл, резистентные МПК больше 2,0 мкг/мл.

Семейство Streptococcaceae представлено многочисленными видами, среди которых при заболеваниях человека наиболее изученными в настоящее время являются аэробные представители: Streptococcus pyogenes, faecalis, pneumoniae. На 5-процентном кровяном агаре стрептококки растут в виде мелких прозрачных, с гладким краем колоний, образующих или не дающих зону гемолиза. Стрептококки серологической группы A, дающие прозрачную зону гемолиза вокруг колонии типа бета, отнесены к разновидностям Streptococcus pyogenes.

Стрептококки, образующие альфа-тип гемолизина, характеризующиеся частичным гемолизом вокруг колонии и зеленоватым окрашиванием зоны гемолиза, отнесены к зеленящим стрептококкам (Streptococcus viridans). Стрептококки серологической группы D, обычно не дающие зоны гемолиза, отнесены к энтерококкам разновидности Streptococcus faecalis.

Пересев колоний производят в пробирки с сахарным бульоном или со скошенным кровяным агаром, делают бактериоскопию и проводят дифференциацию стрептококков от энтерококков по следующим тестам: редукция метиленовой сини в молоке, рост в бульоне с 6,5-процентным хлоридом натрия, рост на 10- или 40-процентном желчном агаре или бульоне. Положительные реакции позволяют отнести выделенные штаммы к S. faecalis, отрицательные, в зависимости от характера гемолиза, к S. pyogenes или S. viridans.

Современная классификация стрептококков (классификация Ленсфильд) основана на различии группоспецифических полисахаридных антигенов, локализованных в клеточной стенке стрептококков группы A.

Для серологической идентификации стрептококков группы A применяют реакцию преципитаций в геле. Группоспецифические сыворотки для этой реакции выпускает ИЭМ им. Гамалеи АМН СССР. Для серодиагностики стрептококковой инфекции применяют определение антигиалуронидазы, антистрептокиназы и антистрептолизина-О в сыворотке крови больных. Диагностические препараты для этих реакций выпускают ИЭМ им. Гамалеи АМН СССР и Ленинградский НИИВС. Методики постановки реакций изложены в наставлениях к этим препаратам.

В семейство стрептококков включены также Streptococcus pneumoniae (пневмококки). Пневмококки растут на питательных средах с кровью в виде нежных мелких зеленовато-серого цвета, полупрозрачных колоний, окруженных ореолом, напоминающим гемолиз. Подозрительные колонии снимают в пробирки сахарного бульона с добавлением сыворотки или скошенного кровяного агара.

Для идентификации пневмококков и дифференциации их от других видов стрептококков используют следующие тесты:

- гибель белых мышей при введении исследуемого материала и обнаружение капсульных форм пневмококков в мазках-отпечатках из крови, печени, селезенки;

- лизис пневмококков при росте в 10-процентном желчном бульоне или тест с желчными дисками;

- ферментация глюкозы, лактозы, мальтозы, сахарозы пневмококками с образованием кислоты;

- отсутствие роста пневмококков на 5-процентном кровяном агаре, содержащем оптохин в разведении 1:50000, или тест с оптохиновым диском.

Для серологической идентификации пневмококка в Московском НИИВС им. И.И. Мечникова разработаны капсульные сыворотки (18 типов) для применения в реакции агглютинации на стекле.