Правила по технике безопасности при работе в лаборатории

При проведении работ нужно соблюдать общие правила техники безопасности, выполнение которых обязательно для каждого работающего в лаборатории независимо от характера эксперимента.

1. Во время работы в лаборатории необходимо соблюдать чистоту, тишину и порядок. Посторонним лицам запрещено посещать студентов во время эксперимента, отвлекать их.

2. К выполнению каждой работы приступать только студентам, прошедшим инструктаж по технике безопасности, что фиксируется в специальном журнале.

3. Рабочее место следует держать в чистоте. Нельзя загромождать его посудой, бумагой, ненужным материалом.

4. При нагревании жидкостей и твердых тел в пробирках либо в колбах нельзя направлять отверстие сосуда на себя или на соседей.

5. Категорически запрещено пробовать какие-либо вещества на вкус.

6. При взвешивании запрещено насыпать химические вещества непосредственно на чашку весов.

7. Всю посуду после работы с минеральными кислотами, щелочами и ядовитыми веществами следует сразу же тщательно вымыть.

8. При обращении со стеклянной химической посудой и приборами необходимо соблюдать меры предосторожности. Стеклянную посуду следует держать осторожно, не сжимая ее сильно пальцами. Мыть посуду ершами или стеклянной палочкой надо аккуратно, так как ими легко пробить дно или стенки стеклянной посуды, что может привести к порезам.

9. Студенты должны проводить исследования в белом халате, чтобы избежать порчи одежды химическими реактивами и для соблюдения стерильности во время работы в ламинар-боксе.

10. Выливать в раковины остатки стерилизующих веществ, отработанные питательные среды строго запрещено.

11. Работать в ламинар-боксе при включенной ультрафиолетовой лампе строго запрещено.

12. Спиртовую горелку не оставлять зажженной без присмотра.

13. Нагревание растворов и питательных сред необходимо проводить в стеклянной посуде на асбестовой сетке.

14. Запас спирта и других летучих жидкостей в лаборатории должен быть небольшим, необходимым для текущей повседневной работы.

15. По окончании работы необходимо рабочее место привести в порядок, проверить, выключены ли электрические приборы, вода в лаборатории.

Лабораторная работа № 1 Организация биотехнологической лаборатории

Цель работы: ознакомиться с организацией биотехнологической лаборатории, современным оборудованием, реактивами, а также способами стерилизации, применяемые в биотехнологии.

Теоретические основы

Для организации биотехнологической лаборатории необходимы просторные изолированные помещения, а также современное оборудование и высококачественные реактивы.

Главным условием функционирования лаборатории является соблюдение строгой стерильности во всех помещениях.

Лаборатория клеточной или генной инженерии включает в себя несколько помещений:

• лаборантскую комнату;

• моечную комнату;

• автоклавную комнату;

• комнату для проведения стерильной работы;

• световую комнату;

• комнату для обработки и хранения информации по исследованиям;

• адаптационную комнату;

• складская комната;

• раздевалку.

Лаборантская комната предназначена для приготовления питательных сред. В ней должны быть: холодная и горячая вода, лабораторные столы, шкафы для хранения чистой посуды и необходимых химических реактивов надлежащей степени чистоты (ХЧ, Ч, ЧДА), холодильники для хранения химических реактивов, аналитические (электронные) весы (точностью до 0,0001 г), электроплитки, дистиллятор, посуда химическая и биологическая для приготовления, хранения и стерилизации питательных сред, пипетки и микропипетки (на 0,01 … 10 мл), инструменты (шпатели, металлические пинцеты, скальпели, препаровальные иглы).

Моечная комната используется для мытья химической и биологической посуды. Оборудование моечной комнаты: мойки с горячей и холодной водой; дистиллированная вода; дистилляторы и бидистилляторы; сушильные шкафы с режимом работы для сушки посуды – до 100 – 130 ⁰С, для инструментов – до 170 ⁰С; шкафы для хранения чистой посуды и инструментов, емкости для хранения моющих средств, вытяжные шкафы с эксикаторами для хромпика (Н₂SO₄ 98% + K₂CrO₇). Моечную комнату желательно располагать изолированно, без контактирования со стерильными материалами, посудой, растениями.

