В. Классификация пищевых отравлений

Г. Классификация сальмонелл (Salmonella)

Род сальмонелл включает свыше 2000 серовариантов.

Род Salmonella включает единственный вид S. enterica (ра­нее  S. choleraesuis) с семью основными подвидами: S. enterica, S. salamae, S. ari­zonae, S. diarizonae, S. houtenae, S. bongori, S. indica, которые различаются по ряду биохимических признаков (см. табл.).

Основные биохимические признаки	Подвиды
	S. enterica	S. salamae	S. arisonae	S. diarisonae	S. houtenae	S. bonhori	S. indica
Лактоза	-	-	+	+	-	-	-
Салицин	-	-	-	-	+	?	?
Дульцит	+	+	-	-	-	+	×
Желатин	-	+	+	+	+	?	?
d-тартрат	+	- или×	- или×	- или×	- или×	- или×	+
Малонат	-	+	+	+	-	-
KCN	-	-	-	-	+	+	-
Тест на β-галактозидазу	-	- или×	+	+	-	+	×

Примечание: × - ферментация поздно.

З А Н Я Т И Е 9

Дата ______________

Тема: Микробиологическая диагностика дизентерии и эшерихиозов

План занятия:

1. Изучение морфологии, культуральных и биохимических свойств дизентерийных бактерий.

2. Исследование испражнений больного дизентерией - посев на среду Плоскирева. Пересев подозрительной колонии на МПА, среду Ресселя и среды "пестрого ряда". Агглютинация культуры поливалентными и монорецепторными видовыми, типовыми и групповыми сывортками (разбор схемы).

3. Изучение морфологии, культуральных и биохимических свойств диареегенных кишечных палочек.

4. Исследование испражнений больного эшерихиозом ребёнка - посев на дифференциально-диагностические среды. Пересев подозрительной колонии на МПА, среду Ресселя и среды "пестрого ряда". Агглютинация культуры поливалентными и монорецепторными видовыми, типовыми и групповыми сыворотками (разбор схемы).

5. Бактериологическая диагностика кишечной инфекции (продолжение). Регистрация результатов посева, сделанного на прошлом занятии. Посев на «пестрый ряд», МПА, среду Пешкова.

Методические указания

1. Приготовить препараты-мазки из культур разных видов шигелл, окрасить по Граму и промикроскопировать. Сравнить морфологию бактерий во всех препаратах и отметить морфологическое сходство их друг с другом. Препараты зарисовать. Изучить биохимические свойства дизентерийных бактерий по демонстрационным наборам сред "пестрого ряда". Разобрать особенности антигенного строения и принципы современной классификации шигелл.

2. Производят посев испражнений больного дизентерией на чашки с дифференциально-диагностической средой Плоскирева. Бактериальной петлей каплю испражнений нанести на пластинку бактоагара Плоскирева и тщательно рассевают штриховым способом. На следующий день находят колонии, подозрительные на дизентерийные (бесцветные, прозрачные). Часть колонии микроскопируют с окраской по Граму, а оставшуюся часть засевают на скошенный МПА, среду Ресселя, среду Пешкова для определения подвижности и среды "пестрого ряда". Затем идентифицируют по антигенным свойствам реакцией агглютинации на стекле, используя видовые, типовые и групповые поливалентные и монорецепторные сыворотки. Для эпидемиологических целей у шигеллы Зонне проводят фаготипирование, хемотипирование или колициногено-/колицинотипирование.

3. Приготовить препараты-мазки из культуры кишечной палочки, окрасить по Граму и промикроскопировать. Препарат зарисовать. Изучить биохимические свойства кишечной палочки по демонстрационному набору сред "пестрого ряда". Разобрать особенности антигенного строения и принципы современной классификации E.coli.

Shigella sonnei	Shigella flexneri	Escherichia coli	Микроскопия подозрительной колонии
Окраска по Граму

4. Производят посев испражнений ребенка, больного эшерихиозом, на чашки с дифференциально-диагностическими средами Эндо и Левина. Диареегенная кишечная палочка ни по культуральным, ни по биохимическим свойствам не отличается от непатогенной, отличается наличием определенных факторов патогенности и принадлежностью к вполне определенным серогруппам и сероварам. Поэтому отбор подозрительных колоний со сред Эндо или Левина проводят по результатам реакции агглютинации на стекле с поливалентной ОКА-сывороткой (проверяют не менее 10 одинаковых колоний); колонию, давшую четкую агглютинацию, отсевают для накопления чистой культуры. Далее проверяют развернутые биохимические свойства и определяют принадлежность к серогруппе реакцией агглютинации на стекле живой (за счет К-антигена) и гретой (за счет О-антигена) культуры с поливалентными (ОКВ, ОКС, ОКD, ОКЕ) сыворотками. Принадлежность к серовару (серотипу) определяют в живой культуре с помощью Н-сывороток.

5. Найти на чашке с дифференциально-диагностической средой подозрительные лактозонегативные колонии, из части колонии приготовить препарат-мазок, окрасить по Граму и промикроскопировать. Оставшуюся часть колонии пересеять на скошенный МПА, среды «пестрого ряда» и среду Пешкова. Посевы поместить в термостат.

