2. Содержание практического занятия

Цели занятия

1. Познакомиться с системой «Сартокон - мини» для фильтрации, ее устройством.

2. Познакомиться с техническими данными системы и модулей Микросарт.

3. Освоить порядок подготовки, монтажа устройства «Сартокон-мини» и «Микросарт».

4. Освоить порядок эксплуатации системы «Сартакон-мини».

5. Оценить качество полученного концентрата колибактерина.

Сырье, материалы, реактивы и оборудование

Сырье:

Вода дистиллированная, ГОСТ 6709

Реактивы:

Водорода перекись ГОСТ 177-88, техн.

Калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный, ГОСТ 2493, хч, чда.

Калий фосфорнокислый однозамещенный, ГОСТ 4198, хч, чда.

Очищающий раствор «Ульрасил-11», г. Владимир ЗАО «Владисарт».

Очищающий раствор «Ульрасил-53», г. Владимир ЗАО «Владисарт».

Сахароза, ГОСТ 5833, хч, чда.

Формалин технический ГОСТ 1625 или формалин медицинский, ГФ изд. х-68, ст.19.

Хлорид натрия, ГОСТ 4233, хч, чда.

Посуда:

Бутыли вместимостью 1,5,10,20 дм³, ТУ 64-2-179-78 или ГОСТ 14182-80.

Бюретки стеклянные, ГОСТ 20292.

Колбы мерные лабораторные стеклянные вместимостью 50, 100, 1000 мл, ГОСТ 1770.

Пипетки мерные лабораторные вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл, ГОСТ 20292.

Пробирки стеклянные биологические, ГОСТ 25336.

Склянки медицинские без притертых пробок из нейтрального стекла вместимостью 1000, 5000 мл, ГОСТ 25336.

Флаконы вместимостью 100 см³, ТУ 64-2-100.

Материалы:

Зажим для трубок пружинящий, ТУ64-1-964

Бумага оберточная, ГОСТ 8273

Зажим кровоостанавливающий прямой, ТУ 64-1-964

Ножницы медицинские, ГОСТ 21239

Перчатки резиновые хирургические, ГОСТ 3-88, №5-9

Перчатки резиновые аналитические, ТУ 38-106140, № 5-9

Спирт этиловый рективикованный, ГОСТ 18300, техн.

Спиртовка лабораторная стеклянная, ГОСТ 25366.

Спринцовка № 10.

Трубка медицинская резиновая, ГОСТ 3399.

Пробки резиновые конусные, ГОСТ 7852.

Пробки ватно-марлевые для пробирок, лабораторного изготовления.

Оборудование:

Установка микро- и ультрофильтрации «Сартокон-мини» в комплекте;

Кассетный модуль «Микросарт»;

Насос ротационный с регулируемым приводом;

Весы лабораторные электронные, модель ВЭЛ 134-М, ТУ 25-7713.0031 или аналогичные

Весы лабораторные аналитические, ТУ 25-06-973, модель ВЛА-200Т-М, в комплекте с гирями аналитическим типа ГА.

Иономер универсальный, ТУ 25-05-2147, тип ЭВ-74.

Фотоэлектроколориметр, ТУ 3-3-919, ФЭК 56М или аналогичный.

Ход работы

Работа 1. Приготовление дополнительных растворов

Подготовка посуды

Новые бутыли для нейтрализации избытка щелочности заполняют на 1/2 объема 0,1...0,3 % раствором соляной кислоты, автоклавируют при температуре (129±1)°С в течение 60 мин, промывают водопроводной, а затем 2...3 раза - дистиллированной водой и снова автоклавируют по вышеуказанному режиму.

Бутыли и всю посуду, бывшую в контакте с вакцинным материалом, автоклавируют при температуре (129±1)°С в течение 90 мин, замачивают на одни сутки в 0,3...0,5 % растворе калийного мыла, моют теплой водой, ополаскивают 2...3 раза дистиллированной водой и сушат.

Целостность ампул проверяют сжатым воздухом, погружая каждую из них до шейки в ведро с водой и подсоединяя на 3...5 секунд резиновую трубку от системы сжатого воздуха к шейке ампулы. При наличии трещин и других дефектов в воде появляются пузырьки воздуха. Такие ампулы бракуют. Внутреннюю полость целых ампул моют мыльно-содовым раствором, ополаскивают водопроводной, затем дистиллированной водой и сушат.

