Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
рабочая тетрадь пм03.doc
Скачиваний:
3
Добавлен:
01.05.2025
Размер:
350.72 Кб
Скачать

Лабораторная работа №14: «Изучение свойств ферментов»

Реакция №1 «Специфичность действия ферментов»

Принцип: Ряд ферментов осуществляет расщепление строго определённых веществ, т.е. обладают абсолютной специфичностью. Однако, большинство ферментов имеет относительную специфичность – расщепляют группу веществ, имеющих одинаковый тип связи в молекуле (пептидные, эфирные и др.).

Специфическим субстратом для фермента амилазы является крахмал, для фермента сахаразы – сахароза.

Реактивы: 1) крахмал, 1% раствор; 2) сахароза, 2% раствор; 3) слюна, водный раствор; 4) сахараза из дрожжей, раствор (1 г дрожжей растирают в ступке с 2 г стеклянного песка, приливают 97 мл дистиллированной воды и 2 мл толуола, раствор фильтруют); 5) раствор йода 1%; 6) сульфат меди 5% раствор; 7) гидроокись натрия, 10% раствор.

Опыт 1 «Определение специфичности амилазы».

Ход определения: Берут 2 пробирки и добавляют по 4 капли раствора слюны в каждую. В 1 –ю пробирку («крахмал 1») вносят 10 капель раствора крахмала. Во 2-ю пробирку («сахароза 1») вносят 10 капель раствора сахарозы. Содержимое каждой пробирки перемешивают и ставят в термостат на 15 минут при температуре 370С, после чего достают пробирки из термостата и проводят реакции, доказывающие специфичность действия фермента (амилазы).

Из пробирки «крахмал 1» отбирают 4 капли и переносят их в чистую центрифужную пробирку («крахмал 2»). С содержимым пробирки «крахмал 1» проводят реакцию Троммера, а с содержимым пробирки «крахмал 2» проводят реакцию с йодом.

Из пробирки «сахароза 1» отбирают 4 капли и переносят в чистую центрифужную пробирку («сахароза 2»). С содержимым пробирки «сахароза 1» проводят реакцию Троммера, а с содержимым пробирки «сахароза 2» проводят реакцию с йодом.

Результат реакции записывают в протокол.

Опыт 2 «Определение специфичности сахаразы».

Ход определения: Берут 2 пробирки и добавляют по 4 капли раствора сахаразы в каждую. В 1 –ю пробирку («крахмал 1») вносят 10 капель раствора крахмала. Во 2-ю пробирку («сахароза 1») вносят 10 капель раствора сахарозы. Содержимое каждой пробирки перемешивают и ставят в термостат на 15 минут при температуре 370С, после чего достают пробирки из термостата и проводят реакции, доказывающие специфичность действия фермента (сахаразы).

Из пробирки «крахмал 1» отбирают 4 капли и переносят их в чистую центрифужную пробирку («крахмал 2»). С содержимым пробирки «крахмал 1» проводят реакцию Троммера, а с содержимым пробирки «крахмал 2» проводят реакцию с йодом.

Из пробирки «сахароза 1» отбирают 4 капли и переносят в центрифужную чистую пробирку («сахароза 2»). С содержимым пробирки «сахароза 1» проводят реакцию Троммера, а с содержимым пробирки «сахароза 2» проводят реакцию с йодом.

Результат реакции записывают в протокол.

Реакция №2 «Влияние температуры на активность ферментов»

Принцип: Ферменты термолабильны и проявляют оптимальную активность при температуре 35 – 45 0С. При повышении температуры свыше 50 0С их активность снижается, а затем происходит разрушение структуры молекулы фермента.

Реактивы: 1) крахмал, 1% раствор; 2) слюна, водный раствор; 3) слюна, прокипяченная; 4) раствор йода 1%; 5) сульфат меди 5% раствор; 6) гидроокись натрия, 10% раствор.

Ход определения: в 2 пробирки вносят по 10 капель раствора крахмала. В 1-ю пробирку (слюна 1) добавляют 5 капель раствора слюны, во 2-ю пробирку (прокипяченная слюна 1) 5 капель раствора прокипяченной слюны. Пробирки встряхивают, и помещают их в термостат на 15 минут при температуре 370С, после чего достают пробирки из термостата, охлаждают.

Из пробирки «слюна 1» отбирают 4 капли и переносят их в чистую центрифужную пробирку («слюна 2»). С содержимым пробирки «крахмал 1» проводят реакцию Троммера, а с содержимым пробирки «слюна 2» проводят реакцию с йодом.

Из пробирки «прокипяченная слюна 1» отбирают 4 капли и переносят в центрифужную чистую пробирку («прокипяченная слюна 2»). С содержимым пробирки «прокипяченная слюна 1» проводят реакцию Троммера, а с содержимым пробирки «прокипяченная слюна 2» проводят реакцию с йодом.

Результат реакции записывают в протокол.

Реакция №3 «Влияние рН среды на активность ферментов»

Принцип: Для амилазы слюны оптимальное значение рН среды – 6,8. В кислой и щелочной среде активность ее снижается, и расщепление крахмала происходит не полностью, до стадии декстринов, которые с раствором йода дают красно-фиолетовую или красно-бурую окраску.

Реактивы: 1) крахмал, 1% раствор; 2) слюна – раствор, разведенный в 10 раз; 3) дистиллированная вода; 4) хлористоводородная кислота, 0,2%; 5) раствор йода 1%.

Ход определения: в 8 пронумерованных пробирок наливают по 1 мл дистиллированной воды. В 1-ю пробирку вносят 1 мл раствора соляной кислоты, перемешивают, отбирают из этой пробирки 1 мл смеси и переносят его во 2-ю пробирку. Содержимое 2-й пробирки перемешивают, отбирают 1 мл полученной смеси и переносят в 3-ю пробирку и т.д. Из 8 пробирки 1 мл смеси выливают. Таким образом, в пробирках получают разведения соляной кислоты в убывающей концентрации, соответствующей различным значениям рН среды. После этого в каждую пробирку добавляют по 2 мл раствора крахмала и по 1 мл раствора слюны . Пробирки встряхивают и помещают в термостат на 15 минут при температуре 370С. Затем пробирки охлаждают под проточной водой и добавляют по 1 капле раствора йода. Отмечают, при какой концентрации соляной кислоты (рН среды) произошел полный гидролиз крахмала.

Результат реакции записывают в протокол.