Временные препараты

Главный недостаток постоянных препаратов состо­ит в том, что при хранении в спирте и при проведении через спирты теряется естественная окраска объекта, слишком нежные покровы могут сжиматься так, что объект деформируется, а сам процесс приготовления препаратов довольно трудоемкий. Кроме того, оптичес­кие свойства бальзама часто не позволяют различить и тщательно изучить тонкие детали строения — скульпту­ру покровов, волоски и т. д. В последнее время для при­готовления препаратов все шире применяются среды, растворимые в воде, т. е. временные препараты (хотя срок годности таких препаратов достигает 10 лет и бо­лее).

В практике изготовления препаратов в средах, рас­творимых в воде, наибольшее распространение получи­ли гуммиарабиковые жидкости (жидкость Фора и жидкость Берлезе), состав которых представлен в таблице.

Таблица

Состав растворимых в воде сред для приготовления препаратов

	Среда
Компоненты	Жидкость Фора	Жидкость Берлезе

Гуммиарабик, г 24 30

Хлоралгидрат кристаллический, г 160 200

Глицерин, мл 16 20

Вода дистиллированная, мл 40 50

Для приготовления среды гуммиарабик растворяют в воде в течение 2—3 дней при комнатной температуре или нескольких часов в термостате при 50-60° С. За­тем прибавляют хлоралгидрат и глицерин, и смеси дают отстояться в течение 2—3 суток, лучше в термостате. После этого смесь тщательно фильтруют через стек­лянную вату или тонкий слой гигроскопической ваты. Готовый состав хранят в темноте или темной стеклян­ной посуде с притертой пробкой. В случае необходимо­сти среду можно разбавлять дистиллированной водой до нужной концентрации. При приготовлении препара­тов в жидкостях Фора и Берлезе объект, хранившийся в спирте, промывают (обычно дистиллированной водой) в течение 2—5 минут в зависимости от объема, поме­щают в среду на предметное стекло, где расправляют (или препарируют) в небольшой капле жидкости, затем добавляют жидкость и накрывают с большой предосто­рожностью покровным стеклом. Насекомых некоторых групп перед монтировкой предварительно особым обра­зом обрабатывают (см. ниже). Многих мелких насеко­мых можно помещать в эти жидкости живыми. Препа­раты высыхают в термостате при 60° С в течение суток. Форма и окраска насекомого, если брать недавно за­фиксированные экземпляры, сохраняются в таких пре­паратах лучше, чем в канадском бальзаме. Благодаря более низкому коэффициенту преломления прозрачные и бесцветные части, например крылья, видны яснее. Ку­тикула сохраняет в этих жидкостях свою гибкость, что облегчает препарирование. Удобны они также и тем, что при необходимости объекты могут быть перемонти­рованы. Смыть такой препарат можно водой.

Постепенно жидкость высыхает. Чтобы избежать быстрого высыхания, надо пользоваться только целы­ми покровными стеклами, а не осколками. Кроме того, обычно применяют обмазку покровного стекла по краям асфальтовым лаком или замазко из смеси (7 частей канифоли и 3 части воска), которую при обмазке подо­гревают. Рекомендуется также обмазывать края покров­ных стекол лаком Руйтера, который приготавливают следующим образом: 20%-ный раствор желатины рас­творяют в насыщенной тимолом воде на водяной бане или в термостате при 37° С. На каждые 100 мл получен­ного раствора добавляют 10 мл 5%-ного раствора дву-хромовокислого калия, и эту смесь хорошо перемешива­ют. Готовый лак хранят в темноте. Перед употреблени­ем необходимое количество лака разжижают при 37° С. Окантованные препараты можно сушить на свету при комнатной температуре. Обмазывать края покровного стекла канадским бальзамом нельзя, так как он прони­кает под покровное стекло и окрашивает препарат.

