5. Рнга – реакция непрямой гемаглютинации.

Эритроциты нагружают АГ и при образовании комплекса АГ-АТ происходит агглютинация эритроцитов.

6. Ртга – реакция торможения гамаглютинации

7. РтгАд – реакция торможения гемадсорбции

8. РН – реакция нейтрализации.

Вирус + АТ. Контакт. Ввод в чувствительную к вирусу систему. Метод обнаружения – нейтрализация инфекционной активности вируса.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР).

ПЦР является наиболее чувствительным методом. Реакция обнаруживает вирусные НК. Реакция открыта в 1985 году в США.

Сутью метода является амплификация, т.е. увеличение числа копий строго определенных фрагментов молекул ДНК in vitro. ПЦР основана на амплификации ДНК при помощи ДНК-полимеразы, которая осуществляет синтез взаимо-комплементарных цепей ДНК начиная с 2-х праймеров (затравок)

Primer – фрагмент ДНК из 20-30 нуклеотидов. Синтезированный искусственно. Праймеры комплементарны противоположным цепям ДНК. Обычно при ПЦР ставят от 25 до 40 циклов в зависимости от возбудителя. Каждый цикл состоит из трех этапов.

1. Денатурация. 92-95 градусов С, 20-60 секунд. Происходит разрыв водородных связей цепей ДНК.

2. Отжиг – присоединение праймеров. 50-60 градусов С, 40-60 секунд. Происходит забрасывание праймеров, нуклеотидов и ДНК-полимеразы.

3. Элонгация – достраивание цепей ДНК. 68-72 градуса С, 40-60 секунд. Число цепочек ДНК удваивается. Образовавшиеся в первом цикле цепочки ДНК служат матрицами для последующих циклов и т.д. Таким образом в каждом цикле идет удвоение числа копий амплифицируемого участка, что позволяет за 25-40 циклов наработать 2²⁵-2⁴⁰ участков ДНК, что позволяет обнаружить их методом электрофореза.

В ПЦР используют праймеры из консервативных участков ДНК вируса, которые имеют уникальную последовательность для каждого возбудителя.

Методика постановки.

Из исследуемого материала выделяют НК, которую помещают в чистую пробирку и добавляют амплифицирующую смесь, которая состоит из:

• Буфера

• ДНК-полимеразы

• Раствора 2-х видов праимеров

• 4-х видов нуклеотидов

• Магний-хлорного катализатора

• Крезолового красного для визуальной оценки

• Доливают деионизированной воды.

• Сверху капают минеральное масло.

Пробирки помещают в програмируемый термостат-амплификатор и проводят амплификацию в автоматическом режиме по заданной программе для соответствующего вида возбудителя (2-3 часа). Одновременно ставят положительный и отрицательный контроль.

Регистрация результатов – детекция амплификонов. Проводят методом электрофореза в 1-2% агаровом геле в присутствии бромистого этидия, который соединяется с фрагментами ДНК и высвечивается в виде полосок при УФО (трансилюминатор).

Противовирусный иммунитет.

В понятие противовирусного иммунитета входят три категории: видовая резистентность, неспецифические клеточные и обще физиологические реакции и специфический иммунитет.

1. Естественная видовая резистентность.

Естественная видовая резистентность это невосприимчивость большого количества видов животных к некоторым заболеваниям вирусной этиологии. Это обусловлено тем, что вирион не адсорбируется на поверхности клетки.

• Абсолютная естественная видовая резистентность.

• Относительная естественная видовая резистентность обусловлена тем, что невосприимчивое животное подвергнуто воздействию таких ослабляющих факторов как:

*стрессовые факторы

*большие дозы гормонов

*сильное охлаждение или перегрев

*возраст животного

*генетическая обусловленность.

2. Неспецифические клеточные и общефизиологические реакции.

• Температура

• Гормоны – снижают резистентность, однако соматотропные гормоны повышают резистентность и усиливают воспалительную реакцию.

• Беременное животное заболевает быстрее и заболевание протекает более тяжело.

• Физиологическое состояние выделительной системы – скорость выделения вируса из организма.

• Гуморальные факторы – наличие сывороточных ингибиторов (термостабильных или термолабильных). У каждого вида преобладает свой тип.

Интерферрон – особый клеточный белок, который продуцируется зараженными клетками. Это несколько белков, отличающихся по молекулярной массе. По антигенной специфичности они делятся на альфа, бета и гамма белки. Они специфичны к вирусам, бактериям, синтетическим белкам.

