§ 4. Качественное определение

Для обнаружения сапонинов в растительном сырье пользуются реакциями, которые можно разделить на три группы: 1) реакции, основанные на физических свойствах сапонинов; 2) реакции, осно­ванные на химических свойствах сапонинов; 3) реакции, основан­ные на биологических свойствах сапонинов.

К первой группе реакций относится реакция (проба) на пено- образование. Это не только чувствительная проба, но и довольно характерная, так как других веществ, обладающих такой способ­ностью к пенообразованию, в растениях не встречается.

Ко второй группе качественных реакций относятся реакции осаждения сапонинов и цветные реакции.

Из водных растворов сапонины осаждаются гидроксидами ба­рия и магния, солями меди, ацетатом свинца. Причем тритерпено- вые сапонины осаждаются средним ацетатом свинца, а стероидные — основным.

Из спиртовых извлечений (или растворов) стероидные сапо­нины и тритерпеновые сапонины выпадают в осадок при добавле­нии спиртового раствора холестерина в виде холестеридов.

Стероидные сапонины, так же как и сердечные гликозиды, дают реакцию Либермана — Бурхарда.

Для качественных реакций готовят водный настой 1 : 10, на­гревая измельченное растительное сырье на водяной бане в тече­ние 10 мин. Настой после охлаждения фильтруют и проводят с ним необходимые реакции.

Учитывая, что многие из перечисленных химических реакций могут давать и другие соединения, проводят еще и биологические испытания.

Большинство сапонинов вызывают гемолиз эритроцитов крови. Для проведения этой реакции из растительного сырья готовят настой на изотоническом растворе.

Методики качественных реакций. Качественные реакции. 1. Реак­ция на пенообразование. Берут две пробирки, в одну приливают 5 мл 0,1 н. НС1, а в другую — 5 мл 0,1 н. NaOH. Затем в обе про­бирки добавляют по 2—3 капли извлечения или раствора сапони­нов и сильно встряхивают. При наличии в сырье тритерпеновых сапонинов в обеих пробирках образуется пена, равная по объему и стойкости. Если сырье содержит сапонины стероидной группы, то в щелочной среде образуется пена в несколько раз больше по объему и стойкости.

2. К 2 мл водного настоя в пробирке прибавляют несколько капель ацетата свинца. Образуется осадок.

3. К 1 мл спиртового раствора сапонинов прибавляют несколько капель 1 %-ного спиртового раствора холестерина. Образуется осадок.

4. Реакция Либермана — Бурхарда. Для проведения этой реак­ции испытываемое вещество растворяют в ледяной уксусной кислоте и добавляют смесь уксусного ангидрида и концентрированной сер­ной кислоты (50 : 1). Через некоторое время развивается окраска от розовой до зеленой и синей.

5. Реакция Лафона. К 2 мл водного настоя прибавляют 1 мл концентрированной серной кислоты, 1 мл этилового спирта и 1 каплю 10%-ного раствора сернокислого железа. При нагревании появ­ляется сине-зеленое окрашивание.

6. К 2 мл водного настоя прибавляют 1 мл 10%-ного раствора нитрата натрия и 1 каплю концентрированной серной кислоты. Появляется кроваво-красное окрашивание.

7. Гемолиз эритроцитов. К 1 мл настоя на изотоническом ра­створе добавляют 1 мл 2%-ной взвеси эритроцитов в изотоническом растворе. Кровь становится прозрачной, ярко-красной (гемолиз).

Методика качественного определения аралозидов в корнях ара­лии маньчжурской (Radix Araliae mandshuricae). 10 г измельчен­ных корней аралии маньчжурской (с погрешностью не более 0,01), проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 1 мм, помещают в шлифовую колбу вместимостью 500 мл, приливают 50 мл хлоро­форма и нагревают на водяной бане с обратным холодильником в течение 1,5 ч (температура бани 60 ^СС). Хлороформное извлече­ние фильтруют через вату и фильтрат отбрасывают. Вату с осадком помещают в колбу с сырьем, снова приливают 50 мл хлороформа, нагревают в течение 1,5 ч. Хлороформное извлечение фильтруют через воронку Бюхнера с бумажным фильтром. Сырье вместе с фильтром переносят в фарфоровую чашку и оставляют стоять на сутки. Затем сырье переносят обратно в колбу, приливают 100 мл метилового спирта. Колбу с содержимым взвешивают, нагревают на водяной бане с обратным холодильником и поддер­живают кипение жидкости в течение 5 ч (кипятят с капиллярами, температура бани 80 °С), по охлаждении колбу с содержимым снова взвешивают, потерю в массе пополняют метиловым спиртом, затем перемешивают и фильтруют через бумажный фильтр (раствор 1). 1 мл раствора 1 разбавляют вдвое метиловым спиртом, получают раствор 2. 0,02 мл раствора 2 наносят микропипеткой на стартовую линию хроматографической пластинки размером 13 X 18 см с за­крепленным слоем силикагеля марки КСК. Одновременно на стар­товую линию той же пластинки в качестве «свидетеля» наносят 0,01 мл 0,5%-ного раствора сапарала в метиловом спирте. Пла- станку сушат в течение 10 мин, затем помещают в хроматографиче- скую камеру со смесью растворителей: безводный хлороформ — метиловый спирт — вода (61 : 32 : 7) и хроматографируют при температуре 20—25 °С. Когда фронт растворителей пройдет 15 см, пластинку вынимают из камеры и влажную опрыскивают 20%-ной H₂S0₄, затем нагревают«.в сушильном шкафу при t = 110 °С в те­чение 10 мин. Аралозиды проявляются в виде пятен вишневого цвета. Допускается наличие посторонних пятен — до шести ве­ществ неустановленной природы: пять пятен, находящихся выше пятна аралозида А и одно пятно ниже аралозида А.

Приготовление хроматографической пластинки. 3 г силикагеля смешивают с 0,3 г сульфата кальция, растирают в ступке, посте­пенно добавляют 10 мл воды, тщательно перемешивают и ровным слоем наносят на стеклянную пластинку размером 13 X 18 см, которую после этого сушат на воздухе в течение суток или в сушильном шкафу при t = 120—140 °С в тече­ние 30—40 мин.

Приготовление 20% -н о й H₂S0₄. К 500 мл воды осторожно при постоянном перемешивании приливают 100 мл концентрированной H₂S0₄- Раствор после охлаждения разбавляют водой до плотности 1,136—1,142.