Практические занятия по теме: «Химия липидов» Дата_________________

Лабораторная работа №4 «Определение общих липидов».

Липиды – это группа органических веществ, характеризующиеся нерастворимостью в воде (гидрофобностью), растворимостью в органических растворителях.

Группу «общих липидов» (ОЛ) плазмы составляют нейтральные жиры (ТГ), фосфолипиды, холестерин (ХС), эфиры ХС, гликолипиды, свободные жирные кислоты (СЖК).

Для количественного определения содержания ОЛ в сыворотке (плазме) крови применяют несколько групп методов, среди которых можно назвать гравиметрические, окислительные, турбидиметрические, методы, основанные на цветной реакции, развивающейся при взаимодействии продуктов распада ненасыщенных липидов с сульфофосфорновольфрамовым реактивом. Интенсивность окраски пропорциональна содержанию ОЛ в сыворотке крови.

Определение концентрации общих липидов в сыворотки крови.

Принцип метода: ненасыщенные липиды и жирные кислоты, фосфолипиды и холестерин взаимодействуют после гидролиза серной кислоты с фосфованилиновым реактивом с образованием красного окрашивания.

Реактивы:

1. раствор ванилина (ванилин + ортофосфорная кислота)

2. стандартный раствор (8 г/л)

3. концентрированная серная кислота

Проведение анализа:

• Длина волны 510 – 550 нм

• Кювета 1 см

• Температура с +15 до +25 ⁰С

Реактивы	Проба	Стандарт	Контроль
Сыворотка (образец)	20 мкл	-	-
Стандартный раствор	-	20 мкл	-
Серная кислота (концентрированная)	1,5 мл	1,5 мл	1,5 мл
Пробы перемешивают и нагревают на кипящей водяной бане 15 минут. После охлаждения пробирок проточной водой отмеряют.
Гидролизат	100 мкл	100 мкл	100 мкл
Раствор ванилина	1, 5 мл	1,5 мл	1,5 мл
Пробы перемешивают и оставляют стоять 50 минут при температуре +15 - +25 0С. Не позднее чем через 60 минут измеряют оптическую плотность пробы (Еоп) и стандарта (Ест) против контрольного раствора.

Расчет: С_оп = Е_оп/Е_ст х С_ст, где С_оп – концентрация пробы, С_ст – концентрация стандарта.

Норма: концентрация ОЛ составляет 4 – 8 г/л.

Примечание: отбор проб для определения общих липидов должны производиться минимально через 14 ч после последнего приема пищи.

Клинико-диагностическое значение определения общих липидов:

• Гиполипидемия (гиполипемия) – уменьшение концентрации общих липидов в сыворотке (плазме) крови.

  • Голодание;

  • Нарушение переваривании и всасывания жиров;

  • Гипертиреоз.

• Гиперлипидемия (гиперлипемия) - увеличение концентрации общих липидов сыворотке (плазмы) крови.

  • Физиологическая: после еды (может наблюдаться через 1 – 4 часа после приема пищи); беременность, прием алкоголя.

  • Патологическая:

- первичная (наследственная)

- вторичная: ожирение, цирроз печени, сахарный диабет, нефротический синдром, острый и хронический панкреатит.

Липурия – появление липидов в моче.

Рекомендации по выполнению лабораторной работы:

• Внимательно прочитайте инструкцию к методике по определению общих липидов в сыворотке крови.

• Подготовьте рабочее место для выполнения лабораторной работы (определение общих липидов).

• Выполните методику согласно инструкции.

• Заполните протокол лабораторной работы №4.