Глава 5. Материалы и методы исследования

5.1. Определение в крови содержания метгемоглобина по л.Э. Горну

Метод основан на фотометрическом определении разницы светопоглощения растворов окси- и метгемоглобина.

Материалом для исследований служили эритроциты практически здоровых людей (10 человек) – доноров станции переливания крови.

Для определения метгемоглобина в крови использовался универсальный спектрофотометр,раствор аммиака 0,04%, свежеприготовленный насыщенный раствор красной кровяной соли.

5.1.1. Проведение анализа

В две пробирки наливали по 3,5 и 7,3 мл раствора аммиака и в каждую из них вносили по 0,2 мл крови. Во вторую пробирку, предназначенную для определения общего гемоглобина, добавляли одну каплю раствора красной кровяной соли (перевод всего гемоглобина в метгемоглобин) и оставляли пробу на 1 час для завершения реакции. Через час фотометрировали обе пробы в кюветах 10 мм против дистиллированной воды при светофильтре N 3 (М-61, эффективная длина волны 619 мкм). Содержание метгемоглобина вычисляли по формуле:

E исследуемого HbO + MtHb2

% MtHb = 59 x - 18.

E общего Hb

5.1.2. Методические замечания

Предлагаемый метод прост, быстр, не требует дефицитных приборов и реактивов. Численные коэффициенты в расчетной формуле требуют периодической проверки и коррекции. При хранении проб в темноте, в закрытых пробирках, фотометрирование без ущерба для точности результата может быть проведено через несколько часов после взятия крови. Приведенная формула применима только при фотометрировании на указанных приборах. Использование фотоэлектроколориметров из-за широкополосности находящихся в них светофильтров не рекомендуется, т.к. чувствительность метода при этом падает в 2 - 3 раза, а ошибка определения соответственно возрастает.

Глава 6. Результаты и их обсуждение

Как показали результаты исследований, содержание метгемоглобина в эритроцитах практически здоровых людей находятся в пределах нормы.

Оценка результатов

Образцы крови доноров	Значения величин оптической плотности HbO2 + MtHb					Среднее из пяти отсчетов значение оптической плотности
	1сек.	2 сек.	3 сек.	4 сек.	5 сек.
№1	0,250	0,250	0,251	0,250	0,250		0,250
№2	0,222	0,221	0,220	0,223	0,222		0,222
№3	0,242	0,241	0,242	0,241	0,242		0,242
№4	0,234	0,234	0,235	0,233	0,234		0,234
№5	0,225	0,226	0,223	0,225	0,223		0,224
№6	0,213	0,215	0,216	0,213	0,213		0,214
№7	0,201	0,204	0,203	0,204	0,201		0,203
№ 8	0,240	0,240	0,241	0,240	0,240		0,240
№9	0,236	0,234	0,237	0,236	0,235		0,236
№10	0,242	0,240	0,240	0,240	0,239		0,241

Таблица 4. Определение оптической плотности HbO2 + MtHb

Образцы крови доноров	Значения величин оптической плотности общего Hb					Среднее из пяти отсчетов значение оптической плотности
	1сек.	2 сек.	3 сек.	4 сек.	5 сек.
№1	0,661	0,661	0,661	0,682	0,682		0,681
№2	0,700	0,700	0,700	0,701	0,700		0,701
№3	0,670	0,671	0,670	0,672	0,670		0,671
№4	0,700	0,700	0,701	0,702	0,700		0,701
№5	0,652	0,652	0,651	0,652	0,651		0,652
№6	0,665	0,665	0,667	0,664	0,665		0,665
№7	0,639	0,639	0,640	0,641	0,638		0,639
№ 8	0,680	0,682	0,683	0,680	0,680		0,681
№9	0,698	0,698	0,697	0,698	0,699		0,698
№10	0,702	0,700	0,700	0,701	0,702		0,701

Таблица 5. Содержание метгемоглобина в образцах крови доноров станции переливания крови

Образцы крови доноров	Содержание MtHb(%) в крови
№1	3,65
№2	0,71
№3	3,3
№4	1,7
№5	2,30
№6	0,99
№7	0,74
№8	2,79
№9	1,86
№10	2,20