Тонкослойная хроматография Опыт 1. Идентификация аминокислот методом хроматографии на бумаге

На полоску хроматографической бумаги размером 10х50 мм нанесите 2 пробы – испытуемого образца и контрольной смеси, содержащей фенилаланин, аланин и лизин, значения R_f которых в используемом элюенте соответственно равны 0,64; 0,35 и 0,15. В хроматографическую камеру («пенициллиновую» склянку) налейте высотой не более 3 мм смесь бутанол - уксусная кислота - вода (1:1:1) и проведите хроматографирование. По достижении элюентом верхнего края достаньте бумагу пинцетом, высушите на воздухе, а затем над плиткой. Для обнаружения пятен погрузите бумагу на 1 с в 0,1%-й раствор нингидрина в ацетоне, высушите бумагу на воздухе и нагрейте над плиткой. Аминокислоты обнаруживаются в виде вишнево-фиолетовых пятен.

Вычислите значения R_f и определите, какая аминокислота содержалась в анализируемом растворе.

Опыт 2. Идентификация углеводов методом тсх

На пластинку «Силуфол» размером 10х50 мм нанесите 2 пробы – испытуемого образца и контрольной смеси, содержащей L-рамнозу, D-глюкозу и лактозу, R_f которых соответственно 0,56; 0,37; 0,19. В хроматографическую камеру («пенициллиновую» склянку) налейте высотой не более 5 мм элюент, которым служит смесь хлороформ – метанол (1:1), и проведите хроматографирование. Пластинку достаньте пинцетом и высушите на воздухе. Для обнаружения пятен поместите пластинку на плитку с закрытой спиралью, включенную на мощность ~800 Вт. Углеводы проявляются через несколько минут в виде коричневых пятен. Если пластинка начинает буреть (вследствие перегрева), немедленно снимите ее пинцетом с плитки. Вычислите значения R_f и определите, какое вещество содержится в анализируемом растворе.

Опыт 3. Хроматография продуктов гидролиза крахмала

На пластинку «Силуфол» наносите простым карандашом пять точек на расстоянии от нижнего края и 15 мм друг от друга. В эти точки из капиллярной пипетки нанесите поочередно по 5 капель кислотного гидролизата крахмала и 10%-ных растворов глюкозы, сахарозы и мальтозы, аккуратно подсушите пластинку после каждой капли над слабо нагретой электроплиткой. Диаметр пятна не должен превышать 5 мм. В хроматографическую камеру прилейте подвижную фазу (пропанол-2 : конц. уксусная кислота : вода = 9 : 3 : 3) в таком количестве, чтобы высота ее слоя была ниже нанесенного пятна пробы. Поместите в камеру подготовленную пластинку, с наклоном в лицевую сторону и выдержите до поднятия фронта растворителя на 10 см (15-20 мин). Пластинку выньте из камеры, аккуратно подсушите над электроплиткой, держа пластинку в горизонтальном состоянии. Затем обработайте из пульверизатора щелочным раствором перманганата калия (1г KMnO₄ и 2г Na₂CO₃ растворяют в 100 мл воды) или быстро и легко протрите тампоном, смоченным этим раствором. Высушите не перегревая при 100ºС. Сахара дают желтые пятна на пурпурном фоне, затем они превращаются в серые на коричневом фоне.

Обработка результатов эксперимента

Измерьте параметры:

• расстояние от центра пятна до линии старта (X);

• расстояние от линии поднятия фронта растворителя до линии старта (Y);

• рассчитайте значение фактора относительного удерживания (R_f = X/Y);

• заполните таблицу:

Вещество	Параметр Rf = X/Y
Глюкоза
Сахароза
Мальтоза
Кислотный гидролизат крахмала: глюкоза сахароза мальтоза
Ферментативный гидролизат крахмала: глюкоза сахароза мальтоза

Сформулируйте выводы.

Запишите, какие вещества образовались при кислотном и ферментативном гидролизе крахмала.