7.Методы культивирования вирусов. Типы культур ткани.

Вирусы не способны культивироваться на питательных средах, т.к. являются внутриклеточными паразитами.

1. Метод культивирования в организме чувствительных экспериментальных лабораторных животных.

2. Культивирование вирусов в развивающихся куриных эмбрионах.

3. Метод культивирования вирусов в культуре ткани

– для культивирования вирусов вне организма используют эмбриональные, опухолевые клетки, которые активно размножаются в специальных питательных средах для культуры тканей.

Типы культур тканей:

1) перевиваемые тканевые культуры – культуры обычно опухолевых клеток. Они стандартные, одинаковы во всех лабораториях мира; их нужно постоянно поддерживать;

2) первично-трипсинизированные тканевые культуры разной степени зрелости.

8. Особенности противовирусного иммунитета.

Защитные реакции на внеклеточный вирус (вирион) направлены непосредственно на патогенный агент, в то время как их воздействие на внутриклеточную стадию развития вируса происходит опосредовано через клетку. При этом подавляются различные стадии репродукции вируса, например, репликация вирусных НК, процесс освобождения вирионов из клетки или же наступает гибель пораженной клетки.

Против вируса в организме действуют специфические и неспецифические механизмы резистентности. Кожа, слизистые обладают пониженной барьерной функцией в отношении вирусов. Вирусы могут подавлять фагоцитоз. Из гуморальных факторов сыворотки противовирусной активностью обладает комплемент и система пропердина. Могут циркулировать низкомолекулярные белки с противовирусной активностью, по строению тождественные рецепторам чувствительных к вирусу клеток. Отсутствие рецепторов на клетках к вирусам (ареактивность тканей) делает невозможным развитие вирусной инфекции. Иммунными механизмами противовирусной защиты является гуморальный и клеточный иммунный ответ.

Гуморальный иммунитет- выработка АТ – антитела действуют только на внеклеточные формы вируса, когда он находится в крови, в лимфе и не способны проникать внутрь клеток, зараженных вирусом.

Очевидно, есть в организме какие-то механизмы, позволяющие в первые часы после заражения: во-первых, ограничить размножение вируса внутри клетки, во-вторых, воспрепятствовать заражению новых клеток.

Впервые столкнулись с этим механизмом столкнулись два американских исследователя Г. Финдлей и Ф. Маккалум. Однажды, не располагая достаточным числом обезьян, ученые заразили смертельным вирусом животных, которым несколько дней назад была введена ослабленная разновидность вируса желтой лихорадки.

Произошло непонятное: обезьяны не только не погибли, но даже не заболели. Их результаты позволяли сделать вывод, что найдена совершенно новая возможность спасти животных от смертельных вирусов. Для этого нужно ввести им незадолго до заражения другой, 2 малоопасный вирус, который даже может быть вирусом совершенно иного вида. Таким образом, в медицине появился новый термин «интерференция» вирусов.

С самого начала этих работ ученым стало ясно, что природа интнрференции связана с каким-то неспецифическим механизмом. Однако в течение 20 лет ученые объясняли защитный механизм интерференции простой конкуренцией между двумя вирусами.

В 1957г. английский ученый А. Айзекс и его молодая практикантка доктор Д. Линденман установили, что если внести в культуру ткани инактивированный теплом вирус гриппа, то зараженные клетки начинают вырабатывать какое-то белковое вещество и выделять его в окружающую среду. В незараженных клетках такого белка обнаружить не удалось.

Айзекс назвал открытый им белок ИНТЕРФЕРОН. Молекулы интерферона наделены весьма важными и интересными свойствами :они полностью лишены какого-либо побочного действия на организм. Защита от вирусов наблюдается в клетках только того вида животных, которые вырабатывали интерферон. В отличие от антител он подавляет размножение практически всех известных вирусов.

Как теперь установлено, что в первые дни после заражения от смертельного воздействия любого вируса организм защищает именно интерферон. Противовирусная активность интерферона не оставляла сомнение. Оставалось неясным «почему «как» это происходит.

С. Барону удалось установить, что как только вирус проникает в цитоплазму клетки и начинает там «раздеваться» клетка воспринимает эти свойства за сигнал тревоги. Формирующиеся при этом двунитчатые РНК служат стимулом для образования интерферона. А происходит это потому, что в здоровых клетках никогда не бывает двунитевых РНК, а только однонитевые. Таков был ответ «почему».

Ответ на второй вопрос « как» потребовал гораздо больше времени. Оказалось, что, когда клетка получает сигнал опасности, немедленно включается ген-оператор. Начинается синтез информационной РНК, а затем на ее матрице в полисомах клетки происходит сборка белковых молекул, которые мы называем интерфероном.

Период образования многих тысяч молекул интерферона в зараженной клетке обычно занимает от двух до шести часов. Значит он намного короче, чем период репродукции вирусного потомства. А раз так, клетка успевает опередить агрессора. Небольшая молекула интерферона может легко проходить через клеточные оболочки. Пока в зараженной клетке идет размножение вируса, интерферон уже успевает образоваться, выйти из этой зараженной клетки наружу в кровь, в лимфу, в окружающее пространство и проникнуть в другие клетки.

Интерферон – в настоящее время единственный обнаруженный природный белок, обладающих противовирусной активностью в отношении внутриклеточных форм вируса, нарушающий его репродукцию.