
- •Правила взятия крови для клинико-биохимических исследований.
- •Лабораторная работа №1 «Обнаружение моно, ди и полисахаридов».
- •Реакция №1. «Проба Биаля (обнаружение пентоз)»
- •Реакция №2. «Проба Велька (обнаружение лактозы и мальтозы)»
- •Реакция №3. «Проба Селиванова (обнаружение фруктозы)»
- •Реакция №4. «Обнаружение крахмала»
- •Лабораторная работа №2 «Реакции на выявление свойств углеводов».
- •Реакция №1. «Реакция Троммера»
- •Реакция №2. «Реакция Ниландера»
- •Практические занятия по теме: «Химия липидов» Дата_________________
- •Определение концентрации общих липидов в сыворотки крови.
- •Клинико-диагностическое значение определения общих липидов:
- •Лабораторная работа №5 «Обнаружение липидов»
- •Реакция №1 « Акролеиновая проба (обнаружение глицеринсодержащих липидов)»
- •1. Реакция Сальковского.
- •2. Реакция Либермана-Бурхардта.
- •Лабораторная работа №6 «Определение β-липопротеинов сыворотки крови турбидиметрическим методом»
- •Протокол лабораторной работы №4 «Определение общих липидов»
- •Протокол лабораторной работы №6 «Определение β-липопротеинов сыворотки крови турбидиметрическим методом»
- •Практические занятия по теме: «Химия белков» Лабораторная работа №7 «Цветные реакции на белки и аминокислоты»
- •Реакция №1 «Биуретовая реакция на пептидную связь»
- •Реакция №2 «Нингидриновая реакция»
- •Реакция №3 «Ксантопротеиновая реакция»
- •Реакция №4 «Реакция Адамкевича»
- •Реакция №5 «Реакция Фоля»
- •Протокол лабораторной работы №7 «Цветные реакции на белки и аминокислоты».
- •Современные методы анализа аминокислотного состава белков и пептидов.
- •Лабораторная работа №8 «Реакции осаждения и денатурации белков»
- •Необратимое осаждение
- •Реакция №3 «Осаждение концентрированными минеральными кислотами»
- •Протокол лабораторной работы №8 «Реакции осаждения и денатурации белков».
- •Протокол лабораторной работы №9 «Разделение альбуминов и глобулинов яичного белка методом высаливания».
- •Лабораторная работа №10 «Обессоливание растворов белков».
- •Протокол лабораторной работы №10 «Обессоливание растворов белков»
- •Метод распределительной хроматографии.
- •Метод распределительной хроматографии на бумаге.
- •Лабораторная работа №11 «Разделение смеси аминокислот методом радиальной хроматографии на бумаге».
- •Клинико-диагностическое значение определения аминокислот в сыворотке крови и моче
- •Протокол лабораторной работы №11 «Разделение смеси аминокислот методом радиальной хроматографии на бумаге».
- •Тема: «нуклеиновые кислоты»
- •Лабораторная работа №12 «Реакции на составные компоненты нуклеопротеинов»
- •Протокол лабораторной работы №12 «Реакции на составные компоненты нуклеопротеинов».
- •Лабораторная работа №13: «Обнаружение действия ферментов»
- •Лабораторная работа №14: «Изучение свойств ферментов»
- •Опыт 1 «Определение специфичности амилазы».
- •Опыт 2 «Определение специфичности сахаразы».
- •Лабораторная работа №15: «Регуляция активности ферментов»
- •Протокол лабораторной работы №13 «Обнаружение действия ферментов».
- •Протокол лабораторной работы №14 «Изучение свойств ферментов».
- •Протокол лабораторной работы №15 «Регуляция активности ферментов».
Лабораторная работа №14: «Изучение свойств ферментов»
Реакция №1 «Специфичность действия ферментов»
Принцип: Ряд ферментов осуществляет расщепление строго определённых веществ, т.е. обладают абсолютной специфичностью. Однако, большинство ферментов имеет относительную специфичность – расщепляют группу веществ, имеющих одинаковый тип связи в молекуле (пептидные, эфирные и др.).
Специфическим субстратом для фермента амилазы является крахмал, для фермента сахаразы – сахароза.
Реактивы: 1) крахмал, 1% раствор; 2) сахароза, 2% раствор; 3) слюна, водный раствор; 4) сахараза из дрожжей, раствор (1 г дрожжей растирают в ступке с 2 г стеклянного песка, приливают 97 мл дистиллированной воды и 2 мл толуола, раствор фильтруют); 5) раствор йода 1%; 6) сульфат меди 5% раствор; 7) гидроокись натрия, 10% раствор.
Опыт 1 «Определение специфичности амилазы».
Ход определения: Берут 2 пробирки и добавляют по 4 капли раствора слюны в каждую. В 1 –ю пробирку («крахмал 1») вносят 10 капель раствора крахмала. Во 2-ю пробирку («сахароза 1») вносят 10 капель раствора сахарозы. Содержимое каждой пробирки перемешивают и ставят в термостат на 15 минут при температуре 370С, после чего достают пробирки из термостата и проводят реакции, доказывающие специфичность действия фермента (амилазы).
