Консервирование материала в жидкостях

К консервированию фитопатологического материала в жидкостях прибегают в тех случаях, когда иными способами сохранить материал трудно или невозможно (пораженные органы растений с нежными, сочными, мя­систыми тканями).

Консервирование ведут в емкостях из прозрачного неокрашенного материала. Лучшими для этих целей являются специальные коллекционные стеклянные сосуды-цилиндры с притертыми пластинами-крышками-пробка­ми. В ряде случаев можно использовать также поли­этиленовые мешочки, которые перед употреблением обя­зательно проверяют на целостность раздуванием или наполнением водой. Чтобы частично предохранить образцы в мешочках от механических повреждений, их завя­зывают в раздутом состоянии. Для этого края мешочка перед завязыванием плотно прикладывают друг к дру­гу и затем несколько раз подвертывают.

В одну емкость помещают образцы одного вида. Вместе с образцами внутрь вкладывают этикетку.

Следует помнить, что при использовании консерви­рующих жидкостей из тканей высвобождается вода и пигменты; раствор, особенно в начальный период, быст­ро портится. Для того чтобы предотвратить порчу об­ разцов, обычно первую смену консервирующей жидкости делают через 1 сутки после первой заливки. Доступны­ми консервирующими жидкостями являются водные рас­творы спирта, формалина, поваренной соли, медного купороса.

Образцы с сочными мясистыми тканями (поражен­ные луковицы, клубни, корневища и т. п.) сохраняют в 70%-ном спирте или 5%-ном формалине.

Для сохранения образцов ярко-зеленого, желтого цвета используют раствор медного купороса слабой кон­центрации (1%-ный).

Длительное время естественная окраска у плодов сохраняется в насыщенном водном растворе английской соли, особенно если они находятся в прохладном затем­ненном помещении. Помутневший и потерявший свою концентрацию этиловый спирт через 2—3 недели заме­няют новым, а испорченный, после перегонки, исполь­зуют вновь. При консервировании образцов с зеленой окраской лучше избегать спиртовых растворов, так как они интенсивно обесцвечивают ткани. Формалин как консервирующее средство дешевле спирта, расходуется в небольшом количестве, медленнее испаряется, но легко замерзает и ядовит. Работать с ним нужно осторожно.

Хорошо сохраняется внешний вид и окраска у фитопатологического материала (за исключением образ­цов со значительным содержанием дубильных веществ и шляпочных грибов), законсервированного способом А. А. Ячевского. Консервируемый объект опускают на 1—2 минуты в кипящий 1%-ный раствор медного купо­роса, затем промывают в холодной воде и заливают раствором следующего состава: лактофенол — 5 г, ук­суснокислая медь — 0,2 г, вода — 95 мл. Для приготов­ления лактофенола берут 1 часть молочной кислоты, 1 часть кристаллической карболовой кислоты, 2 части глицерина и 1 часть воды. Лактофенол, приготовленный впрок, хранят в темных бутылях с хорошей укупоркой.

Для сохранения зеленой окраски образцы кипятят 1—2 минуты (до возвращения зеленого цвета) в смеси, состоящей из 1 части ледяной уксусной кислоты, насы­щенной кристаллическим ацетатом меди, и 4 частей воды, а затем помещают в 5%-ный формалин. Для тех же целей материал выдерживают 6—24 часа в 5% -ном растворе сульфата меди, промывают и хранят в раство­ре сернистой кислоты (2 мл кислоты на 1000 мл во­ды).

Естественный красный и темный цвет сохраняется лучше, если к формалину добавлен раствор мышьяко­вой кислоты: (1 часть кислоты на 100 частей воды). Этот раствор добавляют к формалину в соотношении 1 : 20 или 1 : 30. Замену растворов, приготовленных на основе формалина, производят примерно через 8 не­дель. Еще медленнее обесцвечиваются образцы с зеле­ной окраской, если формалин разбавлен 5%-ным вод­ным раствором медного купороса.

