- •Предмет, завдання і методологія біотехнології рослин
- •Історія розвитку методу культури клітин, тканин та органів рослин
- •Організація і обладнання біотехнологічної лабораторії
- •Посуд, інструменти і матеріали
- •Миття посуду
- •Методи стерилізації посуду
- •Методи стерилізації інструментів
- •Контрольні запитання і завдання
- •Живлення культури тканин
- •Мінеральне живлення
- •Вуглеводневе живлення
- •Стимулятори росту
- •Фітогормони
- •Рослинні екстракти
- •Приготування живильних середовищ
- •Стерилізація живильних середовищ
- •Стерилізація рослинного матеріалу
- •Контрольні запитання і завдання
- •Культура ізольованих органів і зародків
- •Контрольні запитання і завдання
- •Культура ізольованих клітин і тканин
- •Культура калюсних тканин
- •Особливості калюсних клітин
- •Генетика калюсних клітин
- •Культура клітинних суспензій
- •Культивування ізольованих клітин
- •Методи оцінки результатів
- •Мікроклональне розмноження рослин
- •Методи мікроклонального розмноження рослин
- •Етапи мікроклонального розмноження рослин
- •Контрольні запитання і завдання
- •Кріоконсервація клітин рослин
- •Контрольні запитання і завдання
- •Клітинна селекція
- •Спонтанні та індуковані мутанти
- •Контрольні запитання і завдання
- •Культура рослинних клітин і речовини вторинного синтезу
- •Фактори, які впливають на вихід продуктів
- •Компоненти середовища
- •Фізичні фактори
- •Селекція і відбір
- •Утворення вторинних речовин в культурах рослинних тканин
- •Глікозиди
- •Контрольні запитання і завдання
- •Культура ізольованих протопластів і соматична гібридизація
- •Виділення і очистка ізольованих протопластів картоплі
- •Виділення протопластів із мезофілу листка
- •Виділення протопластів із культури клітин
- •Культивування ізольованих протопластів
- •Умови культивування протопластів
- •Злиття ізольованих протопластів
- •Селекція соматичних гібридів
- •Генетична трансформація
- •Вектори для генетичної трансформації рослин
- •Плазміди агробактерій як вектори для трансформації
- •Вектори на основі днк-вмісних вірусів рослин
- •Методи перенесення чужинних генів у рослини
- •Трансгени і екологія
- •Контрольні запитання і завдання
- •Практичний курс Приготування і стерилізація живильних середовищ
- •Робота 1. Приготування маточних розчинів для середовища Мурасиге і Скуга (мс)
- •Робота 2. Приготування середовища Мурасиге і Скуга (мс). Стерилізація середовища автоклавуванням
- •Робота 3. Стерилізація рідких середовищ пропусканням через бактеріальний фільтр (холодна стерилізація)
- •Стерилізація рослинного матеріалу Робота 4. Стерилізація насіння і вирощування асептичних рослин
- •Робота 5. Стерилізація бульб, коренеплодів і кореневищ
- •Робота 6. Стерилізація листків
- •Робота 7. Стерилізація меристем
- •Калюсна культура Робота 8. Отримання первинного калюсу із різних експлантатів асептичних рослин
- •Робота 9. Дослідження явища фізіологічної полярності
- •Робота 10. Отримання перевивної калюсної культури
- •Робота 11. Дослідження впливу співвідношення ауксин:цитокінін у живильному середовищі на ріст калюсної тканини та її тип
- •КлітиннА суспензіЯ Робота 12. Отримання клітинної суспензії з калюсної тканини
- •Мікроклональне розмноження рослин Робота 13. Мікроклональне розмноження рослин живцями
- •Робота 14. Стебловий органогенез із листкових дисків тютюну
- •Середовища для мікроклонального розмноження тютюну та моркви (1 л середовища)
- •Робота 15. Ризогенез із листкових дисків тютюну
- •Робота 16. Прямий ембріогенез
- •Хід роботи
- •Робота 17. Непрямий ембріогенез
- •Культура ізольованих протопластів вищих рослин Робота 18. Виділення і культивування ізольованих протопластів вищих рослин
- •Словник термінів
- •Список літератури
Середовища для мікроклонального розмноження тютюну та моркви (1 л середовища)
Компоненти |
МКР-1 |
МКР-2 |
МКР-3 |
МКР-4 |
МКР-5 |
Макро МС |
100 мл |
100 мл |
100 мл |
100 мл |
100мл |
Мікро МС |
1 мл |
1 мл |
1 мл |
1 мл |
1 мл |
Fe-хелат |
5 мл |
5 мл |
5 мл |
5 мл |
5 мл |
Мезоінозит |
100 мг |
100 мг |
100 мг |
100 мг |
100 мг |
В1 |
0,1 мг |
0,1 мг |
0,1 мг |
0,1 мг |
0,1 мг |
В6 |
0,5 мг |
0,5 мг |
0,5 мг |
0,5 мг |
0,5 мг |
РР |
0,5 мг |
0,5 мг |
0,5 мг |
0,5 мг |
0,5 мг |
БАП |
1 мг |
|
|
0,1 мг |
0,1 мг |
Кінетин |
|
0,5 мг |
|
|
|
НОК |
0,1 мг |
|
|
|
2 мг |
ІМК |
|
2 мг |
|
|
|
2,4-Д |
|
|
1 мг |
2 мг |
|
Сахароза |
3% |
3% |
|
3% |
3% |
Агар |
0,8% |
0,8% |
|
0,8% |
0,8% |
рН |
5,6-5,8 |
||||
ХІД РОБОТИ
1. Банку з рослиною протерти спиртом і обпалити горло у полум’ї спиртівки.
2. Стерильним пінцетом витягти рослину тютюну із банки і помістити її у стерильну чашку Петрі.
3. Притримуючи рослину пінцетом, скальпелем обрізати листки.
Верхівку рослини тютюну з апікальною меристемою доцільно помістити у банку з середовищем для рослин МС.
4. Окремий листок перенести у стерильну чашку Петрі і нарізати на сегменти площею 0,5-1,0 см2.
5. Листкові експлантати помістити на середовище для стеблового органогенезу МКР-1.
6. Культивувати при 250С+10С і 16-годинному фотоперіоді.
7. Через 2-3 тижні починається формування стеблових бруньок.
8. Через 3-4 тижні відокремити окремі великі бруньки і преренести на середовище МС для отримання паростків. Умови культивування ті ж.