Из пробирки «крахмал 1» отбирают 4 капли и переносят их в чистую центрифужную пробирку («крахмал 2»). С содержимым пробирки «крахмал 1» проводят реакцию Троммера, а с содержимым пробирки «крахмал 2» проводят реакцию с йодом.
Из пробирки «сахароза 1» отбирают 4 капли и переносят в чистую центрифужную пробирку («сахароза 2»). С содержимым пробирки «сахароза 1» проводят реакцию Троммера, а с содержимым пробирки «сахароза 2» проводят реакцию с йодом.
Результат реакции записывают в протокол.
Опыт 2 «Определение специфичности сахаразы».
Ход определения: Берут 2 пробирки и добавляют по 4 капли раствора сахаразы в каждую. В 1 –ю пробирку («крахмал 1») вносят 10 капель раствора крахмала. Во 2-ю пробирку («сахароза 1») вносят 10 капель раствора сахарозы. Содержимое каждой пробирки перемешивают и ставят в термостат на 15 минут при температуре 370С, после чего достают пробирки из термостата и проводят реакции, доказывающие специфичность действия фермента (сахаразы).
Из пробирки «крахмал 1» отбирают 4 капли и переносят их в чистую центрифужную пробирку («крахмал 2»). С содержимым пробирки «крахмал 1» проводят реакцию Троммера, а с содержимым пробирки «крахмал 2» проводят реакцию с йодом.
Из пробирки «сахароза 1» отбирают 4 капли и переносят в центрифужную чистую пробирку («сахароза 2»). С содержимым пробирки «сахароза 1» проводят реакцию Троммера, а с содержимым пробирки «сахароза 2» проводят реакцию с йодом.
Результат реакции записывают в протокол.
Реакция №2 «Влияние температуры на активность ферментов»
Принцип:
Ферменты термолабильны и проявляют
оптимальную активность при температуре
35 – 45 0С.
При повышении температуры свыше 50 0С
их активность снижается, а затем
происходит разрушение структуры молекулы
фермента.
Реактивы: 1) крахмал, 1% раствор; 2) слюна, водный раствор; 3) слюна, прокипяченная; 4) раствор йода 1%; 5) сульфат меди 5% раствор; 6) гидроокись натрия, 10% раствор.
Ход определения: в 2 пробирки вносят по 10 капель раствора крахмала. В 1-ю пробирку (слюна 1) добавляют 5 капель раствора слюны, во 2-ю пробирку (прокипяченная слюна 1) 5 капель раствора прокипяченной слюны. Пробирки встряхивают, и помещают их в термостат на 15 минут при температуре 370С, после чего достают пробирки из термостата, охлаждают.
Из пробирки «слюна 1» отбирают 4 капли и переносят их в чистую центрифужную пробирку («слюна 2»). С содержимым пробирки «крахмал 1» проводят реакцию Троммера, а с содержимым пробирки «слюна 2» проводят реакцию с йодом.
Из пробирки «прокипяченная слюна 1» отбирают 4 капли и переносят в центрифужную чистую пробирку («прокипяченная слюна 2»). С содержимым пробирки «прокипяченная слюна 1» проводят реакцию Троммера, а с содержимым пробирки «прокипяченная слюна 2» проводят реакцию с йодом.
Результат реакции записывают в протокол.
Реакция №3 «Влияние рН среды на активность ферментов»
Принцип: Для амилазы слюны оптимальное значение рН среды – 6,8. В кислой и щелочной среде активность ее снижается, и расщепление крахмала происходит не полностью, до стадии декстринов, которые с раствором йода дают красно-фиолетовую или красно-бурую окраску.
Реактивы: 1) крахмал, 1% раствор; 2) слюна – раствор, разведенный в 10 раз; 3) дистиллированная вода; 4) хлористоводородная кислота, 0,2%; 5) раствор йода 1%.
Ход определения: в 8 пронумерованных пробирок наливают по 1 мл дистиллированной воды. В 1-ю пробирку вносят 1 мл раствора соляной кислоты, перемешивают, отбирают из этой пробирки 1 мл смеси и переносят его во 2-ю пробирку. Содержимое 2-й пробирки перемешивают, отбирают 1 мл полученной смеси и переносят в 3-ю пробирку и т.д. Из 8 пробирки 1 мл смеси выливают. Таким образом, в пробирках получают разведения соляной кислоты в убывающей концентрации, соответствующей различным значениям рН среды. После этого в каждую пробирку добавляют по 2 мл раствора крахмала и по 1 мл раствора слюны . Пробирки встряхивают и помещают в термостат на 15 минут при температуре 370С. Затем пробирки охлаждают под проточной водой и добавляют по 1 капле раствора йода. Отмечают, при какой концентрации соляной кислоты (рН среды) произошел полный гидролиз крахмала.
Результат реакции записывают в протокол.