Образование интерферрона состоит из двух фаз:

I фаза.

1. Индукция интерферрона при адсорбции вируса на клетке.

2. Захват индуктора.

3. Процесс инициации индуктора.

4. Депрессия генов интерферрона.

5. Транскрипция иРНК для интерферрона.

II фаза.

1. Трансляция иРНК-интерферрон.

2. Образование интерферроида.

3. Гликозирование интерферроида и образование интерферрона.

4. Выделение интерферрона.

Основная роль в образовании интерферрона принадлежит иммунокомпетентным клеткам.

1-й тип интерферрона – классический. Образуется в лимфоцитах периферической крови, молока, молозива в ответ на вирусную инфекцию.

2-й тип интерферрона - иммунный. Образован при помощи митогенов или при сенсибилизации клеток в ответ на повторное введение.

Взаимодействие интерферрона с клеткой.

1. Идет адсорбция на рецепторах клетки.

2. Индукция антивирусного состояния.

3. Развитие антивирусной резистентности.

4. Образование интерферрон-индуцируемых белков.

5. Выраженная резистентность клетки.

Механизм антивирусного действия интерферрона. – интерферрон не влияет на адсорбцию вируса, на виропексис, на процесс высвобождения НК вируса, не влияет на композицию вирусной частицы и ее выход. Интерферрон не действует на внеклеточный вирус в отличии от антител. Интерферрон подавляет репликацию вируса, т.е. он действует на вирус опосредованно, через чувствительную клетку в которой не нарушен синтез клеточной иРНК и клеточных белков.

Интерферроны делятся на экзо- и эндогенные. Эндогенные интерферроны образуются в пораженной клетке в ответ на введение вируса, т.е пока введенный вирус не успел достаточно разрушить клетку. Экзогенный интерферрон попадает в клетку из вне.

Свойства интерферрона.

• Не обладает видоспецифичностью.

• Экзогенный интерферрон проявляет свое максимальное действие, если заражение клетки ещё не произошло.

• Стимулирует фагоцитоз

• Угнетает рост клеток

• Угнетает АТ-образование.

• Способствует усилению активности Т-киллеров.

Специфический иммунитет.

1. Активный иммунитет.

• Факторы гуморального иммунитета Ig G, ранний Ig M.

• Секреторный иммунитет – защита естественных слизистых оболочек. Связан с Ig A – защита ЖКТ и дыхательных путей.

Специфическая профилактика вирусных инфекций.

1. Живые вакцины.

• Полученные на основе адаптации полевых штаммов к какой либо чувствительной системе.

*к культуре клеток.

*к куриным эмбрионам

*к естественно восприимчивым лабораторным животным.

• гетерологичные живые вакцины. (берут от индюков и заражают кур. Куры приобретают резистентность.)

• метод селекции (за счет отбора естественных природных штаммов).

2. Инактивированные вакцины.

• наработка вирус содержащего материала с использованием злых полевых штаммов.

• Инактивация вируса (формалин, бета-пропиолактон, препараты азадинового ряда, температура, УФО, гамма-лучи, сульфат меди.

• Добавление адьюванта в инактивтрованную вакцину. Адьювант адсорбирует на своей поверхности частицы разрушенного вируса. (сорбент-адьюванты: Al-Al(OH)₃, SiO₂ или масляные адьюванты).

• Добавление сапонинов для суперраздражающего действия при в/м и п/к инъекциях. Применяют в очень малых концентрациях для образования воспаления в месте введения.

Семейство Picornaviridae. (pico-маленький, RNA)

Вирион лишен суперкапсида, кубической формы, 22-30 нм. Липидов и углеводов в составе нет. Геном - односпиральная, линейная РНК. Размножение происходит в цитоплазме клеток.

В семейство входят 5 родов:

• Enterovirus - ЖК-заболевания, менингиты, энцефаломиелиты, коньюнкт-ты, везик пораж.

• Hepatovirus – Гепатит А человека и обезьян.

• Cardiovirus – поражение сердца, головного и спинного мозга.

• Rhinovirus – поражение верхних дыхательных путей, распостраняется аэрогенно.

• Aphtovirus – включает вирусы ящура.

Вирус Ящура.

Ящур – остропротекающая, высококонтагеозная болезнь парнокопытных, , проявляющаяся лихорадкой, везикулярным поражением слизистой оболочки рта, кожи венчика и вымени, у молодых животных – поражением миокарда и скелетных мышц. Регистрируется во всех странах мира.