Доступным консервирующим средством является 8—9%-ный профильтрованный водный раствор поварен­ной соли. Для лучшей сохранности зеленой окраски к раствору соли прибавляют несколько кристаллов бор­ной или, что еще лучше, салициловой кислоты. Соляной раствор применяется при консервировании мягкомясистых плодовых тел шляпочных грибов (особенно темно- окрашенных), образцов поражений с сочными тканями. При консервировании грибов в каждую емкость добав­ляют несколько капель карболовой кислоты. Крупные грибы хорошо сохраняются также в растворе сулемы, 10%-ном формалине, в насыщенном растворе калиевых квасцов, в спирте с примесью формалина до 5%. При приготовлении раствора сулемы 5 г ее предварительно разбавляют в 100 мл спирта и затем вливают в 1000 мл воды. Чтобы жидкость лучше проникла внутрь тканей, делают несколько уколов тонкой проволокой.

Для длительного хранения применяются консерви­рующие жидкости сложного состава, рецепты которых приводятся ниже.

Жидкость Геслера для окрашенных фруктов:

50 г;

25 мл;

25 г;

1000 мл.

хлорид цинка формалин (40%-ный) глицерин пода

Жидкость для хранения музейных образцов (в мл):

25;

150;

1000 мл.

формалин (40%-ный) спирт (95%-ный) вода

Раствор Кноппа:

0,5 г; 0,125 г; 0,125 г; 0,125 г; одна капля; - 1000 нитрат кальция нитрат калия сульфат магния фосфат калия хлорид железа вода дистиллированная

Для длительного хранения применяется также смесь следующего состава:

сульфат меди негашеная известь вода -272 г);

180 г;

180 г (пли гашеная известь- 22,7 л.

Сульфат меди растворяют в течение 10—12 часов в 2 л воды, известь гасят в 20,7 л воды и пропускают че­рез тонкое сито. Затем раствор сульфата меди осторожно вливают в известковое молоко. Используется только свежеприготовленная смесь.

Плодовые тела мягко мясистых шляпочных грибов с нерастворимыми в воде пигментами хорошо сохра­нять в растворе следующего состава:

10 г;

5 мл;

1000 мл.

ацетат ртути

ледяная уксусная кислота

вода

Если ткани грибов содержат водно-растворимые пигменты, применяется одна из следующих жидкостей:

1 г;

10 г;

10 мл;

1000 мл;

25 г;

10 мл;

1000 мл.

1) ацетат ртути нейтральный ацетат свинца

ледяная уксусная

кислота

спирт (90%-ный)

2) сульфаты цинка формалин (40%-ный) вода

Окраска у шляпочных грибов довольно хорошо со­храняется в консервирующей жидкости, в состав кото­рой входят:

120 г;

60 г;

0,5—0,6 г;

2,5 л.

поваренная соль

квасцы

сулема

вода

Раствор следует периодически менять. Груши, сли­вы и другие сочные пораженные плоды сохраняют в растворе следующего состава (в г) :

3; 3;

750; Ю; - 750.

уксуснокислая медь хлорная медь камфорная вода уксусная кислота дистиллированная вода

При приготовлении раствора берут половинное ко­личество воды (375 г) и растворяют в ней 3 г уксусно­кислой меди. В другой половине воды растворяют 3 г хлорной меди, оба раствора смешивают и добавляют вначале 10 г уксусной кислоты, затем 750 г камфор­ной воды (воду настаивают на избыточном количестве камфоры). Приготовленную консервирующую жидкость фильтруют.

До окончательного оформления образцы в стеклян­ной или иной посуде хранят в специальных закрываю­щихся ящиках с гнездами, которые помещаются в тем­ное, прохладное место.

ОФОРМЛЕНИЕ, СИСТЕМАТИЗАЦИЯ И ХРАНЕНИЕ КОЛЛЕКЦИОННОГО МАТЕРИАЛА

Оформление коллекционного материала

Перед окончательным монтированием гербария ма­териал целесообразно подвергнуть специальной обработ­ке для уничтожения случайно попавших в него насеко­мых-разрушителей, предотвращения плесневения и за­гнивания.

