- •Биохимическая и серологическая типизация возбудителей пищевых токсикоинфекций
- •Биохимические свойства разных серотипов сальмонелл
- •Биохимические свойства разных серотипов протея Таблица 6
- •Антигенная структура сальмонелл
- •Серологическая типизация сальмонелл
- •Ветеринарно-санитарная оценка мяса и продуктов убоя при обнаружении в них возбудителей пищевых токсикоинфекции
- •При сальмонеллезе
Биохимические свойства разных серотипов протея Таблица 6
Вещество |
Proteus vulgaris
|
Proteus mirabilis |
Proteus morgany
|
Proteus Rettgery |
маннит |
- |
- |
- |
- |
ксилоза |
+ |
+ |
- |
- |
сероводород |
+ |
+ |
+ |
- |
индол |
+ |
- |
- |
+ |
мочевина |
+ |
+ |
+ |
+ |
желатин |
+ |
+ |
+ |
- |
Антигенная структура сальмонелл
Бактерии рода сальмонелл имеют сложную антигенную структуру. Подавляюшее большинство серотипов сальмонелл имеют два вида антигенов: термостабильный О-антиген (соматический), связанный с телом бактерий и термолабильный Н-антиген (жгутиковый), связанный с двигательным аппаратом бактерий Оба антигена имеют сложную структуру. Так О-антиген состоит из двух и более рецепторов, обозначаемых арабскими цифрами. Жгутиковый антиген подразделен на две фазы: 1-ю специфическую и 2-ю неспецифическую фазы. Антигены 1-й специфической фазы условно обозначаются малыми буквами латинского алфавита, а 2-й неспецифической—арабскими цифрами и частично малыми буквами латинского алфавита. У некоторых сальмонелл Н-антиген отсутствует полностью (S. Pullorum, S. Gallinarum), у других же отсутствует только неспецифическая фаза или специфическая фаза Н-антигена. О преимущественной активности той или иной фазы антигена можно косвенно судить по внешнему виду колоний на МПА. Если колонии гладкие, блестящие, с ровными краями, то более активной является специфическая фаза Н-антигена. Если колонии шероховатые, матовые, с неровными краями, то более активна неспецифическая фаза Н-антигена.
Серологическая типизация сальмонелл
По серологической типизации насчитывается более 2000 серотипов сальмо-нелл. Они обитают в организме животных многих видов и человека, а также вовнешней среде.
Вместе с общностью морфологических и культуральных свойств бактерии рода сальмонелла отличаются друг от друга по антигенным свойствам. Эти различия и положены в основу метода их серологической типизации.
По различию в строении О-антигенов у отдельных видов сальмонелл Кауфман и Уайт разделили бактерии этого рода на несколько серологических групп, которые обозначаются заглавными буквами латинского алфавита иногда в сочетании с арабскими цифрами—А, В, С, Б, Е и т. д. Все сальмонеллы, относящиеся к одной группе, имеют один или несколько общих рецепторов О-антигена. Поэтому серологическая типизация сальмонелл осуществляется в два этапа. Вначале по наличию определенного рецептора О-антигена определяют группу, затем внутри группы по наличию определенных Н-антигенов определяют серотип сальмонеллы.
Серологическая типизация осуществляется при помощи реакции агглютинации на стекле с сальмонеллезными сыворотками. Для реализации этой методики отечественные биофабрики выпускают два набора диагностических сывороток: комплексные сальмонеллезные агглютинирующие сыворотки на О-антиген и монорецепторные сальмонеллезные агглютинирующие сыворотки на Н и О-антиген. Первый набор состоит из 8 комплексных сальмонеллезных агглютинирующих сывороток на О-антиген. Каждая из этих сывороток реагирует с 8 различными рецепторами О-антигена (см. табл.7).
