А. Метод колициногенотипирования

Метод колициногенотипирования разработан английскими исследователями Абботом и Шенноном (1958) и основан на определении колициногенотипов шигелл Зонне по действию этих бактерий на 15 индикаторных культур, из которых 13 принадлежит к виду шигелл Зонне, 1 - S. dysenteriae 2 (Штуцера-Шмитца) и 1 - Escherichia сoli К-12 ROW.

С помощью этого набора индикаторных культур в настоящее время выявлено 17 колициногенных типов бактерий Зонне.

Испытываемую культуру сеют на МПА с генцианвиолетом двумя линейными штрихами параллельно диаметру чашки. После инкубирования при 37°C в течение 48 часов выросшую культуру убивают парами хлороформа и удаляют с поверхности среды узким краем стерильного шлифованного предметного стекла. На поверхность агара наносят свежие культуры индикаторных штаммов в виде линейных штрихов, пересекающих линии посева исследуемой культуры. Посевы индикаторных штаммов инкубируют 18-20 часов при 37°C и производят учет результатов по наличию или отсутствию зон торможения роста индикаторных культур и их размерам.

Регистрируют результаты следующими условными обозначениями:

++++ - зона торможения 15-20 мм;

+++ - зона торможения 10-15 мм;

++ - зона торможения более 5 мм;

+ - зона торможения 4-5 мм;

± - зона торможения меньше 4 мм;

- - отсутствие зоны торможения.

Полученный спектр действия исследуемой культуры на индикаторные штаммы сопоставляют со стандартной схемой титрования и присваивают этой культуре соответствующий колициногенотип.

Типовые и индикаторные культуры набора Абботта и Шеннона для колициногенотипирования шигелл Зонне

Типовые колициногенные культуры		Индикаторные культуры
Наименование штамма	Колициногенотип	Наименование штамма	Оригинальный № по схеме Абботта и Шеннона	Регистрационный № по списку Интернационального центра по шигеллам в Лондоне
S. sonnei	1A	S. sonnei	2	100031
S. sonnei	1B	S. sonnei	56	100032
S. sonnei	2	S. sonnei	17	100033
S. sonnei	3	S. sonnei	2M	100034
S. sonnei	3A	S. sonnei	38	100035
S. sonnei	4	S. sonnei	56/56	100036
S. sonnei	5	S. sonnei	56/98	100037
S. sonnei	6	S. sonnei	R 1	100038
S. sonnei	7	S. sonnei	R 6	100039
S. sonnei	8	S. dysenteriae 2	M 19	CTC8218
S. sonnei	9	S. sonnei	2/7	100040
S. sonnei	10	S. sonnei	2/64	100041
S. sonnei	11	S. sonnei	2/15	100042
S. sonnei	12	S. sonnei	R5	100043
S. sonnei	13	E. coli K-12	ROW	100044
S. sonnei	14
S. sonnei	15

Схема колициногенотипирования шигелл Зонне по Абботту и Шеннону

	Индикаторные культуры
	2	56	17	2M	38	56/56	56/98	R 1	R 6	M 19	2/7	2/64	2/15	R5	ROW
1A	+	+	+	-	-	+	+	-	-	+	-	-	-	-	+
1B	+	+	+	-	-	+	+	-	+	+	-	-	-	-	+
2	-	+	+	-	-	-	-	-	+	-	-	-	-	-	+
3	+	+	+	-	+	+	+	+	+	+	+	+	+	+	+
3A	+	+	+	-	+	+	+	+	+	-	+	+	+	+	+
4	+	+	+	V	+	-	-	+	+	-	+	+	+	-	+
5	+	+	+	V	+	+	+	+	+	+	+	+	+	-	+
6	-	+	-	-	-	+	+	-	+	-	-	-	-	-	+
7	-	-	+	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
8	+	-	+	-	+	-	-	+	-	-	-	-	+	-	+
9	+	+	+	-	V	+	+	+	+	-	-	-	+	-	+
10	+	+	+	-	+	+	+	+	+	+	-	-	+	-	+
11	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	+
12	+	+	-	-	+	+	+	+	+	-	-	-	+	-	+
13	-	+	+	-	-	+	+	-	+	-	-	-	-	-	+
14	+	+	+	V	+	+	+	+	+	-	+	+	+	-	+
15	+	-	+	+	+	-	-	+	-	-	+	+	+	+	+

Обозначения: + наличие зоны торможения индикаторных штаммов; - отсутствие зоны торможения; V – вариабельные результаты.