Методы идентификации и дифференциации микроорганизмов

Методы идентификации основаны на изучении морфологических, культуральных, биохимических, антигенных и фаголитических свойств культур, выросших на питательных средах.

Изучение морфологических свойств осуществляют путем бактериоскопического исследования исходного материала, а также после подращивания на плотных или жидких питательных средах, после визуального изучения выросших колоний. Из исходного материала или из колоний и жидких питательных сред делают мазки на предметных стеклах, фиксируют над пламенем горелки или в жидких фиксаторах (96-градусном спирте, смеси Никифорова) и окрашивают по Граму метиленовой синью или фуксином.

При нахождении в мазках грамположительных кокков типа ланцетовидных диплококков, окруженных зоной неокрасившейся капсулы, можно предположить наличие пневмококков. Если обнаруживают грамположительные кокки, расположенные цепочкой, то можно предположить наличие в исследуемом материале стрептококков. Расположение грамположительных кокков в виде гроздей винограда дает основание предположить наличие стафилококков. Не следует забывать о возможности обнаружения анаэробных кокков. Мелкие грамотрицательные палочки кокковидной формы позволяют предположить наличие гемофильных бактерий. Грамотрицательные палочки различной величины, окруженные капсулой в виде светлого ореола, свидетельствуют о возможности наличия энтеробактер-клебсиелл-серрация. Бескапсульные палочки позволяют предположить присутствие в материале кишечных палочек, протея, палочки сине-зеленого гноя, а также бесспоровых анаэробных палочек. При наличии в мазках грамотрицательных кокков можно думать о наличии нейссерий.

При обнаружении грамположительных длинных палочек в мазках как из исходного материала, так и со среды Тароцци можно предположить наличие споровых анаэробов или аэробов, для идентификации которых следует использовать методы, изложенные в "Руководстве по микробиологической диагностике инфекционных заболеваний" под ред. К.И. Матвеева, М., 1973.

Бактериоскопический диагноз является ориентировочным. Необходимо дальнейшее бактериологическое исследование, включающее посев исходного материала на питательные среды, выделение чистой культуры, ее идентификация и изучение чувствительности к антибиотикам.

Изучение культуральных свойств осуществляется при просмотре колоний, выросших на жидких и плотных питательных средах. При росте на жидких средах отмечают характер роста, степень прозрачности среды, наличие осадка или пленки на поверхности питательных сред. При изучении колоний на плотных питательных средах обращают внимание на размер колоний, их прозрачность, особенности краев колоний, наличие гемолиза и его характер, цвет колоний, наличие пигмента и т.д.

Изучение биохимических свойств основано на выявлении ферментативной, сахаролитической, протеолитической активности, способности утилизировать те или иные питательные вещества в различных (аэробных и анаэробных) условиях культивирования.

Изучение антигенных свойств культур осуществляется при взаимодействии антигенов бактерий с соответствующими антисыворотками в различных серологических реакциях (реакция агглютинации, преципитации, иммунофлюоресценции и т.д.).

Изучение фаголитических свойств основано на способности культур лизироваться под действием специфических фагов в жидких или плотных питательных средах, а также при применении метода фаготипирования культур.

Следует отметить, что изучение антигенных и фаголитических свойств используется главным образом при идентификации патогенных микроорганизмов. В клинической микробиологии эти методы еще недостаточно разработаны и до настоящего времени не получили широкого применения.

На изучении комплекса всех перечисленных выше свойств основаны методы дифференциации и идентификации культур.

После изучения морфологических и культуральных свойств микроорганизмов, выросших на питательных средах в монокультуре, определяют дифференциальные тесты. При росте ассоциаций микроорганизмов предварительно проводят выделение чистой культуры.

Ниже изложены методы идентификации культур, наиболее приемлемые для условий практической работы клинических бактериологических лабораторий и основанные на изучении минимального количества признаков, позволяющих с достаточной достоверностью проводить их идентификацию. В основу дифференциации положены тесты, рекомендованные Bergey's Manual of Determinative Bacteriology (1974) и "Кратким определителем бактерий Берджи" (1980).