Регистрация результатов реакции Хеддльсона

Номер капли	1	2	3	4
Доза сыворотки
Результат

Заключение __________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

5. Реакция Бюрне. Техника постановки реакции:

а) стерильным тампоном, смоченным спиртом, тщательно дезинфицируют кожу на границе верхней и средней трети передней поверхности предплечья;

б) в шприц с делениями по 0,1 мл и о тонкой иглой набирают бруцеллин (обратить внимание на внешний вид, данные этикетки и срок годности препарата!);

в) держа шприц по возможности параллельно поверхности кожи, вводят иглу внутрикожно. Для этого необходимо держать иглу срезом вверх и толчкообразными движениями насаживать на нее кожу. Когда срез иглы скроется в коже, иглу поворачивают срезом вниз и, осторожно нажимая на поршень, вводят содержимое шприца в кожу (0,1 мл бруцеллина). На месте инъекции должен образоваться небольшой белый волдырь, указывающий на правильное введение препарата;

г) реакцию учитывают дважды: через 24 и 48 часов. В случае положительной реакции (наличие отека и гиперемии) миллиметровой линейкой измеряют размер отека (длина и ширина).

7. Рассмотреть невооруженным глазом и под малым увеличением микроскопа колонии сибиреязвенных палочек (вакцинный штамм СТИ).

Приготовить, окрасить по Граму и зарисовать препарат из культу­ры авирулентного штамма сибиреязвенной палочки.

Бруцеллы Окраска по Граму	Возбудитель сибирской язвы Bacillus anthracis

Методы микробиологической диагностики бруцеллеза а. Бактериологический

Б. Биологический

Материал: загрязненный или с низким содержанием бруцелл
Вводится морской свинке по 1,0 мл подкожно в паховую область
Через 30 дней		Посев материала из органов и лимфатических узлов на питательные среды для выделения чистой культуры
Проба Бюрне	Реакция Райта

В. Серологический

Для диагностики бруцеллеза используются следующие серологические реакции:

А. Для обнаружения антител

1. Реакция Райта (титр антител определяют в международных единицах - МЕ. Диагностическое значение имеет титр антител более 200 МЕ/мл.

2. Реакция Кумбса (для определения неполных антител).

3. Ускоренные реакции: Хеддльсона, роз-бенгал, латекс-агглютинация, непрямая реакция гемолиза (эритроциты сенсибилизируют липополисахаридом бруцелл, добавляют сыворотку больного. Антиген соединяется с антителом и в присутствии комплемента происходит лизис эритроцитов), реакция иммунофлуоресценции (непрямой метод на предметном стекле).

4. Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА).

5. Иммуноферментный метод (ИФМ – лунки сенсибилизируют антигеном).

6. Реакция связывания комплемента.

7. Опсоно-фагоцитарная реакция (ОФР) – прогностическое значение.

Б. Для обнаружения антигена

1. Реакция агрегат-гемагглютинации.

2. Иммуноферментный метод (луночки сенсибилизируют антителами к родоспецифическому антигену бруцелл).

3. РПГА с использованием эритроцитарного диагностикума с моноклональными антителами к родоспецифическому антигену бруцелл.

4. Реакция коагглютинации.

Кроме того, для быстрой диагностики бруцеллеза используют ПЦР.

Г. Аллергический - проба Бюрне

Методы микробиологической диагностики сибирской язвы

А. Бактериологический

Материал: тканевой выпот из-под струпа и со дна язвы,

кровь, мокрота, испражнения.

Б. Биологический

Исследуемый материал (см. метод А)
подкожное заражение белых мышей или морских свинок
Выделение чистой культуры возбудителя и изучение его свойств	Микроскопия препаратов- отпечатков из органов

В. Серологический – реакция термопреципитации Асколи

(для обнаружения специфического антигена возбудителя

в исследуемом материале).

Г. Аллергический – Проба с антраксином.

Контрольные вопросы

Какие виды бруцелл вызывают бруцеллез у человека?

Каковы основные хозяева бруцелл соответствующих видов?

Каковы морфология и культуральные свойства различных видов бруцелл?

Какие свойства бруцелл используются для классификации их на вида и биотипы?

Какой из видов бруцелл наиболее патогенен для человека?

