
- •Правила взятия крови для клинико-биохимических исследований.
- •Лабораторная работа №1 «Обнаружение моно, ди и полисахаридов».
- •Реакция №1. «Проба Биаля (обнаружение пентоз)»
- •Реакция №2. «Проба Велька (обнаружение лактозы и мальтозы)»
- •Реакция №3. «Проба Селиванова (обнаружение фруктозы)»
- •Реакция №4. «Обнаружение крахмала»
- •Лабораторная работа №2 «Реакции на выявление свойств углеводов».
- •Реакция №1. «Реакция Троммера»
- •Реакция №2. «Реакция Ниландера»
- •Практические занятия по теме: «Химия липидов» Дата_________________
- •Определение концентрации общих липидов в сыворотки крови.
- •Клинико-диагностическое значение определения общих липидов:
- •Лабораторная работа №5 «Обнаружение липидов»
- •Реакция №1 « Акролеиновая проба (обнаружение глицеринсодержащих липидов)»
- •1. Реакция Сальковского.
- •2. Реакция Либермана-Бурхардта.
- •Лабораторная работа №6 «Определение β-липопротеинов сыворотки крови турбидиметрическим методом»
- •Протокол лабораторной работы №4 «Определение общих липидов»
- •Протокол лабораторной работы №6 «Определение β-липопротеинов сыворотки крови турбидиметрическим методом»
- •Практические занятия по теме: «Химия белков» Лабораторная работа №7 «Цветные реакции на белки и аминокислоты»
- •Реакция №1 «Биуретовая реакция на пептидную связь»
- •Реакция №2 «Нингидриновая реакция»
- •Реакция №3 «Ксантопротеиновая реакция»
- •Реакция №4 «Реакция Адамкевича»
- •Реакция №5 «Реакция Фоля»
- •Протокол лабораторной работы №7 «Цветные реакции на белки и аминокислоты».
- •Современные методы анализа аминокислотного состава белков и пептидов.
- •Лабораторная работа №8 «Реакции осаждения и денатурации белков»
- •Необратимое осаждение
- •Реакция №3 «Осаждение концентрированными минеральными кислотами»
- •Протокол лабораторной работы №8 «Реакции осаждения и денатурации белков».
- •Протокол лабораторной работы №9 «Разделение альбуминов и глобулинов яичного белка методом высаливания».
- •Лабораторная работа №10 «Обессоливание растворов белков».
- •Протокол лабораторной работы №10 «Обессоливание растворов белков»
- •Метод распределительной хроматографии.
- •Метод распределительной хроматографии на бумаге.
- •Лабораторная работа №11 «Разделение смеси аминокислот методом радиальной хроматографии на бумаге».
- •Клинико-диагностическое значение определения аминокислот в сыворотке крови и моче
- •Протокол лабораторной работы №11 «Разделение смеси аминокислот методом радиальной хроматографии на бумаге».
- •Тема: «нуклеиновые кислоты»
- •Лабораторная работа №12 «Реакции на составные компоненты нуклеопротеинов»
- •Протокол лабораторной работы №12 «Реакции на составные компоненты нуклеопротеинов».
- •Лабораторная работа №13: «Обнаружение действия ферментов»
- •Лабораторная работа №14: «Изучение свойств ферментов»
- •Опыт 1 «Определение специфичности амилазы».
- •Опыт 2 «Определение специфичности сахаразы».
- •Лабораторная работа №15: «Регуляция активности ферментов»
- •Протокол лабораторной работы №13 «Обнаружение действия ферментов».
- •Протокол лабораторной работы №14 «Изучение свойств ферментов».
- •Протокол лабораторной работы №15 «Регуляция активности ферментов».
Реакция №3 «Осаждение концентрированными минеральными кислотами»
Принцип: концентрированные кислоты (серная, хлористоводородная, азотная и др.) вызывают денатурацию белка за счет удаления факторов устойчивости белка в растворе (заряда и гидратной оболочки). Однако при избытке хлористоводородной и серной кислот выпавший осадок денатурированного белка вновь растворяется. По-видимому, это происходит в результате перезарядки молекул белка и частичного гидролиза. При добавлении избытка азотной кислоты растворение осадка не происходит (точный механизм этого явления не установлен). Вот почему для определения малых количеств белка в моче в клинических лабораториях пользуются азотной кислотой.