Жидкости Фора и Берлезе затвердевают достаточ­но хорошо в течение длительного времени (иногда до 2 месяцев). Для достижения более быстрой полной го­товности препарата (особенно если срочно требуется перевезти или переслать препараты) в качестве среды используют глицерин-желатину. Ее изготовляют, раство­ряя 7 г желатины в 42 мл дистиллированной воды при подогревании в водяной бане в течение 2—3 часов. В раствор при помешивании вливают 50 г очищенного глицерина и для предохранения от плесени добавляют 0,5 г карболовой кислоты. Пропорции в соответствии с потребностями можно сократить. Полученный раствор фильтруют в горячем виде через стеклянную вату и охлаждают. Перед применением глицерин-желатину рас­плавляют нагреванием на водяной бане или над спир­товкой.

После заключения препарата в среду края покров­ного стекла очищают от выступившей глицерин-желати­ны и обмазывают клеем БФ-2, образующим при высыха­нии плотную пленку.

Кроме приведенных выше наиболее обычных сред для приготовления постоянных и временных препаратов членистоногих применяются различные их модификации, а также особые составы, разработанные специалистами по отдельным группам. Некоторые из этих составов бу­дут указаны ниже.

Помимо разнообразных способов приготовления препаратов путем заключения части тела или всей осо­би в специальную среду, что позволяет хранить препа­рат более или менее длительное время на предметном стекле в нужном положении, очень часто используется способ приготовления временных препаратов в воде (дистиллированной, кипяченой или водопроводной), гли­церине или смеси глицерина и спирта (в соотношении 1 : 1 или 1:2). Обычно этот способ применяется тогда, когда необходимо срочно изучить и зарисовать в различных положениях хитинизированную часть тела (ге­ниталии, ноги, усики и т. д.), в особенности если эта часть довольно крупная и имеет сложную структуру и если исследуемый материал большой. Этот способ тре­бует минимальных затрат времени и позволяет прово­дить повторное изучение объекта в различных положе­ниях. Для приготовления тотальных препаратов мелких форм с нежными покровами и крыльями (тли, кокциды, трипсы, паразитические перепончатокрылые и некоторые другие группы) такой срочный метод не применяется, так как подобным объектам при повторном изучении, как правило, уже не удается придать первоначальную форму.

Срочный метод приготовления препаратов состоит в следующем. У сухих или слегка размоченных в воде экземпляров (смачивать экземпляр или часть тела луч­ше всего мягкой колонковой кисточкой) отчленяется с помощью препаровальной иглы, энтомологической бу­лавки или специальных приспособлений (рис. 53) нуж­ная часть тела (например, генитальный сегмент, не­сколько вершинных сегментов брюшка, нога и т. д.). Отломленная часть помещается на предметное стекло или в чашку Петри в каплю воды и выдерживается там некоторое время (от 0,5 до 10—15 минут, иногда и доль­ше) до размягчения. При необходимости, с помощью двух препаровальных игл или острых энтомологических булавок вычленяется требующаяся для исследования структура (например, эдеагус или лапка). Затем объект помещается в фарфоровый тигель или пробирку с 5— 20%-ным раствором едкого кали (КОН) или, что хуже, едкого натра (NaOH). Препарат либо выдерживают в холодной щелочи от 15—30 минут до 1—2 суток, либо обрабатывают щелочью в водяной бане, либо кипятят в щелочи на спиртовке от нескольких секунд до не­скольких минут, либо только нагревают щелочь до ки­пения и прекращают обработку. Продолжительность обработки препарата щелочью зависит от ряда обстоя­тельств — размеров объекта, степени хитинизации структур, температуры щелочи и т. д. и определяется практическим путем. При слишком продолжительной обработке нежные части разрушаются и склериты рас­падаются из-за разрывов мембраны; такой препарат не­пригоден для исследования. При недостаточной обработке сохраняются мягкие ткани, которые мешают ис­следованию; в таком случае обработку можно повто­рить.

Рис. 53. Инструменты для препаровки гениталий насе­комых [из «Определителя насекомых европейской части СССР», т. V, ч. 1, 1969]: В — «солонка»; Г — деревянная подставка для опоры при отрезании конца брюшка;

Если темные, сильно склеротизованные и пигмен­тированные объекты плохо обесцвечиваются в щелочи, то их иногда полезно обрабатывать перекисью водорода (Н₂0₂). После обработки щелочью в ней же, если надо, проводят дальнейшее расчленение объекта. Затем объект переносится в воду. Препарирование на этом заканчивается. Изучение и зарисовку объекта производят в воде, глицерине или в смеси глицерина со спиртом. Перед помещением в эту среду препарат надо, тщательно отмыть от щелочи в воде. Если объект круп­ный, то воду следует сменить 1—2 раза или даже про­кипятить 0,5—2 минуты в воде.