Новые металлические канюли, переходники и переходники-тройники из нержавеющей стали замачивают на 1..2 суток в 5 % растворе щелочи, после чего механически очищают специальными ершами, промывают водопроводной, затем дистиллированной водой и сушат. Металлические и стеклянные канюли, бывшие в употреблении, вместе с резиновыми трубками и пробками после автоклавирования при температуре (129±1)°С в течение 90 мин. моют в теплом 0,3 % растворе калийного мыла, промывают водопроводной, затем дистиллированной водой и сушат.

Новые резиновые трубки механически очищают от талька влажным ватным тампоном на проволоке, после чего кипятят в 0,5 % растворе щелочи, моют водопроводной и дистиллированной водой и сушат. Новые резиновые пробки обрабатывают аналогично.

В широкие отверстия измерительных и пастеровских пипеток вводят комочки гигроскопической ваты. Пипетки вместимостью 1 и 2 см3 группируют по 5..10 штук и обертывают папиросной бумагой. Пастеровские пипетки и пипетки вместимостью 5 и 10 см3 упаковывают в бумагу по одной штуке.

Пробирки и свечи закрывают ватно-марлевыми пробками и укладывают в бумажные пакеты по 100 и 50 штук соответственно.

Чашки Петри упаковывают по 15...20 штук в оберточную бумагу.

Ампулы закрывают ватно-марлевыми пробками и укладывают послойно в металлические ящики с отверстиями, между слоями ампул прокладывают папиросную бумагу.

К свободным отводам вымытых стеклянных деталей подсоединяют предварительно подготовленные резиновые трубки длиной 50...100 см3 со стеклянными заглушками на конце. Каждую бутыль обертывают подпергаментной бумагой и обвязывают шпагатом.

Стеклянные флаконы перед стерилизацией закрывают ватно-марлевыми пробками и к их горлышку привязывают резиновые пробки, обернутые двумя слоями папиросной бумаги.

Стерилизацию вышеуказанной посуды осуществляют автоклавированием при температуре (129±1)°С в течение 90 мин.

Монтажи стеклянной посуды:

Монтаж № 1

Бутыль (вместимостью 1, 3, 5, 10 и 20 дм3) закрывают резиновой пробкой с пропущенной через нее комбинированной металлической канюлей, к воздушному патрубку которой через резиновую трубку длиной 10...15 см подсоединяют воздушный стеклянный фильтр, наполненный гигроскопической ватой. На наружный конец канюли надевают резиновую трубку длиной 1,5 м со стеклянной заглушкой на конце. Пробку с канюлей привязывают шпагатом к горловине бутыли, обкладывают толстым слоем серой ваты, обертывают подпергаментной бумагой и сверху обвязывают шпагатом.

Монтаж № 2

Бутыль (вместимостью 3, 5, 10 и 20 дм3) закрывают резиновой пробкой с пропущенными через нее двумя металлическими канюлями, одна из которых комбинированная, другая - простая подвижная. Обвязка, монтаж резиновых трубок, заглушек и воздушных стеклянных фильтров производится аналогично монтажу № 1.

Монтаж № 3

Измерительные цилиндры вместимостью 1000 и 2000 см3 с притертой под стеклянную пробку горловиной закрывают резиновой пробкой с канюлей и монтируют, как указано выше.

Всю заготовленную посуду стерилизуют в автоклаве при температуре (129±1)°С в течение 90 мин.

Приготовление стерильной дистиллированной воды

Бутыли, вместимостью 20 дм³ заполняют на 2/3 дистиллированной водой, монтируют монтажом №2 и стерилизуют при температуре (127-131) ⁰С в течение 2 часов.

Приготовление 1.5% очищающего раствора Ultrasil 53

Навеску 75г очищающего раствора Ultrasil 53 растворяют дистиллированной водой, доводя объем раствора до 5 дм³ . Растворение ведут при комнатной температуре при постоянном перемешивании.

Приготовление 1% очищающего раствора Ultrasil 11

Навеску 50г очищающего раствора Ultrasil 11 растворяют дистиллированной водой, доводя объем раствора до 5 дм³ . Растворение ведут при комнатной температуре при постоянном перемешивании.

Объем дополнительных растворов может пропорционально уменьшаться или увеличиваться.

Работа 2.Приготовление дезинфицирующих растворов