В. Иммунологический метод диагностики менингококковых заболеваний

Для диагностики менингококковых инфекций помимо классического бактериологического способа используют также различные серологиче­ские реакции, позволяющие обнаружить антигены возбудителя в спинно­мозговой жидкости и в крови. С этой целью применяют реакции коагглютинации, латекс-агглютинации, встречного иммуноэлектрофореза, реакцию пассивной гемагглютинации и эритроиммуноадсорбцию. Последний метод предложен, в частности, для обнаружения полисахаридного антигена серогруппы А (наиболее частого возбудителя менингита). Суть метода за­ключается в том, что луночки полистиролового планшета сенси­билизируют противоменингококковыми антителами, затем в них добав­ляют исследуемый материал, содержащий искомый антиген. Смесь инкубируют при 37°C в течение 30-60 мин для связывания антигена антителами. После отмывания в луночки добавляют эритроцитарный диагностикум (эритроциты, несущие антитела к менингококку группы А). В качестве положительного контроля в одну из луночек добавляют полисахарид группы А, отрицательного - эритроциты без антител. Реакцию учитыва­ют через 20 мин седиментации при 22°C визуально и оценивают по 4-х крестной системе. В случае положительной реакции комплекс антитело-антиген взаимодействует с сенсибилизированными эритроцитами, в ре­зультате образуется гомогенный слой эритроцитов, фиксированных на стенках луночек. При отрицательной реакции эритроциты скатываются на дно, образуя компактный осадок.

Методы микробиологической диагностики пневмококковой инфекции

А. Бактериологический

Материал: мокрота, кровь, гной, экссудат, отделяемое носоглотки, спинномозговая жидкость.

Б. Биологический

Материал, сильно загрязненный, вводят внутрибрюшинно белым мышам
Препарат-оттиск из органов (селезенка и др.) Окраска по Граму и на капсулу	Посев крови, идентификация выделенной культуры

Приложение к ЗАНЯТИЮ 4

А. Фаготипирование стафилококков

Фаготипирование стафилококков, как и многих других возбудителей бактериальных инфекций, проводится исключительно для эпидемиологических целей – для более тонкого типирования возбудителя внутри вида, что помогает найти источник инфекции и определить пути её распространения.

Для типирования патогенных плазмокоагулирующих стафилококков используют международный набор из 23 умеренных бактериофагов. Эти фаги разделены на группы:

1 группа - фаги 29, 52, 52А, 79, 80;

2 группа - фаги ЗА, ЗС, 55, 71;

3 группа - фаги 6, 42Е, 47, 53, 54, 75, 77, 83А, 84, 85;

4 группа - фаги 94 ,95 ,96; и вне групп фаг 81.

Перед работой набор сухих фагов стерильно растворяют в щелочном бульоне (рН-7,6) с 0,4% глюкозы и 0,02% CaCl₂ . В ампулу добав­ляют I мл бульона и получают разведение фага 10^-1. Из этого основно­го разведения готовят два рабочих разведения, соответствующие тест-разведению (ТР) и 100 ТР. Разведение, соответствующее 1 ТР, указано на этикетке фага.

Степень лизиса культуры разными разведениями фага регистрирует­ся по следующей схеме:

++++ сливной, полный лизис,

+++ полусливной лизис (незначительный рост культуры в зоне лизиса),

++ наличие в месте нанесения капли фага свыше 50 колоний фага (пятен лизиса),

+ от 20 до 50 колоний фага,

— полное отсутствие лизиса.

Наивысшее разведение, вызвавшее лизис эталонного штамма на +++, называется тест разведением (I TP) фага. Например, если на этикетке указано, что I ТР данной серии фага 10^-3, то для получения I TP на­до из разведения 10^-1 сделать два последовательных десятикратных раз­ведения, и разведение 10^-3 будет соответствовать I ТР.