Клиника.

У КРС и свиней протекает остро, как правило, доброкачественно. Инк. период – от 1-3 до 7-10 дней. Затем повышается темп, угнетение, отказ от корма, прекращение жвачки. На 2-3 день образуются афты, которые лопаются и обр эрозии.

У телят протекает в безафтовой форме в виде острого гастероэнтерита. 20-25% погибает от паралича сердца.

У свиней симптомы сходны с КРС, У поросят-сосунов протекает в септической форме (гибель 60-80%).

Вирус открыт Лефлером в 1898г. Вирус имеет одноцепочечною РНК (является инфекционной)

Различают 7 АГ вируса.

Источником вируса являются больные животные. Содержится в выдыхаемом воздухе. Чаще всего заражение происходит при непосредственном контакте животных.

Продолжительность иммунитета у переболевших животных – 8-12 месяцев. В настоящее время применяются сорбированные (КРС) и эмульгированные (для свиней) вакцины.

Семейство Poxviridae. (лат. pox –пустула, язва)

Поксвирусы – большая группа вирусов, поражающая позвоночных и насекомых. Вирион представляет собой овальную или прямоугольную частицу размером 220-450 на 140-260 нм. Частица имеет сложную структуру. Она состоит из центральной части – нуклеотида, овальных тел и наружной оболочки. Нуклеотид имеет двояковогнутую форму. Наружная оболочка состоит из липидов и трубчатых белковых структур.

Геном представлен двухспиральной молекулой ДНК. ДНК не обладает инфекционностью. С нуклеотидом связанно более 15 ферментов. Состав вириона по массе: белки – 88%, ДНК – 5%, липиды – 4%, углеводы – 3%.

Размножение идет в цитоплазме, затем вирус выходит из клетки, разрушая ее, а так же в результате экзоцитоза – без разрыва клеточной стенки. Вирус передается аэрогенно, механически и посредством членистоногих.

В семейство входят два подсемейства:

1. Entomopoxviridae (в практике не имеют большого значения, поражают насекомых).

2. Chordopoxviridae (поражают позвоночных и подразделяются на восемь родов):

• Ortopoxvirus – вирус вакцины и вирус оспы КРС, верблюдов, енотов, обезьян, полевок и др.

• Parapoxvirus - вирус ОРФ (контагиозного пустулезного дерматита и контагиозной эктимы ), вирус папулезного стоматита КРС, вирус псевдооспы коров.

• Avipoxvirus – вирус оспы кур, индеек, перепелов, голубей, скворцов, канареек, воробьев)

• Caprupoxvirus – вирус овец, коз, вирус кожной бугорчатки КРС.

• Leporipoxvirus – вирус миксомы кроликов, вирус фибромы зайцев и белок.

• Suipoxvirus – вирус оспы свиней.

• Moluscipoxvirus – вирус контагиозного моллюска

• Yatapoxvirus – вирус, вызывающий образование опухолей у человека и обезьян.

Оспа овец. (лат. Variola Ovina, англ. Sheep pox)

Оспа овец – острая контагиозная болезнь, протекающая с характерными папулезно-пустулезными поражениями кожи морды и других мест со слабым волосяным покровом и слизистых оболочек. Распространена преимущественно в странах Африки, Азии и Ближнего Востока. Занесена в список А. Приносит огромный ущерб: гибель животных, вынужденный убой, снижение продуктивности, затраты на вет-сан мероприятия.

Клиника. Первые симптомы – кратковременные повышения температуры на 1-2 градуса, вялость, снижение аппетита (предвестниковая стадия – 1-2 дня). Затем опухают веки, появляются истечения из глаз и носа. Затем появляются розеолы, превращающиеся в темно-красные, быстро некротизирующиеся папулы. Болезнь продолжается 20-28 дней, у слабых животных дольше. У взрослых животных при доброкачественной форме погибают 5-10%, у молодняка погибает 50-80% - в основном от сепсиса.

Этиологию установил Боррель в 1903г.

Вирус быстро погибает при высокой температуре и в гниющем материале. Долго сохраняется в сухих оспенных корочках. Попадает в организм с вдыхаемым воздухом, размножается в клетках эпителия дыхательных путей, и с током крови заносится в кожу. У суягных овец вызывает аборты. Источник инфекции больные животные. Восприимчивы только овцы (наиболее сильно – порода меринос)

Иммунитет и профилактика. Естественно переболевшие животные сохраняют иммунитет более 2-х лет.