Автоклавная комната предназначена для стерилизации питательных сред, инструментов и вспомогательных материалов. Оборудование помещения для стерилизации: автоклавы с режимом работы – давление 1-2 атмосферы и температура 120⁰С; сушильные шкафы для стерилизации посуды и инструментов сухим жаром, стеллажи для штативов с питательными средами; шкафы для хранения стерильных материалов. Данное помещение должно быть оборудовано приточно – вытяжной вентиляцией и иметь канализационный слив для отвода конденсата из автоклава.

Комната для проведения стерильной работы (бокс, операционная комната) предназначена для введения растительного материала в культуру in vitro и пересадки микрокультуры. Оборудование комнаты для инокуляции растительных эксплантов на питательные среды: ламинар – боксы, лабораторные столы, стеллажи, бактерицидные лампы, шкафы для материалов и оборудования.

Световая (культуральная комната) используется для выращивания растительных тканей в условиях in vitro. Оборудование культуральных комнат: световое оборудование – источники освещения со спектром близким к спектру дневного света (от 3 до 10 kLx), кондиционер для регуляции температуры (25± 2⁰С) и влажности воздуха (70%), стеллажи для штативов с культивируемым материалом; темновое отделение – с тем же оборудованием, исключая источники освещения. Для культивирования эксплантов на питательной среде желательно использовать термостаты или хладотермостаты, способные с высокой точностью поддерживать задаваемые режимы температуры и влажности воздуха, а также качалки.

Комната для обработки и хранения информации по исследованиям необходима для планирования, обработки и хранения данных экспериментов.

Адаптационная комната предназначена для адаптации микрорастений к почвенным или гидропонным условиям выращивания. Ее оборудуют стеллажами для ящиков (горшочков) с грунтом или гидропонными установками, а также дополнительным освещением.

Необходимый набор посуды, инструментов и материалов в биотехнологической лаборатории: мерные колбы, колбы Эрленмейера (конические), химические стаканы на 50,100,200,250,500 и 1 л, мерные цилиндры, чашки Петри, пробирки, бутылки, пипетки, стеклянные палочки, стеклянные и мерные фильтры, ланцеты (в том числе глазные, хирургические, анатомические), ножницы, пинцеты, ножы, бритвенные лезвия, препаровальные иглы, шпатели, бумага (оберточная, пергаментная, фильтровальная), фольга алюминиевая, вата.

Все работы с культурой клеток и тканей in vitro проводят в стерильных (асептических) условиях в стерильном боксе или ламинар – боксе, стерильными инструментами, в стерильной посуде, на стерильных питательных средах. В случае нарушения стерильности на средах хорошо развиваются микроорганизмы (грибы, бактерии), нарушающие состав среды и подавляющие рост растительных эксплантов.

Чаще всего для стерилизации помещений (боксов для пересадки тканей, культуральных комнат) используют ультрафиолетовое облучение в течение 0,5 – 2 часов (в зависимости от площади помещения). Работы в облученном помещении начинают через 15 – 20 минут после отключения бактерицидных ламп, так как под действием ультрафиолетового излучения двухатомный кислород воздуха становится трехатомным озоном – газом токсичным для человека. Для достижения максимальной стерильности перед обработкой УФ все поверхности тщательно отмываются моющими средствами, водой и растворами хлорсодержащих веществ, поверхности ламинар – бокса обрабатывают 96 % спиртом.

Посуду, халаты, вату, бумагу, дистиллированную воду, питательные среды стерилизуют в автоклавах под давлением пара 1 – 2 атмосферы и температурой 120 ⁰С в течение 20 – 60 минут, в зависимости от объема стерилизуемого материала.

Колбы, штативы со средой, вату, бумагу, халаты перед автоклавированием заворачивают в целлофановую бумагу, либо помещают в биксы.

Металлические инструменты автоклавировать нельзя, так как под действием пара образуется ржавчина. Поэтому их стерилизуют сухим жаром в термостатах с температурой 170 –250 ⁰С в течение 1 – 2 часа.