Особенности приготовления препаратов различных насекомых и клещей

Клещи, тли, листоблошки. Для этих, а также других членистоногих с мягкими покровами широко при­меняется способ изготовления тотальных препаратов в канадском бальзаме (см. выше).

В последнее время все шире используются в каче­стве монтирующей жидкости гуммиарабиковые смеси (жидкости Фора и Берлезе).

Кроме гуммиарабиковых смесей в качестве монти­рующей жидкости для тлей и других подобных насеко­мых можно использовать глицерин-желатину.

Цикадовые, клопы. Для изготовления препара­тов гениталий самцов, реже—самок, как правило, при­меняют метод вываривания в 5—20%-ном растворе КОН (или NaOH) или выдерживания в щелочи при комнатной температуре от 15—30 минут до суток (мето­дика приготовления временных препаратов). Техника препарирования заключается в следующем. У сухих или лучше размоченных в воде экземпляров отчленяется генитальный сегмент (у клопов-щитников, краевиков и ряда других полужесткокрылых гениталь­ный сегмент можно выдавить, воткнув иголку снизу или сбоку близ вершины брюшка). Отломленная часть по­мещается в каплю, воды и выдерживается там несколь­ко минут, чтобы хорошо размягчилась, а затем обраба­тывается щелочью. После этого с помощью двух препа­ровальных игл (а у мелких объектов — энтомологичес­ких булавок) под бинокуляром генитальный сегмент очищается от остатков других сегментов, разрывается, и вычленяются параметры и пенис. Необходимо учиты­вать при этом, что после обработки щелочью параметры часто изменяют свою форму (обычно более или менее раздуваются при перенесении их из щелочи в воду). По­этому мы рекомендуем их изучать и зарисовывать, не обрабатывая щелочью. При некотором навыке параметры можно отчленить от размоченного в воде генитального сегмента, не повредив последний. В ряде случаев можно извлечь пенис из генитального сегмента (не раз­рывая последний) через отверстие на его переднем крае с помощью энтомологической булавки, конец которой можно крючковидно изогнуть. При этом генитальный сегмент придерживают другой булавкой, воткнув ее в основание сегмента. Препарирование ведется под бино­куляром.

Довольно часто для тщательного изучения эдеагуса клопов и цикадовых требуется раздуть его мембранозные участки, которые при этом приобретают пузыре­видную или мешковидную форму. В таком случае от­члененный и размоченный генитальный сегмент следует поместить в слабый раствор щелочи (концентрация не более чем 10%, часто/—5% и ниже) и нагревать щелочь до кипения, но не кипятить или кипятить всего несколь­ко секунд.

После этого генитальный сегмент надо пере­нести в воду (лучше дистиллированную или кипяченую, но можно и водопроводную) и в ней энтомологическими булавками вначале отделить параметры, а затем из­влечь пенис. Если эдеагус сразу не раздулся, его следу­ет перенести в другую каплю воды и выждать несколь­ко минут. Если и это не поможет, то можно попытаться развернуть эдеагус с помощью энтомологических булавок.

При этом действовать надо крайне осторожно и не очень острыми булавками, чтобы не проткнуть случай­но мембрану (проколотый эдеагус уже не раздуется). Если эдеагус по-прежнему не раздувается, то его сле­дует опять подержать в щелочи — холодной или горя­чей, после чего вновь перенести в воду. Необходимо от­метить, что раздуть эдеагус удается далеко не всегда.

Поэтому проводить эту операцию рекомендуется в том случае, если имеется серия экземпляров. Хранят препараты в капле насыщенного раствора сахара или другим описанным выше способом.

Бахромчатокрылые, или трипсы. Для хра­пения и определения видового состава трипсов изготов­ляются постоянные препараты, которые заливают ка­надским бальзамом. Если же в хранении препарата нет необходимости, можно использовать глицерин со спир­том (1 часть глицерина, 2 — спирта и 3 — воды). Если трипсы очень крупны, под края покровного стекла ре­комендуется подкладывать обломки другого покровного стекла, чтобы избежать деформации насекомого.

