Прямые методы лабораторной диагностики.

I. Микроскопические методы.

II. Выделение чистой культуры возбудителя.

III. Биологические методы.

I. Микроскопические методы.

Микроскопические методы – это бактериоскопическая, вирусоскопическая и паразитологическая визуализация возбудителя. Микроскопия позволяет обнаружить возбудителя непосредственно в исследуемом патологическом материале с помощью всевозможных микроскопов и является одним из самых простых и доступных методов в диагностике инфекций.

Наиболее широко применяется микрокопирование микробов в определенном состоянии. Эта методика имеет много достоинств, позволяющих, изучить морфологические особенности микроорганизмов и может играть решающую роль при диагностике менингококковой инфекции, туберкулеза, гонореи, а так же при заболеваниях вызванными простейшими (малярия, лямблиоз, амёбиаз).

Из полученного биологического материала в лаборатории с помощью различных технологий готовят мазки. После приготовление мазка его высушивают, фиксируют и окрашивают. Простая окраска, для которой используется только один краситель (фуксин, метиленовый синий) позволяет ознакомиться с общей морфологией микроба. Сложные способы окраски применяются для дифференциации микробов. Наибольшее практическое значение имеет окрашивание по Граму, Цилю-Нильсону, Нейссеру и другие. Применяют также метод изучения микробов в живом, некрашеном виде. Этот метод имеет то преимущество, что микробы изучаются в неповреждённом виде. Метод обычно применяется для определения подвижности микроорганизмов и для изучения тонкой структуры крупных паразитов (грибов, простейших)

К микроскопическим методам обследования можно также условно отнести РИФ и РНИФ, нашедший применения для экспресс-диагностики инфекций.

Кроме нахождения микроорганизмов, для диагностики инфекций, изучают посторонние включения в отдельных клетках, скоплении вибрионов и продуктов реакции клеток - тельца Бабеша-Негри при бешенстве и т.д.

Обнаружение вирусов под электронным микроскопом очень трудоемкое, требует электронный микроскоп и в медицине имеет ограниченное применение.

Паразитологические методы – являются основными для диагностики паразитарных заболеваний (малярия, лямблиоз, амебиаз, криптоспоридиоз, пневмоцистоз, лейшманиоз и т. д.) В основе методов лежит микроскопия нативных или окрашенных и обогащенных мазков крови, экссудата, мокроты, кала или биоптатов из тканей органов.

II. Выделение чистой культуры возбудителя.

Выделение чистой культуры возбудителя – это посев биологического материала на специальные среды роста для получения чистой культуры возбудителя болезни. Нужно помнить, что способ забора биологического материала для исследования очень сильно влияет на эффективность конечного результата.

Правила забора биологического материала на исследование:

1. Материал нужно забирать до начала этиотропной терапии.

2. Строго соблюдать стерильность при заборе.

3. Категорически запрещается обрабатывать посуду дезинфицирующими растворами.

4. Добиваться минимального промежутка времени между забором материала и посевом на питательные среды.

При невозможности посева в первые 3 часа используют консервирующие смеси (водно-глицериновая, Кери-Блера и др.)

Исследованию можно подвергать все биологические материалы.

Материалы высевают на питательные среды, используя специальную методику посева, получают отдельные колонии, которые далее пересевают в диагностические среды. Для культивирования микроорганизмов используются различные питательные среды: простые (мясопептонный бульон, агар) и сложные (сывороточная среда).

Характер роста микроорганизмов (культурные свойства) является одним из критериев для его распознавания. Значение имеют величина, форма, консистенция, плотность, цвет поверхности колоний на плотных питательных средах, а в бульоне - наличие мути, осадка, плёнки.

Одним из основных диагностических методов при распознавании микроорганизмов является изучение их биохимических свойств. Особое значение это имеет при диагностике кишечных инфекций. Изучается способность микроорганизмов сбраживать углеводы с образованием кислоты или кислоты с газом, разлагать белковые продукты, способность образовывать каталазу и др.

Для обнаружения всех свойств материал помещают на дифференциально-диагностические среды, содержащие вещества, в отношении которых микроорганизмы проявляют свою ферментативную активность. Добавление в среду индикаторов меняющих цвет среды дает возможность легко узнавать результаты. Этот метод бактериологической диагностики называется «посев на пестрый ряд».

Обнаружение возбудителей вирусных инфекций имеет свои особенности, обусловленные особенностями вирусов – внутриклеточным паразитированием. Для культивирования вирусов используют культуры клеток, клетки почек обезьян, куриные и человеческие эмбрионы. Чаще применяют куриные эмбрионы на 8-12 день инкубации. Материал вводят в амниотическую полость, в желточный мешок или на оболочки. Зараженные яйца помещают в инкубатор на 3-10 дней. Срок инкубации зависит от вируса, способа заражения и цели исследования.

Культурами тканей называют смесь клеток, которые способны существовать вне организма. Вирусы культивируются во всех культурах тканей. В культуре тканей вирусы определяются по целому ряду признаков и показателей.

1. Бактериологические методы – это посев биологического материала, взятого от пациента, на специальные элективные среды роста. Учет колоний осуществляется после инкубации в термостате с экспозицией от нескольких часов до нескольких суток. В дальнейшем осуществляется биохимическое типирование возбудителей, фагирование и определение чувствительности к антибиотикам. Бактериологические методы лабораторной диагностики чаще применяют при ОКИ, коклюше, дифтерии, стрептококковой и стафилококковой инфекции.

2. Вирусологический метод – это посев биологического материала, взятого от пациента, на специальные среды роста. Метод очень трудоемок и не получил широкого применения в практике.