КлітиннА суспензіЯ Робота 12. Отримання клітинної суспензії з калюсної тканини

Мета роботи: набуття навичок по отриманню клітинних суспензій; отримати суспензійну культуру картоплі (тютюну, топінамбура тощо).

Матеріали і обладнання: калюсна культура картоплі (тютюну, топінамбура тощо), вирощена на середовищі для калюсу №1 ( табл. 8 ), колби Ерленмейера на 250 мл з рідким (без агару) середовищем для калюсу №1 (100 мл середовища на колбу), стерильні чашки Петрі, фольга, пінцети, скальпелі, спирт, спиртівка, ламінар-бокс, шейкер, стерильні лійки з нейлоновими фільтрами.

ХІД РОБОТИ

1. Перенести шматочки калюсної тканини у стерильну чашку Петрі.

2. Стерильним пінцетом подрібнити калюс на фрагменти.

3. Фрагменти калюсної тканини помістити у колби Ерленмейера з рідким живильним середовищем ( 2-3г/100 мл ).

4. Колби з рослинним матеріалом культивувати у темряві на шейкері при 120 об/хв.

5. Через 10-14 днів середовище з клітинною суспензією профільтрувати через нейлон.

6. Фільтрат розділити на 3 порції, які розлити у стерильні колби Ерленмейера.

7. До клітинної суспензії додати свіже середовище, довести об’єм до 100 мл.

8. Колби з суспензійною культурою знову помістити на шейкер.

9. Субкультивування клітинної суспензії проводити кожні 14-18 днів.

Для цього у ламінар-боксі із колби з клітинною суспензією забрати 50-60 мл ( 2/3 об’єму) середовища з клітинами і замінити свіжим середовищем того ж складу. Відібране середовище перенести у стерильну колбу Ерленмейера і свіжим середовищем довести об’єм до 100 мл.

Мікроклональне розмноження рослин Робота 13. Мікроклональне розмноження рослин живцями

Мета роботи: оволодіти методикою вегетативного розмноження рослин in vitro, яка базується на активації пазушних меристем.

Матеріали і обладнання: асептичні рослини картоплі, гвоздики або тютюну, стерильне середовище МС (у пробірках для рослин картоплі і гвоздики або баночках для рослин тютюну), стерильні чашки Петрі, скальпелі, пінцети, спирт, спиртівка, ламінар-бокс.

ХІД РОБОТИ

1. Пробірку з рослиною протерти спиртом і обпалити горло у полум’ї спиртівки.

2. Стерильним пінцетом витягти рослину-регенерант із пробірки, в якій вона росла і помістити її у стерильну чашку Петрі.

3. Підтримуючи рослину пінцетом, скальпелем порізати стебло на сегменти довжиною приблизно 10 мм так, щоб частина над брунькою становила 2-3 мм, а під нею - 5-7 мм. Обрізати листки.У верхівки рослини листки не обрізати.

4. Пінцетом перенести кожний сегмент у пробірку з живильним середовищем МС.

Пазуха листка має знаходитись над середовищем.

5. Культивувати при температурі 25⁰-28⁰С, освітленні 2-3 клк, 16-годинному фотоперіоді, відносній вологості повітря 70-75%.

6. Через 3-4 тижні з пазушних бруньок розвиваються рослини-регенеранти, які знову можна використати для розмноження живцюванням та інших цілей.

Робота 14. Стебловий органогенез із листкових дисків тютюну

Мета роботи: отримати рослини тютюну, регенеровані із листкових дисків.

Матеріали і обладнання: рослини тютюну, вирощені in vitro, баночки зі стерильним середовищем МС, чашки Петрі з середовищем МКР-1 (табл. 15), стерильні чашки Петрі, скальпелі, пінцети, спирт, спиртівка, парафілм, ламінар-бокс.

Таблиця 15