До приготовления препаратов трипсов следует хранить в 94—96%-ном спирте. Как при сборе трипсов, так и при приготовлении препаратов применяется мягкая кисточ­ка, смоченная спиртом или ксилолом. Темноокрашенные виды перед изготовлением препарата надо тщательно просветлять в гвоздичном или кедровом масле. Крылья, усики и ноги трипса до заливки в бальзаме следует от­вести в стороны минуцией, насаженной на деревянную ручку так, чтобы они не закрывались телом трипса; при этом нужно не поломать щетинок.

Жуки. Для изучения гениталий жуков обычно применяется методика приготовления временных пре­паратов.

Сухие экземпляры перед препаровкой размачивают либо во влажной камере в течение 1—2 суток, либо в холодной или теплой воде в течение 0,5—1,5 часа (в за­висимости от размера жука и степени твердости его по­кровов). О. Л. Крыжановским и В. М. Емецем [1972] пред­ложен более быстрый (несколько секунд) метод размоч­ки: сухие жуки помещаются в тигелек с небольшим ко­личеством воды, и на огне спиртовки вода доводится до момента кипения (но не кипятится).

У размоченных экземпляров извлекаются гениталии. При этом часто рекомендуют отделять целиком последние брюшные сегменты, а затем извлекать эдеагус. Однако этот метод имеет тот недостаток, что повреждаются, теряются или становятся негодными предпоследний и последний стерниты брюшка, хетотаксия (волоски на покровах) и микроскульптура которых важны для определения. Lindroth С. Н. [1969] рекомен­дует отодвигать надкрылья, делать разрез сверху меж­ду вторым и третьим сегментами от вершины брюшка и извлекать эдеагус через этот разрез. К видам со срос­шимися надкрыльями этот метод неприменим.

Предложен еще один, более простой и удобный, ме­тод вычленения гениталий (Freude Н. et all., 1965; Крыжановский О. Л. и Емец В. М., 1972). Препаровка ведет­ся под бинокуляром или препаровальной лупой (рис. 55). При помощи острого обломка лезвия безопасной бритвы или лучше плоской иглы для взятия проб крови, которую с одной стороны целесообразно заточить, расширяется клоакальное отверстие.

Рис. 55. Препарирование гениталий жуков [по Крыжановскому О. Л., Емецу В. М., 1972]: А — плоская игла для взятия крови; Б — подрезание тергитов брюшка у жужели­цы; В — схема расположения гениталий у жужелиц и их извлечение; Г — схема извлечения гениталий у, жуков-кара­пузиков; Д — гениталии жужелицы после извлечения; Е — смонтированные на картонном треугольнике гениталии.

Такого расшире­ния достаточно, например, для извлечения гениталий у пластинчатоусых, у жуков-карапузиков. У жужелиц де­лается разрез дальше вбок, на правую сторону, на глу­бину 2—3 последних сегментов брюшка (при этом необ­ходимо соблюдать осторожность, чтобы не повредить эдеагус). У крупных жуков целесообразно также пере­резать сухие ткани (мышцы и др.) сверху и снизу от эдеагуса.

Через разрез пинцетом с острыми кончиками, препаровальной иглой или просто толстой энтомологи­ческой булавкой (конец последней желательно крюч­кообразно изогнуть) извлекается половая сумка, внут­ри которой находится пенис с параметрами.

После извлечения тем или иным способом эдеагус обрабатывается 5—10%-ной щелочью (КОН или NaOH), холодной (в течение в среднем 12 часов) или кипящей (несколько секунд), а затем очищается от лигаментов и мускулатуры. Затем эдеагус следует про­мыть в воде. На этом обычно препаровка заканчивает­ся. После изучения препарат приклеивается раствором сахара на картонном прямоугольничке или треугольнич­ке, который подкалывается на ту же самую булавку, что и жук.