Протравливание материала проводят спиртовым раствором сулемы. Сулему кладут в 95%-ный спирт до образования насыщенного раствора. Затем перед упо­треблением берут 1 часть маточного раствора и разбав­ляют в 9 частях 95%-ного спирта. Раствор наносят мягкой кисточкой или погружают в него образец. Для обсыхания протравленные образцы помещают между листами фильтровальной бумаги. Весьма перспективно применение лаурилпентахлорфената. Обработка кол­лекций производится 3,75% -ным раствором этого веще­ства в «белом спирте», т. е. в чистом керосине, свобод­ном от парафинов, с высокой температурой кипения. «Белый спирт» — бледная желтоватая масляная жид­кость с физическими свойствами бензина. В эту жид­кость погружают пачки немонтированного гербария. После стекания жидкости пачки в течение суток держат в сушильных шкафах с плотно закрывающимися двер­цами и сетчатыми полками.

Для профилактического протравливания можно ис­пользовать:

раствор смеси, состоящей из ДДТ (10%) и фениловортутной соли уксусной кислоты (1%) в ацетоне;

полихлорфенолы;

гидроксихинолиновую соль серной кислоты;

4) 0,1—0,2%-ную парижскую зелень. Дезинсекцию можно производить четыреххлористым

углеродом, сернистым ангидридом, сероуглеродом, ди­хлорэтаном и др. Фумигация делается в специальных герметических камерах, в изолированных вентилируе­мых помещениях.

Для освобождения от насекомых и предотвращения плесневения применяется также термическая обработ­ка материала. При ней материал выдерживается в те­чение 2—6 часов в горячем, сухом воздухе при темпе­ратуре 80°.

После того как собранный материал обработан, приступают к его окончательному определению и оформ­лению. Работы, связанные с определением, целесообраз­но начинать с момента взятия образца и вести их на протяжении всего периода обработки и оформления сборов. До окончательного определения образцы обяза­тельно сохраняют вместе с черновыми записями и эти­кетками. В первую очередь проводится ориентировоч­ная, предварительная группировка образцов в зависи­мости от того, что явилось причиной поражения: абиоти­ческие факторы, цветковые паразиты, грибы и т. д. При помощи специальной литературы и соответствующих приемов делается детальное определение образцов; вы­ясняются причины и виды организмов, вызвавшие пора­жение. Для проверки определения обращаются к спе­циалистам. При этом обязательно доставляется образец.

Пересылать сухие образцы для определения следу­ет в возможно большем количестве экземпляров, обя­зательно сопровождая их подробными копиями черно­вых записей. Гербарные листы или конверты с сухими образцами тщательно завертывают в плотную бумагу, помещают между кусками картона или фанеры, обвя­зывают шпагатом, заключают в пакет из полиэтилено­вой пленки, тщательно пишут адрес. Образцы, законсер­вированные в жидкостях, пересылают в плотноукупоренных емкостях, пробка или крышка которых надеж­но закреплена. Их помещают в металлические или де­ревянные футляры, предварительно переложив мятой бумагой, стружкой, опилками, ватой, ветошью, кусками поролона. Делается надпись: «Верх», «Низ», «Осторож­но! Научный материал». К высылаемым образцам при­лагается список, в который после определения вносят соответствующие данные. Список возвращается отпра­вителю.

Часть образцов для выделения патогена в чистую культуру целесообразно посылать в неконсервированном виде. Для этого пораженные плоды завертывают в бу­магу и перекладывают мелкой, мягкой стружкой; не­большие объекты (отдельные листочки, споровый поро­шок, некрупные грибные образования) можно пересы­лать в конвертах. Черенки, стебли, некрупные целые растения тщательно очищают, завертывают в мох, за­вязывают и до отсылки сохраняют в затененном, про­хладном месте. Во избежание порчи их не следует по­мещать в пакеты из водопрочного материала.

Образцы, по которым были описаны те или иные таксоны, сохраняются в головных учреждениях как эта­лоны, определяющие правильность применения названий таксонов.

