Изготовление препаратов

Определение многих насекомых часто оказывается возможным только на основе изучения микроскопичес­ких (иногда — макроскопических) препаратов. Препа­рат может быть приготовлен из любой части тела насе­комого (и других членистоногих) или из особи целиком (тотальный препарат). Чаще всего пользуются препара­тами гениталий, усиков, ротового аппарата, крыльев. Тотальные препараты приготавливаются из мелких ор­ганизмов, имеющих нежные покровы.

Препараты в зависимости от свойств среды, в ко­торую они заключаются, бывают постоянные и временные. Все среды, которые обычно применяют для изго­товления препаратов, делятся на две группы: 1) среды, не растворимые в воде, но растворяющиеся в органичес­ких растворителях и 2) среды, растворимые в воде, или просто вода. Постоянными могут считаться лишь препа­раты в средах первой группы. Прочие препараты явля­ются временными и требуют перемонтировки через бо­лее, или менее длительный промежуток времени.

Постоянные препараты

Самый распространенный способ приготовления по­стоянных препаратов — заключение объекта (отдель­ной части тела или целиком особи) в канадский баль­зам. Наиболее обычная техника приготовления препа­ратов по этому способу состоит в следующем.

Перед заключением в канадский бальзам объект должен был полностью обезвожен, что достигается про­ведением его через спирты возрастающей крепости, вплоть до абсолютного. В большинстве случаев вполне удовлетворяет перенос из 70—80%-ного, в котором хра­нились объекты, сразу в 96- или даже в 100%-ный.

Абсолютный спирт приготавливается добавлением к 96%-ному добела прокаленного медного купороса. Хра­нится абсолютный спирт в банке с притертой пробкой. При интенсивном посинении купорос заменяют свежепрокаленным.

Если объекты хранились в консервирующей жидко­сти, то их перекладывают на часовое стекло, откуда вы­бирают пинцетом наиболее пригодных для препариро­вания (покровы не сморщены, усики, ноги и крылья хорошо расправлены). Насекомых сразу же можно пре­парировать — отделять необходимые для изучения дета­ли строения. Обезвоживание мелких объектов (трипсы, мелкие перепончатокрылые и др.) можно проводить прямо на предметном стекле, на которое пипеткой по­мещают каплю абсолютного спирта и переносят в нее объект, пользуясь пипеткой, иглой, кисточкой или пин­цетом. По мере подсыхания капли необходимо 2—3 ра­за добавлять спирт, отсасывая его при необходимости кусочком фильтровальной бумаги. Крупные объекты обезвоживают и просветляют или в тигле, или на пред­метном стекле с углублением (лункой), или в пробирке. Часовые стекла для этой цели обычно не подходят, потому, что абсолютный спирт в них широко растекает­ся. Очень удобны медицинские стекла для определения группы крови с несколькими углублениями. Время, не­обходимое для обезвоживания, зависит от величины объекта, плотности его покровов и других факторов и устанавливается опытным путем. После обезвоживания объект просветляют. Для этого его обычно помещают в гвоздичное масло. Одновременно с просветлением мож­но и препарировать объекты — отчленять мелкие части тела. При этом вследствие высокой вязкости среды пре­парирование облегчается по сравнению со спиртом, а вероятность потери мелких частей тела уменьшается. После просветления и препарирования с помощью фильтровальной бумаги удаляют избыток масла и не­нужные части тела насекомого, объект ориентируют, как необходимо для изучения, а затем рядом с ним на пред­метное стекло наносят каплю канадского бальзама, раз­веденного в химически чистом ксилоле. Для этого луч­ше всего пользоваться стеклянной палочкой, которой об­водят по стеклу вокруг объекта каплю бальзама. Затем проверяют правильность ориентации объекта в капле бальзама и накладывают на нее чистое сухое покровное стекло. Чтобы избежать образования пузырьков воздуха под покровным стеклом, его ставят наклонно на ребро, подводя к краю капли бальзама до соприкосновения с нею, а затем постепенно опускают противоположный край стекла, держа его тонким пинцетом. Надавливать на покровное стекло для удаления пузырьков воздуха не рекомендуется. Изменить немного положение, в кото­ром лежит объект, можно путем легкого сдвига покров­ного стекла. При заключении препарата в бальзам нужно следить за тем, чтобы капля была не слишком велика, иначе бальзам может выйти за края покровного: стекла и даже увлечь за собой объект, и не слишком мала, так как в этой массе под покровным стеклом останется свободное пространство, которое придется за­полнять, помещая маленькие капли бальзама около края стекла.

Чтобы толстые объекты не сплющивались и не ломались, под покровное стекло подкладывают мелкие куски этого стекла или стеклянные капилляры; при этом следует учитывать, что при высыхании толстый слой бальзама сильно уменьшается. Препараты в канадском бальзаме должны подсы­хать несколько дней, прежде чем их можно будет рас­сматривать под микроскопом, не боясь запачкать объек­тив. Подсушка препаратов ускоряется в термостате при 30—50° С.

Гвоздичное масло может быть заменено очищенным кедровым маслом, евгенолом, ксилолом, по Эйхлеру— метилбензоатом и бензилбензоатом, а также специаль­ными смесями (см. ниже). После просветления бензил­бензоатом его каплю необходимо тщательно оттянуть фильтровальной бумагой, так как бензилбензоат очень плохо высыхает. Иногда вместо канадского бальзама пользуются искусственной смолой цедаксом, который, однако, медленнее сохнет.

Если покровы темные или если нужно очистить хи­тиновые части тела насекомых от мышц, жирового тела и внутренних органов, то их обычно выдерживают в те­чение более или менее длительного времени (до 1— 2 суток) в 5—20%-ном водном растворе едкого кали (КОН) или недолго кипятят в 5—10%-ном растворе ще­лочи с последующей промывкой и проведением через спирты. Варить препарат в щелочи надо очень осторож­но и обычно не более 1—2 минут.

Часто достаточно просто довести щелочь до кипе­ния, а затем перенести препарат в воду (тонкие покро­вы очень быстро развариваются в щелочи и препарат может быть непоправимо испорчен). Кипятить препарат можно в пробирке, а лучше — в фарфоровом тигельке, постоянно встряхивая его, иначе щелочь может с силой выплеснуться из тигелька, а тем более из пробирки. Для обесцвечивания темного хитина используют также жавелеву воду (водный раствор гипохлорита калия КС10 и хлорида калия КС1).

Иногда тонкие и прозрачные покровы или отдель­ные хитиновые части тела требуют окраски для того, чтобы лучше рассмотреть особенности скульптуры по­кровов и деталей строения. Окрашивание производят после вываривания в 10—20%-ном растворе КОН и очень тщательной промывки. В качестве красителя обычно используют кислый или основной фуксин. Тон­кие структуры можно рассматривать и изучать без окрашивания под микроскопом с фазово-контрастным устройством.

Сразу после приготовления препарата по обеим сто­ронам от него на предметное стекло наклеиваются эти­кетки. На левой этикетке указываются место сбора, стация, растение, с которого собрано насекомое, или хо­зяин, из которого выведен паразит, при необходимо­сти — характер повреждения растений и другие сведе­ния, фамилия сборщика и дата сбора (или еще дата вылета паразита). На правой этикетке пишут название вида и фамилию определившего вид, при необходимо­сти — номер препарата.