Иногда для определения вида решающее значение имеют внутренние структуры пениса. При этом часто выворачивают внутренний мешок пениса. Эта процеду­ра очень трудоемка, в связи с чем рекомендуется (Крыжановский О. Л., Емец В. М. 1972) изучать гениталии самцов с внутренним мешком пениса во ввернутом (спо­койном) состоянии, тем более, что прикрепление его мембран в этом положении более или менее одинаковое у всех самцов, относящихся к одному виду. По методи­ке этих авторов, эдеагус после промывки в воде перено­сится в абсолютный спирт и через 1—2 минуты — в кап­лю молочной кислоты. Через различный промежуток времени (1 час, 1 сутки или больше) процесс просвет­ления заканчивается и становятся видными детали ар­матуры внутреннего мешка. Авторы приводят также бо­лее быстрый метод просветления, заключающийся в следующем. Эдеагус помещается в маленькую пробир­ку с некоторым количеством молочной кислоты и на ог­не спиртовки подогревается (но не доводится до кипения). Пробирка энергично взбалтывается, и время от времени просветление контролируется по мелким пу­зырькам, которые выделяются из отверстия пениса. Ес­ли выделение пузырьков прекращается, производят еще подогрев жидкости в пробирке; если пузырьки выделя­ются очень бурно, то подогрев прекращают. Процесс просветления ведется до тех пор, пока будут просвечи­вать темные пигментированные структуры внутреннего мешка. Затем эдеагус промывают в спирте и подклеи­вают к кусочку картона, как обычно.

Чешуекрылые. Для определения видов насеко­мых этой группы нередко прибегают к изготовлению как макропрепаратов (для изучения жилкования крыльев, опушения ног), так и микропрепаратов (рото­вого аппарата и генитального аппарата бабочек, крюч­ков на подошвах брюшных ног и волосков на теле гу­сениц и т. д.). Ниже описывается техника изготовления макро- и микропрепаратов бабочек и гусениц в основ­ном по А. М. Герасимову [1952] и А. К. Загуляеву [1965]. Структуру жилок бабочек лучше рассматривать на нижней поверхности крыла, где они более отчетливы. У крупных бабочек (например, булавоусых чешуекры­лых) для изучения жилок крыло, не отделяя от тела, слегка смачивают с помощью кисточки ксилолом, толуо­лом, бензолом, бензином или спиртом. У более мелких бабочек удобно рассматривать жилкование крыльев, отделив их от тела и поместив на предметное стекло; за­тем на крыло накладывают покровное стеклышко и на­носят каплю одной из вышеуказанных жидкостей на предметное стекло; жидкость подтекает под покровное стекло и смачивает крыло.

У мелких бабочек для изучения жилкования необ­ходимо с крыла удалить чешуйки. Для этой цели крыло у корня отсекается или обламывается и укладывается на сухое или слегка увлажненное предметное стекло. Затем чешуйки удаляются сначала с одной стороны, по­том с другой тонкой влажной кисточкой из колонкового (беличьего) волоса. У очень мелких бабочек (например, мелких молей) чешуйки с крыла лучше счищать голов­кой тонкой энтомологической булавки; при этом чешуй­ки удаляются небольшими участками.

Если для приготовления макропрепарата крыло отламывалось, то после изучения оно помещается в каплю 70%-ного спирта на предметном стекле и накрыва­ется покровным стеклом, которое плотно прижимается. В таком виде препараты и хранятся.

А

3 см ↓

Б

5 см ↓

Рис.56 – Изготовление картонной энтомологической коробки А, Б - узкая и широкая полоски картона

Изготовление микропрепаратов производится раз­личными способами. Для того, чтобы рассмотреть строе­ние ротового аппарата бабочек, гениталий самца и сам­ки, насекомые обрабатываются следующим образом. С помощью тонкой препаровальной иглы отделяют го­лову и все брюшко у его основания и помещают в про­бирку, бюксик, маленький стаканчик или фарфоровый тигелек, куда затем наливают 2—3 см³ 10%-ного рас­твора едкой щелочи (KОН или NaOH), и на слабом огне медленно кипятят до полного их просветления; после этого сильно склеротизованный копулятивный ап­парат (обычно темно-коричневого цвета) становится яс­но заметным сквозь прозрачные стенки брюшка. Голову необходимо варить до тех пор, пока слегка не посвет­леют глаза, что происходит обычно через 2—3 минуты после начала обработки, тогда как гениталии приходит­ся кипятить до 10 минут и более. После окончания вар­ки голову или гениталии вынимают препаровальной иг­лой и промывают в воде не менее 2 раз; рекомендует­ся также для лучшего удаления щелочи прокипятить их в 2—3 см³ воды. После промывки препараты поме­щают на предметное стекло в каплю смеси: 1 часть гли­церина и 2 части спирта. Лучше для этой цели исполь­зовать предметные стекла с лунками. После того как диффузия жидкости окончится (обычно она длится 1 — 2 минуты) и препарат будет лежать спокойно, предмет­ное стекло переносят под бинокуляр, где с помощью препаровальных игл расправляют в нужном положении. Голову рекомендуется класть так, чтобы усики были обращены вверх и в стороны, лоб расположен к иссле­дователю, губные и челюстные щупики обращены вниз и в стороны, а между ними спускался хоботок; кроме того, голову необходимо ориентировать таким образом, чтобы были видны ямки в основании 1-го членика уси­ков и начало темени.

