Государственное автономное научное учреждение

«Институт прикладных исследований Республики Башкортостан»

Академия наук Республики Башкортостан

МЕТОДИКА ИЗМЕРЕНИЙ

БИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ

МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТОКСИЧНОСТИ ПИТЬЕВЫХ, ГРУНТОВЫХ ПОВЕРХНОСТНЫХ И СТОЧНЫХ ВОД,

РАСТВОРОВ ХИМИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ ПО ИЗМЕРЕНИЮ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ВСХОЖЕСТИ СЕМЯН, СРЕДНЕЙ ДЛИНЫ И СРЕДНЕГО СУХОГО ВЕСА ПРОРОСТКОВ СЕМЯН КРЕСС-САЛАТА (LEPIDIUM SATIVUM)

Стерлитамак

2012

СОДЕРЖАНИЕ

1 Принцип метода.

2 Метрологические характеристики.

3 Оборудование, материалы, реактивы.

4 Требования безопасности, охрана окружающей среды

5 Требования к квалификации лиц, проводящих биотестирование

6 Условия проведения биотестирования.

7 Подготовка к проведению биотестирования

7.1 Подготовка посуды для отбора, хранения проб и биотестирования

7.2 Отбор, транспортировка, хранение и подготовка проб.

7.2.1 Отбор, транспортировка, хранение и подготовка проб воды

7.2.1.1 Отбор, транспортировка и хранение проб воды

7.2.1.2 Отбор, транспортировка и хранение проб отдельнывх химических веществ (включая отдельные группы фармпрепаратов).

7.2.1.3. Подготовка проб воды к биотестированию

7.2.1.4 Приготовление разбавлений исследуемых вод для биотестирования

8 Процедура биотестирования.

8.1 Эксперименты по установлению острого и хронического токсического действия.

9 Обработка, оценка и оформление результатов

9.1 Острые и хронические токсикологические эксперименты.

10 Проверка чувствительности тест-объектов к модельному токсиканту

Библиография.

Приложение А. Форма протокола отбора проб

Приложение Б. Форма регистрации условий и результатов биотестирования в рабочем журнале.

Приложение В. Протокол КТА (регистрационный номер, дата выдачи)

Приложение Г. Характеристика тест-объекта

Приложение Д. Свидетельство об аттестации МВИ.

Назначение и область применения методики

Настоящий документ устанавливает методику определения острой и хронической токсичности питьевых, грунтовых поверхностных и сточных вод, растворов отдельных химических веществ с использованием в качестве тест-объекта различных сортов семян кресс-салата (ГОСТ 52171-2003. Семена овощных, бахчевых культур, кормовых корнеплодов и кормовой капусты. Сортовые и посевные качества. Общие технические условия).

1 Принцип метода

Метод основана на определении процента всхожести, измерения длины проростков и сухого веса проростков семян кресс-салата (Lepidium sativium) при воздействии токсических веществ, присутствующих в исследуемой водной среде, по сравнению с пробами, не содержащих токсических веществ (контроль).

Острое токсическое действие растворов, питьевых, грунтовых, поверхностных и сточных водах, отдельных химических веществ на кресс-салат определяется по всхожести семян, за определенный период экспозиции. Критерием острой токсичности служит нулевая всхожесть всех сортов кресс-салата в исследуемых растворах при условии, что в контрольном эксперименте всхожесть достоверно выше.

По данной методике возможно одновременное выделение как острой, подострой, так и хронической токсичности:

- острая токсичность или интегральная токсичность выявляется при совокупном действии веществ в растворах сложного химического состава (кратность разбавления, питьевых, грунтовых поверхностных и сточных вод, отдельных химических веществ), вызывающую нулевую всхожесть семян тест-организмов;

- подострая токсичность - не вызывающая эффекта острой токсичности при совокупном действии веществ в растворах сложного химического состава (кратность разбавления, питьевых, грунтовых, поверхностных и сточных водах, отходов фармацевтических растворах и отдельных химических веществ), вызывающих всхожесть семян более чем нулевая, и различные эффекты изменения средней длины проростков и среднего сухого веса проростков.

- хроническая токсичность - действие растворов отдельных химических веществ, или интегральное действие веществ в растворах сложного химического состава исследуемой кратности разбавления, питьевых, грунтовых поверхностных и сточных вод и растворов отдельных химических веществ на кресс-салат определяется по всхожести за период до 7 суток в исследуемых пробах по сравнению с контрольными пробами. Критерием хронической токсичности служит наличие зависимости между кратностью разбавления и величинами анализируемых параметров.

Дополнительно рассматривается стимулирующий эффект - кратность разбавления питьевых, грунтовых поверхностных и сточных вод, растворов отдельных химических веществ.

2 Метрологические характеристики

При соблюдении всех регламентированных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой значение погрешности (и ее составляющих) результатов измерений, не превышают значений, приведенных в таблице 1.

Та б л и ц а 1 - Значения метрологических характеристик для различных анализируемых объектов.

Объект	Показатель точности (границы относительной погрешности) ±δ, %, при Р = 0,95	Показатель повторяемости (относительное среднеквадратичное отклонение повторяемости), σr, %	Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратичное отклонение воспроизводимости), σR, %	Предел повторяемости, r, %, P = 0,95, n = 2
Вода питьевая, грунтовая поверхностная, сточная, растворы химических веществ

В данной методике представлены три модификации проведения анализа в зависимости от условий биотестирования:

1 В первой модификации проращивание семян проводится в климатической камере с фиксированными температурой, влажностью и фотопериодом. В данном случае возникает необходимость постоянного контроля за процессом роста семян, кроме того объем исследований ограничивается емкостью климатической камеры.

2 Во второй модификации проращивание семян проводят в помещении при комнатной температуре. Данная модификация позволяет осуществлять большой объем исследований, чем в первой модификации.

3 В третьей модификации проращивание семян осуществляют в природных условиях (на веранде или в не отапливаемом помещении) в вегетационный период. В данной модификации не предусмотрено определение среднего сухого веса. проростков семян (смотри рис.1).

Рис 1. Проведение анализа по 3-й модификации.