III. Биологические методы

Биологическими методами называют методы заражения лабораторных животных.

Для исследования биологических свойств паразитов используются только наиболее чувствительные к ним животные (при туберкулёзе - морские свинки, при пневмококковой инфекции и сибирской язве - белые мыши, при стрептококковой инфекции - кролики).

Метод заражения лабораторных животных в практической медицине практически не используется.

Косвенные методы лабораторной диагностики.

I. Выявления специфических антител, с помощью известных диагностических антигенов.

II. Выявления антигенов возбудителей с помощью диагностических сывороток содержащих известные антитела.

III. Выявление иммунологического статуса.

IV. Аллергические методы диагностики.

С помощью известных диагностических антител или антигенов можно найти возбудителей болезней, в любом биологическом материале.

Впервые серологические методы лабораторной диагностики были предложены в 1886 году французом Видалем для диагностики брюшного тифа.(РА). Реакция была основана на обнаружении специфических О и Н антител в сыворотке крови больного брюшным тифом.

В настоящий момент применяют более чувствительные методы серологического исследования, позволяющие обнаружить в крови антител в 10 раз меньше содержания. Эти реакции дают положительный результат в 82%.

При длительно текущих болезнях для более достоверного получения данных применяют метод «парных сывороток», то есть одну и ту же реакцию проводят дважды и сравнивают полученные результаты.

Важнейшее место в диагностике занимает иммуннофлюоресцентный метод. Этот метод позволяет выявить возбудителя в исследуемом материале без выделения его в питательной культуре.

Окончательный диагноз ставится только на основании бактериологических и серологических исследований.

Общие закономерности серологических реакций:

1. Реакции ставят вне организма человека

2.Реакции проявляются при иммунологическом соответствии антигена и антитело в соответствующих оптимальных условиях температуры и кислотности среды

Иммунные диагностические сыворотки получают от крупных животных, путем многократного заражения или введения токсинов.

К диагностическим сывороткам относятся:

1. Агглютинирующие бактерии;

2. Прецепитирующие бактерии;

3. Гемолизирующие бактерии;

4. Антивирусные сыворотки;

5. Антитоксические сыворотки;

6. Люминесцентные сыворотки;

7. Флюорохромные сыворотки;

К диагностическим антигенам относятся взвеси живых и убитых микроорганизмов и их токсины.

I. Выявления специфических антител с помощью известного антигена.

Методы очень широко распространены и применяются с большим успехом уже более 100 лет. Но, к сожалению, оценка серологического исследования в ряде случаев представляет определенную трудность. Во-первых, в большинстве случаев антитела начинают синтезироваться только на 5-7 день болезни, во-вторых – для большинства методов необходимо исследование парных сывороток и наконец, сам иммунный ответ может быть не достаточно напряженным, что очень часто наблюдается у маленьких детей и у пациентов с иммунной депрессией.

Необходимо также учитывать, что реакции не являются абсолютно специфическими ввиду наличия общих антигенов у возбудителей, относящихся к одному и даже разным видам. Специфичность серологических тестов зависит также от качества диагностикумов, правильности получения, хранения, транспортировки и обработки сыворотки. Нельзя использовать кровь, имеющую бактериальное загрязнение, гемолиз, посторонние примеси и длительно хранящуюся при комнатной температуре.

Для диагностики чаще используются:

1. Реакция агглютинации. (РА).

3. Реакции связывания комплемента. (РСК).

4. Реакция торможения гемагглютинации (РТГА)

5. Реакции лизиса (РЛ)

6. Радиоиммунологический метод (РИМ).

II. Выявления антигенов возбудителей с помощью диагностических сывороток содержащих известные антитела.

Выявления антигенов возбудителей – это нахождение в биологическом материале (сыворотка крови, секреты, выделения, пораженные ткани) токсинов возбудителей. Методы выявления антигенов возбудителей очень информативны и из-за легкости проведения и скорости получения конечного результата и относятся к быстрым методам (экспресс - методам) лабораторной диагностики.

Для диагностики чаще используются:

1. Реакция иммунофлюоресценции и реакция непрямой иммунофлюоресценции (РИФ, РНИФ).

2. Реакции агглютинации для обнаружения возбудителей (РА)

Типы реакций агглютинации.

А. Ориентировочная реакция агглютинации.

Б. Развернутая реакция агглютинации.

3. Реакции преципитации.

Типы реакции преципитации.

А. Реакция Асколя

Б. Реакция Оухтерлони.

4. Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

5. Метод иммуноферментативного анализа (ИФА).

Обнаружение возбудителей вирусных инфекций.

Наличие вируса в эмбрионе определяют с помощью 2 реакций:

1. Реакция связывания компонента.

2. Реакция гемагглютинации

А. Реакция нейтрализации вирусов на культуре клеток.

Б. Реакция гемагглютинации (РА).

3. Реакции торможения гемагглюнации (РТГА)

III. Иммунологические исследования (ИФА).

1. Иммуноферментативный анализ.

Реакция иммуноблотинга.

IV. Аллергические методы исследования.

Аллергические методы лабораторной диагностики основаны на выявлении гиперсенсибилизации организма к определенным токсинам отдельных микроорганизмов при введении в организм небольших доз специфических аллергенов. Аллерген вводится в небольших количествах накожно и внутрикожно и очень редко на слизистую оболочку.

При наличии специфической аллергической реакции через некоторое время в месте введения появляется специфическое аллергическое воспаление в виде гиперемии с инфильтрацией. Реакция считается положительной, если участок воспаления через 24-48 часов более 1 сантиметра в диаметре. Чаще этот метод лабораторной диагностики применяют для диагностики туберкулёза, токсоплазмоза, бруцеллеза, туляремии, орнитоза и сибирской язвы.