При рассматривании копулятивного аппарата брюш­ко ориентируют так, чтобы первые его членики были внизу, а хвостовые вместе с гениталиями вверху; кро­ме того, в большинстве случаев брюшко самца повора­чивают на бок так, чтобы тергиты (верхние склериты) сегментов брюшка были слева, а стерниты (нижние склериты) справа. Брюшко самки кладут на спину. Для лучшего рассмотрения деталей копулятивного аппарата необходимо вытянуть гениталии из брюшка. Для этой цели надо одной иглой слегка придерживать брюшко за первый сегмент (отсчет сегментов ведется от основания брюшка!), а другой, зацепив осторожно за J склеротизованные структуры, медленно вытянуть гениталии из брюшка. При вытягивании гениталий разрыв перепонок, связывающих их с брюшком, нежелателен, так как при этом гениталии всплывают на поверхность, скользят по жидкости; все это затрудняет работу с ними, а их небольшие размеры увеличивают возможность потери при длительном хранении. Для облегчения удержания препарата в заданном положении в каплю жидкости можно погрузить несколько волоконец ваты и положить на них препарат. Удер­жанию головы в нужном положении помогает также вытягивание усиков из капли на стекло. Для сохранения ориентации гениталий можно вытаскивать несколько первых члеников брюшка из капли на стекло. Этот способ удобен и при одновременном сравнивании двух- трех препаратов гениталий близких видов, когда все-гениталии кладутся рядом и одинаково ориентируются (при этом надо обязательно записать, какие гениталии к каким экземплярам относятся). В гениталиях самца, после того как они будут выдвинуты и положены на бок, необходимо иглой отогнуть лежащий сверху парный створкообразный орган — валь­ву, а пенис вытянуть так, чтобы можно было свободно рассмотреть его вершинную перепончатую часть.

После завершения изучения препараты хранятся как временные одним из описанных выше способов.

Перепончатокрылые. Препараты деталей строения и тотальные (мелких паразитических перепон­чатокрылых) делают как постоянными (в канадском бальзаме), так и временными (в гуммиарабиковых сме­сях— жидкости Фора или Берлезе). Кроме того, для срочных наблюдений можно изготавливать временные глицериновые препараты. Методики изготовления по­стоянных и временных препаратов изложены выше.

Для изготовления хорошего препарата из высохших мелких экземпляров [Никольская М. Н., Яснош В. А., 1966] рекомендуется поместить объект в ледяную уксус­ную кислоту (обычно не более чем на 30—60 минут) с проверкой под бинокуляром, до полного просветления и восстановления нормальной формы с последующим за­ключением в гуммиарабиковую смесь. Объекты, хранив­шиеся в спирте, перед перенесением в жидкость Фора (или Берлезе) промываются в воде. Мелких паразити­ческих перепончатокрылых можно заключать в гуммиарабиковую смесь живыми. Рекомендуется (Никольская М. Н., Яснош В. А., 1966) живые экземпляры помещать в ксилол на 1 час, а затем в ледяную уксусную кисло­ту.

Для просветления объектов при изготовлении пре­паратов очень мелких паразитических перепончатокры­лых (таких, как трихограмма) применяют выварку в молочной кислоте. Более крупных особей для того, что­бы обесцветить хитин и растворить внутренние ткани, вываривают 5—10 минут или вымачивают несколько дней в 10%-ном растворе КОН, предварительно отчле­нив крылья и усики, которые при обработке щелочью изменяют свою форму. После вываривания объект про­мывают в воде. Обесцвечивающее действие оказывает также перекись водорода Н2О2 при выдерживании в ней в течение 1—3 дней. Затем экземпляры расчленяют так, чтобы удобно было изучать, определять и зарисовывать представителей конкретной группы перепончатокрылых. Для изучения гениталий осторожно отделяют последние сегменты брюшка и вычленяют из них половые органы.