Тщательно обработанные стандартные образцы, предназначенные для научного обмена, издаваемые в большом количестве экземпляров (50) и снабженные тщательно составленными этикетками, получили назва­ние эксикат. Они являются материалом для сравнения при изучении того или иного таксона. Ссылка на эти­кетку строго идентифицированного образца имеет боль­шое значение, так как позволяет избежать ошибок при последующих обработках и определениях. Наличие ти­повых экземпляров обеспечивает стабильность номен­клатуры.

Закончив определение, набело переписывают эти­кетку, без которой образец теряет всякий смысл. Эти­кетка представляет собой прямоугольный листок плот­ной бумаги размером 7X12 см. Лучше иметь запас бланков этикеток, выполненных типографским спосо­бом. В них от руки вписывают необходимые сведения. На этикетке обязательно указывают: наименование ор­ганизации, подразделения, коллекции; латинское, рус­ское, местное название патогена, растения, болезни, ста­дию развития патогена, растения; пораженный орган, особенности проявления болезни; местонахождение, мес­тообитание, дату сбора; инвентарный номер гербарного листа; фамилию собравшего и определившего образец.

Этикетка должна быть приложена к каждому лис­ту. На гербарный лист кладут поражения только одного вида. Гербарный лист (рис. 86) представляет собой прямоугольник плотной бумаги или тонкого картона размером 28X42 см (40X50 см для крупных образцов). Важно, чтобы листы одного гербария были одинакового размера.

Рис. 86. Образец оформления гербарного листа: 1 — узкие полос­ки крепящей бумаги; 2 — пораженное расте­ние; 3 —. этикетка; 4 — пакетик с мелкими, осы­пающимися частями [по Круберг Ю. К. и Чефра-новой 3. В., 1960]

Бумага или картон должны иметь такую плотность, чтобы при взятии за один конец лис­та с прикрепленными к нему образцами он не переги­бался. Поражения прикрепляются небольшими узкими полосками бумаги, смазанными декстриновым, поли-винилацетатным (ПВА) или вишневым (камедью виш­ни) клеем. Крупные поражения.или их части пришива­ют зелеными или цвета хаки толстыми нитками, концы которых завязывают узлом с противоположной лицевой стороны листа. Образцы, не прикрепленные к листу, бы­стро разрушаются. Если крупный образец не помещает­ся на одном листе, то отдельные его части монтируют­ся на двух и более. В этом случае на прикладываемых к ним полных этикетках делается надпись: «Продолже­ние листа №...». При монтировке образцов грибов, обра­ботанных по способу Герпелля, с них осторожно сни­мают полотняные или иные прокладки. Высохшие сре­зы плодовых тел грибов аккуратно вырезают ножницами и наклеивают на более плотный гербарный лист. При этом детали шляпки приклеивают к деталям пень­ка, к нижней части которых прикрепляется субстрат, на котором рос гриб. На лист прикрепляют также отпеча­ток спор. Аналогичным образом поступают с образца­ми плодовых тел грибов, которые были обработаны уп­рощенным способом.

Мелкие части образца (склероции, пораженные се­мена), помещенные в конвертики, пакетики, коробочки, прикрепляют декстриновым, ПВА или вишневым клеем в левой нижней или правой верхней части гербарного листа. Лучше, если все эти емкости будут из прозрач­ного материала (целлофана), не препятствующего сво­бодному обозрению находящегося в них материала. Об­разцы на гербарном листе размещают так, чтобы были видны все характерные их признаки.

По окончании монтировки в правом нижнем углу гербарного листа декстриновым, ПВА или вишневым клеем прикрепляют этикетку. Все гербарные листы оформляют однотипно. Для защиты образцов от поло­мок к каждому гербарному листу целесообразно при­крепить лист тонкой бумаги. Защитный лист делается такой же величины, как и гербарный, но с одной сторо­ны он имеет добавочную полоску шириной 2 см, кото­рой и прикрепляется. С целью защиты гербарные лис­ты можно вкладывать в одно- или двубортные «рубаш­ки» (рис. 87). При монтировании следует помнить и об эстетической стороне гербария.

