6. Тест с нитроцианидом (реакция Бранда)

Метод: к 0,5 мл мочи прибавить 200 мкл 5% цианида натрия. Через 10 минут прибавить 20 мкл насыщенного раствора нитроцианида натрия. Смешать и немедленно определить цвета.

Обычно наблюдается окраска образцов от оранжевого к ярко красному цветам. Темно вишнево-красная или пурпурно-красная окраска указывает на наличие серу содержащих кислот, в особенности дисульфидов (Таблица 3). Цвет может также указывать на наличие гомоцистинурии, цистинурии или другого метаболического нарушения.

Таблица 3

Причины положительного теста с нитроцианидом

Вещество	Нарушение / причина
Цистин	Цистинурия, гипераргининемия, генерализованная гипераминоацидурия
Гомоцистин	Классическая гомоцистинурия, дефицит кобаламина, цистатионинурия (бактерии при инфекции мочевыделительных путей)
Глютатион	Нарушение гамма-глютамилового цикла
Лекарственные препараты	N-ацетилцистеин, пеницилламин, каптоприл, ампициллин и прочие.

Повышенные количества кетонов может приводить к ложно положительному результату в тесте на наличие нитроцианида (реакция Бранда). Тест следует проводить лишь в лаборатории, так как цианид натрия является веществом токсичным.

При альтернативном методе используется метод восстановления дисульфидов с помощью водорода, который выделяется в ходе реакции HCl c Zn. Затем с образованием стабильного кольца фуксина после контакта с гидроокисью аммиака в сахарозе, в реакцию с нитроцианидом вступают цистеин и гомоцистеин.

7. Проба Фелинга

К 3 мл мочи прибавить 1 каплю 1N раствора HCl, встряхнуть. После этого прибавить 6 капель 10% водного раствора FeCl₃.

Положительная реакция считается при появлении зеленой окраски раствора. Наличие сине-зеленой или серо-зеленой окраски указывает на положительный результат, который свидетельствует о наличии в моче фенилпировинограднои, имидазолпировинограднои β-гидроксифенилпировинограднои, б-кетометилвалериановои кислот, которые экскретируются при фенилкетонурии, гистидинемии, тирозинемии, лейцинозе соответственно (результат положительный, если уровень фенилаланина мочи выше 15 мг%).

8. Днфг-проба для выявления кетокислот

К 0,25 мл мочи прибавить 1мл 0,2% раствора 2,4-ДНФГ в 2 N соляной кислоте.

Подготовка реактива: 3г 2,4-ДНФГ растворить в 1 литре 2N соляной кислоты (158 мл концентрированной HCl привести к 1л дистиллированной водой), нагреть на водной бане в течение 12 часов. Полученную жидкость после охлаждения фильтровать.

Через 10 минут прибавить равный объем этилового эфира. После смешивания эфир отобрать в другую пробирку, куда прибавить равный объем 10% раствора карбоната натрия (Na₂CO₃). Содержимое пробирки перемешать.

При окраске нижнего пласта в желтый или оранжевый цвет реакция считается положительной (присутствуют фенилпировиноградная, имидазолпировиноградная, пировиноградная и прочие кетокислоты).

Принцип реакции – способность кетокислот мочи вступать в реакцию с 2,4-ДНФГ с образованием окрашенных гидразонов. Интенсивность окраски оценивается визуально от 0 к ++++. При отрицательной пробе нижний пласт остается бесцветным, при резко положительной - ++++ - окрашенный в темно-оранжевый почти коричневый цвет.