Для определения группы бактерий ставят реакцию агглютинации со всеми восемью сыворотками. Первая сыворотка является контрольной и реагирует с любой сальмонеллой, входящей в одну из основных групп, для диагностики которых предназначен данный набор. При учете реакции определяют, в какой из оставшихся семи сывороток наблюдается положительная реакция аналогичная контрольной сыворотке. После этого, смотрят по табл. 3, какой из рецепторов в прореагировавшей сыворотке стоит на первом месте. Далее по табл. 4 определяют, в какой группе сальмонелл встречается данный рецептор.
После определения группы сальмонеллы, определяют ее серотип. Для этого выявляют, какие Н(0)-антигены характерны для данной группы (см. табл.), и подбирают к ним монорецепторные агглютинирующие сыворотки из второго набора. Затем ставят с этими сыворотками реакцию агглютинации на стекле и по тем сывороткам, которые показали положительную реакцию, определяют серотип бактерий (см. табл. 8).
Таблица 7
Состав О-комплексных агглютинирующих сальмонелезных сывороток Таблица 7
1 |
4 |
7 |
8 |
9 |
10 |
15 |
19 |
2 |
4 |
11 |
16 |
17 |
18 |
21 |
28 |
3 |
7 |
11 |
30 |
35 |
38 |
39 |
40 |
4 |
8 |
16 |
30 |
41 |
42 |
43 |
44 |
5 |
9 |
17 |
35 |
41 |
45 |
47 |
48 |
6 |
10 |
18 |
18 |
42 |
45 |
50 |
52 |
7 |
15 |
21 |
39 |
43 |
47 |
50 |
53 |
8 |
19 |
28 |
40 |
44 |
48 |
52 |
53 |
Методика постановки реакции агглютинации на стекле
Для постановки данной серологической реакции используют свежую суточную культуру сальмонелл, выращенную на скошенном МПА. Берут предметные стекла и наносят на них карандашом по стеклу наименования используемых диагностических сальмонеллезных сывороток. При помощи пипетки помещают каплю соответствующей агглютинирующей сыворотки на подписанное предметное стекло. Затем фламбируют бактериологическую петлю, охлаждают и отбирают маленький кусочек исследуемой колонии микроорганизмов (для реакции с О-антигеном берут колонии с верхней части скоса, а для реакции с Н-антигеном берут колонии с нижней части скоса, где более влажно и жгутики у бактерий лучше сохраняются), переносят ее в каплю сыворотки на предметном стекле и осторожно перемешивают. Учет реакции проводят через 5-10 На темном фоне просматривают капли сыворотки. В случае положительной реакции капля сыворотки просветляется и в ней образуются отчетливые белые глыбки.
В настоящее время в России и за рубежом для экспресс - диагностики и типизации возбудителей сальмонеллеза и других пищевых токсикоинфекции используют также
РНГА и др. серологические реакции и диагностикумы.
Таблица 8
Антигенные свойства разных серотипов сальмонелл
Группа
|
Серотип сальмонеллы |
Антигены | |||
Рецепторы О-антигена |
H-антиген | ||||
1 фаза |
2 фаза | ||||
A |
S. paratyphi А |
1, 2, 12 |
a |
- | |
B |
S. paratyphi В |
1, 4, 5, 12 |
b |
1, 2 | |
S. derby |
1, 4, 5, 12 |
f g |
- | ||
S. typhi murium |
1, 4, 5, 12 |
i |
1, 2 | ||
C |
S. cholerae suis |
6, 7 |
c |
1, 5 | |
S. cholerae suis Kunzendorf |
6, 7 |
- |
1, 5 | ||
S. typhi suis |
6, 7 |
c |
1, 5 | ||
S. Concord |
6, 7 |
l v |
1, 2 | ||
D |
S. enteritidis |
1, 9, 12 |
g m |
- | |
S. Dublin |
1, 9, 12 |
g p |
- | ||
S. pullorum |
1, 9, 12 |
g q |
- | ||
S. gallinarum |
1, 9, 12 |
- |
- | ||
S. moskow |
9, 12 |
- |
- | ||
E |
S. anatum |
3, 10 |
e h |
1, 6 | |
S. london |
3, 10 |
l v |
1, 6 |