Двукрылые. Обычно делаются препараты гени­талий самцов, реже — самок. В ряде групп (ктыри, саркофагиды и др.) многие признаки строения гениталий можно рассматривать на сухом материале, особенно в тех случаях (у круглошовных двукрылых), когда во вре­мя наколки был отогнут или оттянут кончик брюшка. Однако чаще всего для тщательного изучения генита­лий приходится готовить препараты. У двукрылых их обычно делают временными, для рассмотрения в глице­рине или воде.

Для подготовки объекта к препарированию наколо­тое насекомое помещают на несколько часов или на всю ночь во влажную камеру, чтобы избежать его поломки во время препарирования. Отделять гениталии наиболее удобно с помощью ножниц Веккера (см. рис. 53, Л), а у крупных экземпляров — с помощью обычных глазных ножниц. Кроме того, удобно пользоваться осколком без­опасной бритвы (не бывшей в употреблении), укреплен­ным на ручке-спичке или короткой палочке. В качестве опоры удобен торец укрепленной вертикально спички, которую можно воткнуть в пластинку из пенопласта, корковую пробку или другой подобный материал (см. рис. 53, Г). Отрезать чаще всего приходится около полови­ны длины брюшка или даже больше, чтобы не повре­дить втянутые внутрь брюшка гениталии. Препаровку двукрылых средних и мелких размеров лучше произво­дить под бинокуляром при небольшом увеличении.

Отрезанный конец брюшка помещают на некоторое время (обычно на ночь) в 5—10%-ный раствор КОН или кипятят в 10—15% -ном растворе щелочи (чаще около 1 минуты, но вообще продолжительность обработ­ки щелочью определяется опытным путем); после этого конец брюшка промывают в холодной или кипящей во­де. Если темные, сильно склеротизованные структуры плохо обесцвечиваются в щелочи, то их иногда обраба­тывают перекисью водорода.

После обработки щелочью и промывки в воде пре­парат помещают в каплю глицерина либо в специаль­ную «солонку» (см. рис. 53, В), либо на обычное пред­метное стекло, либо на стекло с лункой, где и изучают, пользуясь для его переворачивания и расправления тон­кими препаровальными иглами (например, энтомологи­ческими булавками или минуциями, вставленными в спичку).

Препараты двукрылых принято хранить в мелких пробирках или отрезках полиэтиленовой трубочки в гли­церине или смеси 1/3 глицерина, 1/3 96%-ного спирта и 1/3 воды. Препараты хранятся либо в отдельной ко­робке, либо подкалываются на булавку под экземпляр; в последнем случае используются только самые мелкие пробирки (длиной не более 12—15 мм).

При исследовании гениталий мелких форм (2 мм и менее) или форм, которые обладают относительно плос­кими гениталиями (например, галлицы), иногда изго­тавливаются и постоянные препараты в канадском бальзаме или в других средах. Постоянные препараты можно делать на обычных предметных стеклах или, что более удобно, на прозрачных пластинках, изготовленных из толстой фотопленки (эмульсионный слой очи­щается), покрывая их более короткой пластинкой, вы­резанной из покровного стекла.Такие препараты мож­но накалывать на ту же булавку, на которую наколот соответствующий экземпляр.

Вопросы:

1.Виды препаратов

2.Особенности постоянных препаратов

3.Особенности временных препаратов

4.Описание срочного приготовления препаратов

5.Хранение временных препаратов

6.Особенности приготовления препаратов для клещей, тлей, листоблошек

7.Особенности приготовления препаратов для цикадовых, клопов

8.Особенности приготовления препаратов для бахромчатокрылых или трипсов

9.Особенности приготовления препаратов для жуков

10.Особенности приготовления препаратов для чешуекрылых

11.Особенности приготовления препаратов для перепончатокрылых

12.Особенности приготовления препаратов для двукрылых

ПОСТАНОВКА, ОФОРМЛЕНИЕ И ХРАНЕНИЕ КОЛЛЕКЦИЙ

Оформление энтомологической коллекции зависит от ее назначения и способа хранения материала (в вы­сушенном состоянии, в консервирующей жидкости или в виде микроскопических препаратов).