Контрольные вопросы

Какие микроорганизмы являются возбудителями дизентерии?

Какие принципы используют для классификации возбудителей дизентерии?

Как отличаются различные виды дизентерийных бактерий по биохимическим свойствам?

Каковы особенности антигенного строения бактерий вида Зонне?

Каковы особенности антигенного строения бактерий вида Флекснера?

По каким признакам бактерии вида Флекснера подразделяются на серовары и подсеровары?

Каковы особенности антигенного строения бактерий вида Бойда?

Каковы особенности патогенеза дизентерии?

Какие микробиологические методы используются для диагностики дизентерии?

Какой материал исследуется для выделения возбудителей дизентерии и на какие питательные среды его засевают?

Где в организме больного локализуется возбудитель дизентерии?

Как следует брать материал от больного дизентерией?

По каким признакам идентифицируют возбудителей дизентерии?

Каково различие между типовыми и групповыми диагностическими агглютинирующими дизентерийными сыворотками?

Для чего необходимо серологическое типирование возбудителей?

Какова методика кератоконьюктивальной пробы и каково ее значение?

Каковы методика и цель определения чувствительности дизентерийных бактерий к антибиотикам?

В каких случаях и как применяют дизентерийный бактериофаг?

В чем заключается сущность методов определения чувствительности бактерий Зонне к колицинам и типов колицинов, продуцируемых шигеллами?

Как ставится аллергическая проба Цуверкалова?

Чем обусловлена вирулентность дизентерийных бактерий?

Какие микроорганизмы являются основными представителями нормальной кишечной микрофлоры?

Какое значение имеет кишечная микрофлора для организма человека?

В каких случаях возникает дисбактериоз?

Какие препараты применяют для восстановления состава нормальной микрофлоры кишечника?

Почему кишечную палочку считают санитарно-показательным микроорганизмом при загрязнении внешней среды?

Что такое коли-титр и коли-индекс?

Каково антигенное строение кишечной палочки?

Как выделяют чистую культуру диареегенной кишечной палочки?

Какой антиген (O или К) определяют в реакции агглютинации с живой культурой?

Как обнаруживают специфический O-антиген у кишечной палочки?

По какому антигену окончательно судят о принадлежности бактерий к патогенному серовару?

Что собой представляют колицины и какое значение имеет определение их типа?

На какие категории и по каким признакам подразделяют диареегенные кишечные палочки?

Какими факторами патогенности обладают энтеротоксигенные кишечные палочки? Каков генетический контроль их синтеза?

Чем обусловлена патогенность энтеропатогенных кишечных палочек?

Чем обусловлена патогенность энтероинвазивных кишечных палочек?

Чем объясняется некоторое антигенное и патогенное сходство энтероинвазивных кишечных палочек и шигелл?

С чем связана патогенность знтерогеморрагических кишечных палочек?

Каков генетический контроль биосинтеза шигаподобных экзотоксинов у энтерогеморрагических вариантов кишечной палочки?

Каков механизм действия термостабильных и термолабильных энтеротокоинов?

Какова молекулярная структура энтеротоксинов?

Каковы основные способы заражения диареегенными кишечными палочками?

Какие категории диареегенных кишечных палочек чаше всего вызывают внутрибольничные вспышки?

Можно ли отличить колонии диареегенных кишечных палочек от колоний непатогенных кишечных палочек на дифференциально-диагностических средах? Если можно, то в каких случаях?

Методы микробиологической диагностики дизентерии

А. Бактериологический

Испражнения

Б. Аллергический

Внутрикожная проба с дизентерином (проба Цуверкалова).

Бактериологическое исследование испражнений при эшерихиозах

Испражнения

Классификация бактерий рода Shigella

Подгруппа и ее характеристика	Вид и серовары	Подсеровары	Антигенная формула
			Типовой антиген	Групповые антигены
Подгруппа А. Не ферментирует маннита. Серологически каждый серовар отличается от других.	S. dysenterica 1
	2
	3
	4
	5
	6
	7
	8
	9
	10
	11
	12
Подгруппа В. Обычно ферментируют манит. Серологически серовары родственны друг другу.	S. flexneri 1	1а	1	2,4
		1в	1:S	6:2,4
	2	2а 2в	2	3,4
			2	7,8
	3	3а 3в 3с	3	6:7,8
			3	6:3,4
			3	6
	4	4а 4в	4	В:3,4
			4	В:6:3,4
	5		5	7,8
			5	(3,4)
	6	Некоторые штаммы ферментируют глюкозу и маннит с образованием кислоты и газа	6	2,4
	Вариант X		-	7,8
	Вариант Y		-	3,4
Подгруппа С. Обычно ферментируют манит. Серологически серовары отличаются друг от друга.	S. boydii Серовары 1-18 (16-18 – провизорные штаммы, не патогенны)
Подгруппа D. Обычно ферментируют манит, поздно лактозу и сахарозу.	S. sonnei Обычно вырастают колонии двух фаз – мелкие (имеют плазмиду), крупные, плоские (не имеют плазмиды)

Приложение к ЗАНЯТИЮ 9