Реактивы: 1) яичный белок, 1% раствор; 2) концентрированная серная кислота; 3) концентрированная хлористоводородная кислота; 4) концентрированная азотная кислота.
Ход определения: в 3 пронумерованные пробирки наливают по 10 капель концентрированных кислот: в 1-ю пробирку серную кислоту, во 2-ю пробирку хлористоводородную, в 3-ю пробирку азотную. Затем, наклонив пробирку под углом 450, осторожно по стенке пробирки (так, чтобы жидкости не смешивались) наслаивают 1 каплю раствора яичного белка. На границе двух слоев появляется осадок белка в виде белого кольца. Осторожно встряхивают пробирки, и добавляют избыток кислот, после чего наблюдают растворение белка в пробирках с серной и хлористоводородной кислотами, а в пробирке с азотной кислотой растворения белка не происходит.
Реакция №4 «Осаждение органическими кислотами»
Принцип: трихлоруксусная кислота осаждает только белки, а сульфосалициловая осаждает не только белки, но и высокомолекулярные полипептиды. Сульфосалициловой кислотой (как самой чувствительной) широко пользуются для обнаружения белка в моче.
Реактивы: 1) яичный белок, 1% раствор; 2) трихлоруксусная кислота, 10% раствор; 3) сульфосалициловая кислота, 20% раствор.
Ход определения: в 2 пронумерованные пробирки приливают по 5 капель раствора яичного белка. Затем в 1-ю пробирку добавляют 2 капли сульфосалициловой кислоты, а во 2-ю пробирку добавляют 2 капли трихлоруксусной кислоты. В пробирках выпадает осадок белка.
Протокол лабораторной работы №8 «Реакции осаждения и денатурации белков».
№ |
Название реакции |
Результат реакции |
Алгоритм исследования |
Вывод/примечание |
Оценка |
1. |
|
|
|
|
|
2. |
|
|
|
|
|
3. |
|
|
|
|
|
4. |
|
|
|
|
|
Проверил преподаватель ____________________________
(Ф.И.О.)
Замечания: _____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Лабораторная работа №9 «Растворимость белков. Высаливание».
Обратимое осаждение
Под действием факторов осаждения белки выпадают в осадок, но после прекращения действия (удаления) этих факторов белки вновь переходят в растворимое состояние и приобретают свои нативные свойства. Одним из видов обратимого осаждения белков является высаливание.
Реакция №1 «Разделение альбуминов и глобулинов яичного белка методом высаливания».
Принцип: насыщенным раствором сульфата аммония осаждается альбуминовая фракция белков, полунасыщенным раствором сульфата аммония – глобулиновая фракция.
Сущность реакции заключается в дегидратации (обезвоживании) молекул белка.
Реактивы: 1) неразбавленный яичный белок; 2) насыщенный раствор сульфата аммония; 3) гидроокись натрия, 10% раствор; 4) сульфат меди, 1% раствор; 5) сульфат аммония в порошке; 6) дистиллированная вода.
Ход определения: в пробирку наливают 30 капель неразведенного яичного белка и добавляют равное количество насыщенного раствора сульфата аммония. Содержимое пробирки перемешивают. Получают полунасыщенный раствор сульфата аммония, при этом глобулиновая фракция белка осаждается, а альбуминовая остается в растворе. Через 5 минут осадок отфильтровывают, на фильтре остается глобулиновая фракция, а в фильтрате – альбуминовая. Осадок с фильтрата снимают стеклянной палочкой и переносят в пробирку, куда добавляют несколько капель воды, пока не растворится осадок. Наличие в растворе белка можно доказать с помощью биуретовой реакции, которая будет положительной.
В пробирку с фильтратом добавляют порошок сульфата аммония до полного насыщения раствора, т.е. до тех пор, пока не прекратится растворение соли. При этом выпадает осадок – альбумины. Его отфильтровывают, осадок с фильтра снимают стеклянной палочкой, растворяют водой и проводят биуретовую реакцию.