Рис. 87. Предохранение гербарного листа от механичес­ких повреждении и действия света при помощи защитной обложки .(по Бединггауз М. П., 1955)

Так, излишек крепящих бумажных полосок, большая их ширина (свыше 2— 3 мм), слишком частое прошивание нитками иного, чем это указано, цвета и т. д. портит внешний вид.

Массивные, твердые образцы тщательно дезинфи­цируют, заворачивают в бумагу, свертки помещают в конверты и пакеты из плотной бумаги. Сверху на них приклеивают этикетку, а внутрь вкладывают черновые записи. Пакеты делают без клея, сгибая листы по шаб­лону. В пакеты и конверты можно помещать также мел­кие поражения, не монтируя их на гербарном листе.

При оформлении образцов поражений, консервируе­мых в жидкостях, лучше использовать неокрашенные прозрачные консерванты и посуду. Емкости должны быть устойчивыми, с плотно закрывающимися крышка­ми. Лучшими являются предназначенные для этих це­лей коллекционные цилиндры из стекла или органичес­кого материала (рис. 88). Черновые этикетки, находя­щиеся внутри емкостей, при оформлении коллекции извлекают и пишут чистовую этикетку.

Рис. 88. Коллекционный стеклянный сосуд с прикрепленной на проволоке этикеткой [Павло­вич С. А., 1947]

Ее прикрепляют снаружи. По форме она может быть такой же, как и у гербарного листа. Особое внимание обращается на уку­порку, чтобы предотвратить испарение жидкости. Банки. закрываются корковыми пробками. При укупорке банок пробка должна быть немного больше внутреннего диа­метра горловины. Пробку выдерживают в кипятке и распаренной вставляют в горловину банки. Такие проб­ки лучше предохраняют жидкость от испарения, чем стеклянные, притертые. Последние перед закупоривани­ем слегка смазывают вазелином. Свободную часть проб­ки и край посуды обмазывают менделеевской замазкой. Уменьшает испарение заливка пробок парафином, стеа­рином, воском, сургучом. Пробки и крышки обтягивают куском размягченного животного пузыря или разогре­той в горячей воде полиэтиленовой пленки, обвязывают ниткой. После высыхания пузырь можно окрасить чер­ной тушью, покрыть лаком или только черным лаком. Менделеевская замазка достаточно стойкая, но раство­ряется в бензине, скипидаре. Если образцы с жидкостью находятся в пакетах из полиэтиленовой или иной плен­ки, то верхние края их спаиваются. При этом необходи­мо следить, чтобы пакеты были во вздутом состоянии. Следует оформлять несколько дубликатов одного и того же поражения. Законсервированные образцы луч­ше размещать в коробках или ящиках с гнездами и крышками. Высота ящика и его размеры подбирают­ся в соответствии с величиной емкостей. В один ящик помещают столько законсервированных образцов в ем­костях, чтобы его можно было перемещать. На ящиках делают соответствующие надписи. Сосуды с образцами хранят в шкафах с плотно закрывающимися дверцами. Шкафы размещают в вентилируемых, прохладных по­мещениях.

Образцы поражений после объемного засушивания укрепляют на подставках и закрывают стеклянными колпаками, низ которых вставляют в желобки подста­вок, и заливают парафином. Небольшие объемные об­разцы можно монтировать в энтомологических короб­ках. Этикетка прикрепляется на подставке или боковой стороне колпака на дне энтомологической коробки; под колпак или в коробку кладут небольшое количество репеллента. Образцы сохраняют в сухом, прохладном за­темненном месте, лучше в шкафах или специальных сек­ционных ящиках с откидывающимися боковыми стен­ками и крышкой.

Образцы, полученные при засушивании в пучках, целесообразно помещать в пакеты, предохраняющие их от запыления, отсыревания. Лучшими для этих целей являются мешочки из водопрочной пленки, завязывае­мые с одной стороны. Этикетка прикрепляется к снопи­ку, внутрь пакета вкладывается небольшое количество репеллента.