1.3.4. Заражение в полость амниона

Для заражения используют эмбрионы 7-12-дневного возраста. Заражение в амниотическую полость проводят открытым или закрытым методом.

Техника открытого метода заражения:

1. Яйцо помещают на подставку и проводят стерилизацию скорлупы в области тупого конца.

2. Над центром воздушного пространства в скорлупе ножницами вырезают окошко величиной 2 см в поперечнике.

3. Осторожно снимают внутренний листок скорлупной оболочки с помощью пинцета, обнажая подлежащую хорионаллантоисую оболочку.

4. Прорезают ножницами небольшое отверстие в хорионаллантоисной оболочке в том месте, где нет кровеносных сосудов, и вводят в прорез глазной пинцет. Пинцетом захватывают оболочку амниона и вытягивают амниотический мешок над поверхностью хорионаллантоисной оболочки.

5. Удерживая амниотическую оболочку в этом положении, производят заражение в полость амниона, вводя шприцем 0,1-0,2 мл разведения вируса.

6. Отверстие в скорлупе закрывают стерильным покровным стеклом, пользуясь для фиксации и герметизации яйца расплавленным парафином.

Заражённые эмбрионы инкубируют в течение 2 суток, выбраковывая погибшие в течение первых суток. Затем эмбрионы выдерживают в течение ночи в холодильнике при 4⁰С.

Техника вскрытия эмбриона при заражении в амниотическую полость:

1. Простерилизовав место предстоящего вскрытия, срезают скорлупу немного выше края воздушного мешка.

2. Прокалывают хорионаллантоисную оболочку пастеровской пипеткой и удаляют аллантоисную жидкость.

3. Захватив пинцетом амниотический мешок, прокалывают его оболочку иглой шприца или пастеровской пипеткой и насасывают амниотическую жидкость (от 0,5 до 1,5 мл). У заражённого эмбриона жидкость должна быть мутной, между тем как у нормального эмбриона она прозрачна.

4. Взятую жидкость переносят в стерильную пробирку. 0,1-0,3 мл засевают в бульон для контроля на бактериологическую стерильность.

1.4. Культивирование вирусов путём заражения лабораторных животных

Восприимчивые к изучаемым вирусам животные называются экспериментальной моделью. Взятые в опыт животные должны быть одного вида, определённого возраста и содержаться в одинаковых условиях.

Таблица 2

Экспериментальные модели для некоторых вирусов

Наименование вируса	Экспериментальная модель
Вирус бешенства Вирус Коксаки Вирус полиомиелита Вирус гриппа Вирус клещевого энцефалита	Мыши, кролики Мыши-сосунки Обезьяны, крысы Мыши, хорьки Мыши

Для вирусологической работы чаще всего используют так называемые «чистые линии» экспериментальных животных. Они обладают однотипной наследственностью, имеют минимальное число латентных инфекций, обладают высокой восприимчивостью к вирусам. Особенно чувствительны к вирусам животные-гнотобионты. Работу животными рекомендуется проводить в настольном боксе или в специальной операционной вивария. Все отходы и трупы погибших животных автоклавируют и сжигают.

Рис. 4. Лабораторное животное

При вирусологических исследованиях применяют подкожное, накожное, внутрикожное, внутримышечное, внутрибрюшинное, внутривенное, пероральное, интраназальное, интрацеребральное заражение лабораторных животных.