- •Раздел 1. Культивирование вирусов
- •1.1. Подготовка материала для вирусологических исследований
- •1.1.1. Правила работы в вирусологической лаборатории
- •1.1.2. Материалы, исследуемые при вирусных инфекциях
- •1.1.3. Обработка вируссодержащего материала
- •1.1.4. Микроскопические методы исследования в вирусологии
- •1.2. Культуры клеток в вирусологии и методы их получения
- •1.2.1. Питательные среды
- •1.2.2. Типы клеточных культур
- •1.3. Культивирование вирусов в развивающихся куриных эмбрионах
- •1.3.1. Строение куриного эмбриона
- •1.3.2. Заражение куриного эмбриона на хорионаллантоисную оболочку
- •1.3.3. Заражение в аллантоиную полость
- •1.3.4. Заражение в полость амниона
- •1.4. Культивирование вирусов путём заражения лабораторных животных
- •1.4.1. Интраназальное заражение
- •1.4.2. Интрацеребральное заражение
- •Раздел 2. Индикация и идентификация вирусов
- •Методы индикации и идентификации вирусов в клеточных культурах
- •2.1.1. Цитопатическое действие (цпд) вируса в культуре клеток
- •2.1.2. Реакция гемадсорбции
- •2.1.3. Метод бляшек
- •2.1.4. Цветная проба
- •Применение реакции гемагглютинации (рга), реакции торможения гемагглютинации (ртга) и биологических моделей для индикации и идентификации вирусов
- •2.2.1. Техника постановки рга
- •2.2.2. Техника постановки ртга
- •2.2.3. Реакция нейтрализации вирусов in vivo
- •2.3. Молекулярно-генетические методы исследования в диагностике вирусных инфекций
- •2.3.1. Молекулярная гибридизация (метод молекулярных зондов)
- •2.3.2. Полимеразная цепная реакция (пцр) или локальная
- •Раздел 1. Культивирование вирусов ……………………………………………4
- •Раздел 2. Индикация и идентификация вирусов………………………………26
2.2.2. Техника постановки ртга
РТГА с целью идентификации вируса гриппа рода А. На плексигласовой доске готовят три ряда двукратных возрастающих разведений (в объёме 0,25 мл) диагностических противогриппозных сывороток А(Н1N1), А(Н2N2) и А(Н3N2) от 1:10 до 1:320 (до титра сывороток). Во все лунки, кроме контрольной, добавляют по 0,25 мл рабочей дозы вируса (разведение 1:40), в котором содержится 4 гемагглютинирующие единицы (табл. 5). После выдерживания реакции в течение 1 часа при комнатной температуре во все лунки добавляют по 0,5 мл 1% взвеси эритроцитов кур. Учёт результатов проводят через 30-40 минут. В примере торможение произошло сывороткой А(Н3N2), следовательно выделен вирус гриппа, принадлежащий к подтипу А(Н3N2).
Таблица 5
Схема постановки РТГА для определения типовой принадлежности
вируса гриппа А
Ингредиенты РТГА в мл |
Номера лунок, разведения иммунной сыворотки |
||||||
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
|
1:10 |
1:20 |
1:40 |
1:80 |
1:160 |
1:320 |
Контр. |
|
Диагностические противогриппозные сыворотки в разведении 1:5 |
0,25 |
0,25 |
0,25 |
|
|
0,25 вылить |
|
Физиологический раствор |
|
0,25 |
0,25 |
0,25 |
0,25 |
0,25 |
0,5 |
Вируссодержащая аллантоисная жидкость в разведении 1:40 |
0,25 |
0,25 |
0,25 |
0,25 |
0,25 |
0,25 |
- |
Взвесь эритроцитов кур 1% |
Выдерживание 1 час при комнатной температуре |
||||||
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
|
Возможный результат Диагности- А(Н1N1) +++ +++ +++ +++ +++ ++ - ческие А(Н2N2) +++ +++ +++ +++ +++ +++ - сыворотки А(Н3N2) - - - - - ++ - (нейтрализация) |
|||||||
РТГА ставят и для определения наличия и титра антител в сыворотке больного. Для этого готовят последовательные двукратные разведения сыворотки в объёме 0,25 мл и соединяют их с 0,25 мл известного антигена (содержащего 4 гемагглютинирующие единицы), чтобы произошла нейтрализация вируса. Затем в пробирки вносят по 0,5 мл взвеси эритроцитов. За титр сыворотки принимают то наибольшее её разведение, в котором ещё наблюдается торможение гемагглютинации (1:160).