Каковы пути заражения бруцеллезом?

Какие микробиологические методы применяются для диагностики бруцеллеза?

Какой берется от больного материал для выделения возбудителя бруцеллеза? Как осуществляется выделение возбудителя из разного ма­териала?

Какими методами осуществляется серологическая диагностика бру­целлеза? Какова техника постановки серологических реакций?

Каково диагностическое значение реакции Хеддльсона?

Как производится оценка реакции Райта? Какова ее диагностиче­ская ценность?

Как ставится аллергическая проба Бюрне? Через сколько времени и как производится ее оценка?

С какого дня заболевания рекомендуется ставить реакцию Райта и пробу Бюрне?

Что такое бруцеллин и как его получают?

Как производится специфическая профилактика бруцеллеза? Как производится отбор лиц, подлежащих специфической вакцинации?

Какие категории работников подвергаются специфической профи­лактике в первую очередь?

В чем заключается принцип вакцинотерапии бруцеллеза?

Какова методика постановки реакции Кумбса? (см. Часть I, заня­тие 16).

Каковы морфология, культуральные свойства и устойчивость во внешней среде возбудителя сибирской язвы?

Как дифференцируется си­биреязвенная палочка от антракоидов и псевдосибиреязвенных бакте­рий?

Какой материал берется для исследования при сибирской язве?

Какие микробиологические методы используются для диагностики сибирской язвы?

Как осуществляется проверка животного сырья на зараженность си­биреязвенными палочками?

Какой иммунопрепарат используется для специфической терапии си­бирской язвы и как он применяется?

Какие вакцины используются для профилактики сибирской язвы и как они применяются?

Приложение к ЗАНЯТИЮ 2

А. Дифференциальная характеристика видов рода Brucella

Вид	Количество биоваров	Потребность в CO2	Бактериостатическое действие красителей			Активность уреазы	Выделение сероводорода	Агглютинация сыворотками		Отношение к тбилисскому фагу
			Фуксин 1:50000	Тионин 1:25000	Сафранин 1:20000			Антиабортус	Антимелитензис
B. melitensis	3	–	+	+	+	++ (2 час)	–	–	+	–
B. abortus	9	+	+	–	+	+ (18-20 час)	±	+	–	+
B. suis	4	–	–	+	–	+++ (15-20 мин)	++	+	+	–
B. rangiferis	1	–	–	+	–	+++ (8-13 мин)	–	–	–	–
B. neotomae	1	–	–	–	–		+	+	–
B. ovis	1	+	+	+			–	–	–
B. canis	1	–	–	+			–	–	–

Обозначения: + - наличие роста, выделение уреазы, сероводорода, агглютинабельность сыворотками, лизис фагом;

— - отсутствие роста, выделения уреазы, сероводорода, агглютинабельности сыворотками, лизиса фагом.

Б. Основные дифференциальные признаки Bacillus anthracis и Bacillus anthraсоides

Вид микроорганизма	Подвижность	Капсуло- образование	Гемолиз	Патогенность для морских свинок и кроликов
Bacillus anthracis	–	+	–	+
Bacillus anthraсоides	– (– +)	–	+	–

В. Факторы патогенности и генетический контроль их синтеза

у возбудителя сибирской язвы

Основными факторами патогенности сибиреязвенной палочки, которые определяют патогенез заболевания, являются сложнокомпонентный экзотоксин и капсула.

Синтез сложного токсина контролируется плазмидой pXO1, имеющей молекулярную массу 110-114 МД. В составе плазмиды pXO1 имеется три гена, определяющих синтез основных компонентов экзотоксина:

ген cya-ОФ, определяет синтез фактора отечности

ген pag-ПА, определяет синтез протективного антигена

ген lef-ЛФ, определяет синтез летального фактора

Продуктом гена суа-ОФ является аденилатциклаза, катализирующая накопление в клетках эукариотов цАМФ.

Синтез капсулы сибиреязвенной палочкой контролируется плазмидой рХO2, имеющей м.м. 60 МД. Капсула чисто полипептидной природы (полиглютаминовая кислота) – единственная в мире микробов.

З А Н Я Т И Е 3

Дата ______________

Тема: Микробиологическая диагностика гнойно-воспалительных