Энтомологические коробки и ящики

Смонтированный на энтомологические булавки ма­териал хранится в специальных картонных коробках или деревянных ящиках.

Стандартные фабричные коробки для коллекций насекомых имеются в продаже в магазинах учебно-на­глядных пособий и зоологических магазинах. Кроме то­го, энтомологические коробки и ящики могут быть из­готовлены по специальным заказам учреждений на кар­тонажных и мебельных фабриках и других предприяти­ях. Коробки и ящики можно также сделать собственны­ми силами из имеющихся материалов.

Энтомологические коробки изготавливаются из дре­весины (не хвойных пород) или из фанеры. В последнее время получают распространение металлические ящики. И коробки, и ящики должны обязательно иметь плотно закрывающуюся крышку - картонную, деревянную или со стеклом. Картонные коробки обычно оклеиваются пе­реплетной тканью, коленкором или глицерином. Ящики часто покрываются светлым лаком.

Желательно, чтобы все коробки в данной коллекции имели одинаковые размеры. В учреждениях и учебных заведениях, где нет необходимости в создании больших фондовых коллекций и материал относительно неболь­шой, наиболее удобны имеющиеся в продаже коробки средних размеров: длина >—35 см, ширина — 25 см и высота — 6 см (вместе с крышкой). Коробки таких размеров пригодны как для научных, так и для демон­страционных коллекций. В продаже бывают коробки и меньших размеров (26X18x6 см, 18X13X6 см и др.); они менее подходящие для постоянных коллекций, но очень удобны для временного хранения в полевых ус­ловиях, если материал сразу монтируется на булавки.

В учреждениях, обладающих обширными фондовы­ми коллекциями, обычно используют большие коробки и ящики длиной 42 см, шириной 36—37 см и высотой 7 см. Такие коробки изготовляются по специальным заказам.

На дно энтомологических коробок и ящиков укла­дывается наполнитель — пластины из прессованного торфа или пенопласта, мягкой древесноволокнистой пли­ты, каучука, плотного поролона и другого подобного материала толщиной 12—22 мм. В энтомологических ко­робках, поступающих в продажу, обычно уже имеется наполнитель, или вкладыш. Для самодельных коробок и ящиков или заказанных на промышленных предприя­тиях и в мастерских наполнитель приходится изготав­ливать отдельно. Материал для наполнителя должен быть довольно мягким, чтобы булавки с насекомыми можно было втыкать и извлекать без особых усилий, но при этом они должны хорошо удерживаться на своих местах, не раскачиваться, не вращаться и не выскаки­вать при несильных встряхиваниях коробки и ее пере­ворачивании вверх дном. Синтетические материалы, ис­пользующиеся в качестве наполнителя, не должны об­ладать даже слабыми окислительными свойствами, ина­че энтомологические булавки за более или менее дли­тельный промежуток времени (а коллекции хранятся десятки и сотни лет!) придут в негодность. Кроме того, материал для наполнителя следует проверять на устой­чивость к парам органических растворителей, в первую очередь дихлорэтана, которым обрабатывают хранили­ща для уничтожения вредителей коллекций.

Наполнитель сверху покрывается тонкой бумагой: писчей (лучше нелинованной), мелованной, миллимет­ровкой и т. п. Оберточную или другую плотную бумагу использовать для этой цели нельзя, так как она коро­бится и булавка протыкает ее с трудом. Малопригодна также фильтровальная бумага — ее осыпающиеся во­локна будут оседать на покровах насекомых.

Имеющиеся в продаже энтомологические коробки оклеены изнутри бумагой, но часто после длительного употребления коробки, а также в демонстрационных це­лях, бумагу, покрывающую наполнитель, приходится за­менять. Для научных коллекций следует использовать светлую бумагу. В демонстрационных коллекциях цвет бумаги может быть различным, так как имеет сущест­венное значение при экспозиции объектов (подробнее об этом см. ниже).