Методы определения группы крови по системе аво При помощи стандартных сывороток

Способ позволяет установить групповые агглютиногены, которые находятся на эритроцитах исследуемой крови.

На планшет возле предварительно маркированных обозначений на-носят по одной большой капле (0,1 мл) стандартной сыворотки групп О (I) аb, А (II) b, В (III) а. Поскольку используется две серии каждой сыворотки в два ряда, капель получается 6. Седьмая капля сыворотки четвертой группы наносится отдельно в соответствующую лунку. Сыворотку набирают пипеткой из соответствующего флакона, которую тотчас же после использования опускают обратно.

Шесть маленьких капель исследуемой крови (0,01мл) последовательно переносят сухой стеклянной палочкой в лунки, рядом с каплей сыворотки.

Отдельными для каждой группы крови палочками смешивают сыворотки и каплю крови до гомогенного окрашивания в красный цвет.

После размешивания планшет покачивают 1-2 мил. Через 3 мин. добавляют по капле (0,05 мл) изотонического раствора.

Трактовка реакции происходит через 5 мин. Появившиеся в каждой лунке красные зернышки (агглютинаты), говорят о положительной реакции изогемагглютинации. При отрицательной реакции сыворотка остается равномерно окрашенной. Результаты реакций в каплях одной и той же группы (двух серий) должны совпадать

1. если сыворотки всех трех групп дали отрицательную реакцию, т.е. смеси остались равномерно окрашенными без признаков агглютинации, то испытуемая кровь не содержит агглютиногенов, т.е принадлежит к группе О (I) аb;

2. если сыворотки групп О (I) аB и В (III) а дали положительную реакцию, а сыворотка группы А (II) b - отрицательную, то испытуемая кровь содержит агглютиноген А, т.е. принадлежит к группе А (II) b;

3. если сыворотки групп О (I) аb и А (И) р дали положительную реакцию, а сыворотка группы В (III) а - отрицательную, то испытуемая кровь содержит агглютиноген В, т.е. принадлежит к группе В (III) а;

4. если сыворотки всех трех групп дали положительную реакцию, это указывает на то, что испытуемая кровь содержит оба агглютиногена А и В, т.е. принадлежит к группе АВ (IV) а. Однако, в этом случае для исключения неспецифической агглютинабельности исследуемых эритроцитов, необходимо провести дополнительное контрольное ис-следование со стандартной сывороткой группы ABO (IV). Для этого на пластинку наносят большую (0,1 мл) каплю сыворотки группы АВ (IV) и к ней добавляют маленькую (0,01 мл) каплю исследуемой крови. Перемешивают, после чего наблюдают за результатом в течении

5 минут при покачивании пластинки. Лишь в отсутствие агглютинации в этой капле при наличии ее в каплях, содержащих стандартные сыворотки группы О (I) аа, А (И) b и В (III) а, можно считать реакцию специфической и отнести исследуемую кровь к группе ABO (IV).

Определение группы крови перекрестным способом (при помощи стандартных сывороток и стандартных эритроцитов).

1. Под предварительно сделанными обозначениями на пластинку наносят по одной большой капле (0,1 мл) стандартных сывороток групп О (I) аb, А (II) b, В (III) а. Поскольку используют стандартные сыворотки двух различных серий каждой группы, всего получается 6 капель, которые образуют 2 ряда по 3 капли.

2. На нижнюю часть пластинки также под соответствующими обозначениями наносят по одной маленькой капле (0,01 мл) стандартных эритроцитов в следующем порядке: О (I) аb, А (II) b, В (III) а.

3. Наносят по большой капле (0,1 мл) сыворотки больного на подготовленные стандартные эритроциты. После со дна пробирки той же пипеткой набирают эритроциты испытуемой крови и капают по маленькой капле (0,01 мл) в 6 точек рядом с каждой каплей стандартной сыворотки.

4. Во всех каплях сыворотку тщательно перемешивают с эритроцитами, пластинку покачивают периодически через 1-2 мин.

5. Через 3 мин в те капли, где наступила агглютинация, добавляют изотонический раствор. Трактуется результат через 5 мин.

Трактовка проводится путем оценки и сопоставления результатов, полученных при помощи стандартных сывороток (два верхних ряда) и при помощи стандартных эритроцитов (нижний ряд). Результаты должны совпадать, т.е. указывать на содержание агглютининов и агглютиногенов, соответствующих одной и той же группе крови. Эти результаты могут быть выражены в трех различных комбинациях:

1. реакция со стандартными сыворотками (два верхних ряда) указывает на отсутствие групповых агглютиногенов, т.е. испытуемая кровь соответствует О (I) аb группе. При этом сыворотка испытуемой крови (нижний ряд) дает отрицательную реакцию со стандартными эритроцитами группы О (I) аb и положительную - со стандартными эритроцитами группы А (II) а и В (III) а. Это указывает на наличие в испытуемой крови агглютининов аир, т.е. подтверждает принадлежность испытуемой крови к группе О (I) аb;

2. при помощи стандартных сывороток (два верхних ряда) в испытуемой крови устанавливают наличие агглютиногена А, При этом сыворотка испытуемой крови (нижний ряд) дает отрицательную реакцию со стандартными эритроцитами групп О (I) а (и А (II) b, но положи-тельную с эритроцитами группы В (III) а. Это указывает на наличие в испытуемой крови агглютинина B, т.е. подтверждает принадлежность испытуемой крови к группе А (II) b;

3. при помощи стандартных сывороток (два верхних ряда) в испытуемой крови устанавливают наличие агглютиногена В. При этом сыворотка испытуемой крови (нижний ряд) дает отрицательную реакцию со стандартными эритроцитами групп О (I) аb и В (III) а, но положительную с эритроцитами группы А (II) b. Это указывает на наличие в испытуемой крови агглютинина а, т.е. подтверждает принадлежность испытуемой крови к группе В (III) а;

4. при помощи стандартных сывороток (два верхних ряда) в испытуемой крови устанавливают наличие агглютиногенов А и В. При этом сыворотка испытуемой крови (нижний ряд) дает отрицательную ре-акцию со стандартными эритроцитами всех трех групп. Это указывает на отсутствие в крови агглютининов, т.е. подтверждает принадлежность испытуемой крови к группе АВ (IV).