Высев суспензионной культуры на твердую агаризованную питательную среду (метод Плейтинга)
Материалы и оборудование: суспензионная культура, стерильные чашки Петри, цилиндр, среда для роста клеточной суспензии с двойным содержанием агара (1,2-1,4 %).
Ход выполнения работы:
Для проведения работ по клеточной селекции мелкоагрегированную суспензионную культуру высевают на агаризованную питательную среду. При этом одиночные клетки и клетки, входящие в состав мелких агрегатов, делятся и образуется каллусная ткань, из которой в дальнейшем формируются растения-регенеранты.
Клеточную суспензию переливают в стерильный цилиндр и оставляют на 5 минут. Пипеткой отбирают 5 мл верхней фракции суспензии (она обогащена одиночными клетками) и смешивают в стерильном цилиндре с 5 мл теплой (36 оС) питательной среды для роста каллусной ткани. Эта среда должна содержать двойное количество агара, т.е. 1,4 %. Содержимое цилиндра быстро разливают в чашки Петри, дают остыть, закрывают крышками и парафилмом.
Через 3-5 недель подсчитывают колонии клеток диаметром более 1 мм. Эффективность высева, %, рассчитывают по формуле:
кол-во образовавшихся колоний
Э
В
=
. 100 %
Количество высеянных клеток
Плотность высева обычно составляет 1.105 клеток на 1 мл. Этот показатель не должен быть очень высоким, чтобы растущие колонии не сливались. Через 3 недели подсчитывают количество колоний в каждой чашке Петри.
Контрольные вопросы:
1. Основные характеристики суспензионной культуры.
2. Фазы ростового цикла суспензии.
3.Как определить степень агрегированности и жизнеспособности суспензий?
4.Как подсчитать плотность суспензии?
5.Каковы основные способы культивирования одноклеточных суспензий?
6. Методика выполнения работы.
Подписано в печать число.месяц.год.
Формат бумаги XxY 1/16
Бумага типографская. Печать офсетная. Объем …п.л.
Тираж ….экз. Заказ № …*
© Издание Южно-Казахстанского государственного университета
им. М.Ауезова
Издательский центр ЮКГУ им. М.Ауезова, г. Шымкент, пр. Тауке хана, 5