Рассматривание и зарисовка объектов в капле воды или других жидкостях проводятся или' на простом предметном стекле, или на стекле с лункой, или в спе­циальной стеклянной «солонке». Часто бывает трудно удержать объект во время зарисовки в нужном положе­нии. Для этого в каплю можно погрузить несколько волокон ваты и положить на них препарат. Пользуются также специальной вязкой мастикой (ее можно заме­нить техническим вазелином или солидолом), малень­кий кусочек которой помещают на стекло, затем капают на него воду или глицерин, после чего погружают ту­да препарат и прикрепляют его с большой осторожно­стью одной стороной к мастике. Следует помнить при этом, что если препарат перепачкается о мастику, он может оказаться непригодным для изучения и зарисов­ки. Для переворачивания и расправления препарата в воде или глицерине пользуются заточенными препаро­вальными иглами, острыми энтомологическими булавка­ми или минуциями, воткнутыми в спичку.

Приготовленные и изученные временные препараты хранят по-разному. Очень часто их помещают в каплю вареного сахара на картонном прямоугольнике, который подкалывают под насекомое. Вместо сахара можно ис­пользовать энтомологический клей (растворенный в грушевой эссенции целлулоид). Для повторного изуче­ния сахар растворяют каплей воды, а энтомологический клей — грушевой эссенцией или ацетоном. Широко рас­пространено также хранение препаратов в маленьких пробирках (диаметром 3—5 мм и длиной 10—12 мм) в глицерине или смеси 1/3 глицерина, 1/3 96%-ного спир­та и 1/3 воды. Жидкость в пробирки доливается по ме­ре высыхания. Пробирки затыкаются пробочками, вы­резанными из большой корковой пробки или куска мяг­кого пенопласта. Пробирки с препаратами хранятся от­дельно в особых ящиках под номерами, соответствую­щими номерам экземпляров, или в одной коробке с на­секомыми, где они либо подкалываются под экземпляр на одну с ним булавку, либо ставятся на отдельной бу­лавке рядом с соответствующим экземпляром.

Г. Андерссоном(Andersson Н., 1972), а затем Э. П. Иарчук (1975) описан удобный и простой способ хране­ния препаратов гениталий мелких насекомых в неболь­ших отрезках полиэтиленовой трубки, заполненной гли­церином и запаянной с обоих концов. В качестве трубочки можно использовать синтетические «соломинки» для коктейлей, которые продаются в магазинах. Наруж­ный диаметр этих трубочек около 3 мм, а внутренний — около 2. Лучше использовать неокрашенные или слабоокрашенные трубочки.

Трубочка заполняется глицерином с помощью пи­петки и нарезается ножницами на отрезки длиною около 15 мм (рис. 54). Затем один конец ее нагревается на огне спиртовки и плотно сжимается холодным пинце­том. Препарат помещается внутрь и таким же образом запаивается другой конец трубки. Герметически закры­тый контейнер подкалывается под насекомое. Если нуж­но посмотреть препарат, запаянный конец легко отрезается ножницами. В ходе работы, когда необходимость смотреть и сравнивать препараты возникает часто, можно в течение довольно длительного времени хранить его в трубочке, запаянной только с одной стороны и подко­лотой на булавку.

Рис. 54. Последовательные этапы изготов­ления препаратов в отрезках полиэтиленовой трубочки (по Andersson Н., 1972; Нарчук Э. П., 1975).

Вследствие того, что диаметр тру­бочки небольшой, глицерин не выливается. Дихлорэтан, часто использующийся для уничтожения вредителей в коллекции и хорошо растворяющий многие синтетичес­кие вещества, воздействия на такие трубочки в тече­ние длительного времени не оказывал.