80.Прямой флуоресцентный анализ.

Флуоресцентный метод может быть использован для прямого и косвенного количественного анализа. Прямые определения ведут непосредственно по флуоресценции исследуемого образца. Они применяются чаще при анализе органических веществ. Среди неорганических очень мало веществ, способных флуоресцировать самостоятельно (исключение – соединения урана, церин, самария европия).Люминесцентный метод может быть использован и для качественного и для количественного определения неорганических ионов. Эти определе­ния основаны на том, что при взаимодействии неорганического иона с органическим соединением может протекать одна из трек реакций, приводящих к:

– возникновению флуоресценции в присутствии определяемого катиона при использовании нефлуоресцирующего реагента. Например, оксихинолин сам не флуоресцирует, но в присутствии различных катионов он дает флуоресцентное свечение разного цвета, т.е. позволяет проводить качественное определение катионов. По интенсивно­сти свечения может быть определено и количественное содержание катиона. Чувствительность метода при использовании оксихинолина 0,025-1,0 мкг/мл;

– изменению флуоресценции реагента в присутствии анализи­руемого катиона. Так действуют ализарин, морин, родамин и др.органические соединения, которые изменяют цвет своего флуоресцентного свечения и его интенсивность в присутствии различных катионов. Таким методом алюминий может быть обнаружен в мини­мальной концентрации 0,0005 мкг/мл;

– гашению флуоресценции органического реагента в присутствии анализируемого катиона. Так может быть определен ион фтора, который гасит флюоресценцию комплекса алюминия с флуоресцеи­ном.

Индентификация органических веществ прямым флуоресцентным методом достаточно затруднительна. Сложность обусловлена прежде всего тем, что спектры флуоресценции растворов большинства органических веществ малоспецифичны. Они чаще всего представляют собой широкие полосы, прекрывающиеся или даже совпадающие у разных веществ. Однако для порфиринов, витаминов, антибиотиков, хлорофилла и ряд др. веществ, в спектрах люминесцении которых характеристические полосы, при использовании лазерных источников возбуждающего излучения пределы обнаружения составляют10^-7-10^-11%.Значительно более информативными являются спектры флуо­ресценции в парах, получение которых, как правило, эксперимен­тально трудно выполнимо, а для малолетучих соединений недости­жимо.

Для снижения неспецифичности и выявления тонкой структуры спектров флуоресценции часто их снимают при низких температу­рах (например при температуре жидкого азота), при этом подбирают растворители, в которых наиболее отчетливо проявляется структура спектров, их т.н. квазилинейчатый характер, имеющий ярко выра­женный индивидуальный характер. Такой способ применяют, например, для количественного определения полициклических ароматических углеводородов, а также бензола, его гомологов и производных. Пределы обнаружения – 10^-4 -10^-8 °/о. При анализе многокомпанентных объектов приходится делать их предварительное разделение, например, экстракцией, хромо­тографией, т. к. спектры смесей имеют, как правило, вид неидентифицируемых очень широких полос. Люминесценцию используют в иммунохимическом анализе для определения антител, гормонов, ле­карственных препаратов, вирусных и бактериальных антител. При этом флуоресцирующее вещество, например редкоземельные элементы, присоединяют непосредственно к антителу и проводят измерение интенсивности люминесценции. Чувствительность метода - до 10^-14 моль/л.