И сальмонеллезов

План занятия:

1. Изучение морфологических, культуральных и биохимических свойств бактерий сальмонелл.

2. Бактериологическое исследование крови брюшнотифозного больного. Посев крови на среду с желчью (разбор с демонстрацией).

3. Бактериологическое исследование испражнений брюшнотифозного больного: посев на среду обогащения и дифференциально-диагностические среды (разбор схемы).

4. Реакция Видаля. Постановка реакции агглютинации с O- и Н-диагностикумами. Регистрация результатов реакции Видаля (разбор с демонстрацией).

5. Разбор методов диагностики брюшнотифозного бактерионосительства.

6. Исследование пищевых продуктов на наличие возбудителей пищевых токсикоинфекций (разбор схемы).

7. Исследование пищевых продуктов на наличие энтеротоксигенного стафилококка и обнаружение стафилококкового энтеротоксина. Разбор методов.

8. Бактериологическое исследование испражнений больного при подозрении на кишечную инфекцию (начало). Посев испражнений на дифференциально-диагностические среды.

Методические указания

1. Приготовить препараты-мазки из культур бактерий - возбудителей брюшного тифа, паратифа А, S. enteritidis и кишечной палочки, окрасить по Граму и промикроскопировать. Сравнить морфологию бактерий во всех препаратах и отметить морфологическое сходство их друг с другом. Препараты зарисовать.

Изучить и записать в тетрадь биохимические свойства бактерий тифо-паратифозной группы по готовым демонстрационным наборам посевов на среды "пестрого ряда".

2. Взятая из вены больного кровь в количестве 8-10 мл для выделения гемокультуры засевается в среду с желчью (МПБ + 10 процентов желчи + 1 процент глюкозы + индикатор Андреде).

Посев крови производят непосредственно у постели больного в десятикратный (по отношению к количеству крови) объем питательной среды. Посев помещают в термостат при 37°C, а на следующие сутки производят высев на скошенный агар и на дифференциально-диагностические среды (Левина, Плоскирева, висмут-сульфит-агар, Эндо).

Отметить изменения, наступившие в среде Рапопорт в результате роста возбудителей брюшного тифа (покраснение среды) и паратифов или других возбудителей сальмонеллёзов (покраснение среды и наличие газа). Пересев культуры бактерий со среды Рапопорт на скошенный МПА и среды Плоскирева, Эндо, Левина (демонстрация).

Окончательная идентификация проводится по биохимическим свойствам и антигенным свойствам – агглютинация на стекле с монорецепторными Vi-, О- и Н-сыворотками.

Возбудитель брюшного тифа Salmonella typhi	Возбудитель паратифа А S. paratyphi А
Возбудитель паратифа В S. enteritidis	Кишечная палочка Escherichia coli

3. Испражнения брюшнотифозного больного засевают на одну из сред обогащения (среда магниевая, среда с селенитом) и одновременно на дифференциально-диагностические среды: Эндо, Плоскирева, Левина или висмут-сульфит-агар. Через 8-10 часов инкубирования в термостате со среды обогащения также производится посев на плотную дифференциально-диагностическую среду.

На чашках с посевами находят бесцветные прозрачные колонки, типичные для возбудителей тифо-паратифозной группы. Половину колонии используют для приготовления препарата-мазка (окрасить по Граму), оставшуюся часть колонки засевают на среды "пестрого ряда", среду Пешкова (для исследования подвижности) и на скошенный МПА.

Окончательная идентификация проводится по биохимическим свойствам и антигенным свойствам – агглютинация на стекле с монорецепторными Vi-, О- и Н-сывоторками.