2. Отбор животных-продуцентов. Грундиммунизация

Получение гипериммунных сывороток осуществляется в несколь­ко этапов:

1. Подбор животных-продуцентов.

2. Грундиммунизация (грундирование) - отбор животных из чис­ла

завезенных, путем создания у них основы иммунитета.

3. Гипериммунизация животных-продуцентов.

4. Приготовление сывороточных препаратов.

Подбор животных-продуцентов.

Всех завезенных на биофабри­ку животных выдерживают в карантине 45 суток. За это время их все­сторонне обследуют с ежедневным (утром и вечером) двукратным измерением температуры тела, проверяют на пораженность гельмин­тами и при необходимости дегельминтизируют.

Всех животных исследуют на инфекционные болезни согласно требованиям нормативно-технической документации.

Лошадей исследуют на сап, трихомоноз, бруцеллез, туберкулез, пироплазмидозы, инфекционную анемию; крупный рогатый скот -на туберкулез, бруцеллез, лептоспироз, лейкоз; свиней - на туберку­лез, бруцеллез; овец - на бруцеллез, туберкулез, паратуберкулез и др.

При отборе животных-продуцентов учитывают их физиологичес­кие и иммунобиологические показатели.

На активность выработки животным-продуцентом гипериммун­ной сыворотки антител влияют:

1. Тип нервной деятельности животного-продуцента.

2. Реактивность организма.

3. Порода.

4. Пол.

5. Конституция.

6. Возраст.

Лошадей используют в возрасте от 3 до 12 лет, помеси донской и казахской пород, массой 450 — 500 кг; волов - в возрасте от 3 до 8 лет, массой не менее 350 кг, красностепной, калмыцкой, симментальс­кой, швицкой астраханской пород; свиней - в возрасте 5-6 месяцев, массой не менее 80 кг, крупной белой породы; овец, баранов и валу­хов - в возрасте 2-3 лет и массой 30 - 45 кг (для получения диагно­стических сывороток и сывороточных сред).

Учитывая, что введение антигенов животным и периодическое кровопускание приводят к нарушению обмена веществ и анемии (а в ряде случаев и к снижению титров антител), главное внимание уде­ляют вопросам полноценного, сбалансированного кормления живот­ных-продуцентов, которое отличается от кормления других живот­ных и осуществляется по специально разработанным и утвержден­ным рационам.

Такие рационы должны содержать по 11 - 12 кормовых единиц и по 1000 - 1200 г переваримого протеина, а также включать сочно-витаминные корма и быть строго сбалансированными по минераль­ному составу.

Для восстановления крови после крововзятия важно правильно организовать минеральное кормление животных. На 1 кг сухого корма лошадей должно приходиться: железа - 145 - 165 мг; меди- 15 - 18 мг; кобальта - 1,2 - 1,4 мг; марганца - 9 мг.

Для восстановления красной крови лошадям вводят в рацион эрит­роциты, фибрин, кормовые антибиотики, проращенный овес. Иног­да проводят реинфузию эритроцитов.

Кормят животных-продуцентов 3-5 раз в день, водопой - вволю, соль лизунец - вволю (кроме свиней).

Крупных животных содержат индивидуально, мелкий рогатый скот и свиней - группами.

Грундиммунизация животных-продуцентов.

Теоретически обо­сновано и практически целесообразно отбирать животных-продуцен­тов по иммунологическим показателям.

Груидиммунизация (грундирование) - это метод отбора живот­ных-продуцентов, обладающих высокой реактивностью организма и способных выработать антитела против введенного антигена в вы­соких титрах.

При отборе животных-продуцентов их проверяют на наличие ан­тител к тому или иному антигену серологическими методами. На­пример, отбор лошадей-продуцентов для производства противодифтерийной сыворотки проводится по титру естественного противодиф­терийного анатоксина в крови животных, выявляемого в реакции нейтрализации. Если антител в крови животных не обнаруживают, их грундируют, т.е. вводят антиген и по нарастанию титра антител, в результате грундиммунизации, отбирают лошадей-продуцентов про­тивостолбнячной, противоботулинической, противодифтерийной и других сывороток.

При производстве гипериммунных сывороток против диплококковой инфекции используют волов. Если у волов в крови антитела к возбудителю диплококковой инфекции содержатся в титре 1:200 - 1:3200, то их не грундируют, а сразу используют для гипериммуни­зации. Если антител не обнаруживают вовсе, волов грундируют. От­бор волов и грундиммунизацию обычно проводят в местах заготов­ки животных.

При проведении грундиммунизации животным дважды вводят убитый антиген или живые атенуированные микроорганизмы (уби­тые или живые вакцины) внутримышечно или подкожно с интерва­лом в 2 - 3 недели.

До начала грундиммунизации и через 7 — 8 суток после последнего введения антигена у животных берут кровь и определяют в ее сыво­ротке наличие антител к тому антигену, с помощью которого в пос­ледующем готовят гипериммунную сыворотку.

Выявление в сыворотке крови антител в титрах 1:800 и выше ука­зывает на то, что данное животное может быть использовано как продуцент гипериммунной сыворотки, т.е. такое животное обладает высокой реактивностью организма и иммунная система его способ­на вырабатывать антитела в необходимых титрах.

Кроме того, организм животного сенсибилизируется, «знакомит­ся» с антигеном и при последующей гипериммунизации быстро от­ветит на введение антигена выработкой антител.

Предварительное, правильно проведенное грундирование живот­ных обеспечивает повышение (в 5 раз и более) титров специфичес­ких антител при последующей гиперимунизации тем же антигеном, увеличивает выход высокоактивного препарата и создает условия получения сывороток в более короткие сроки.

Всех животных, у которых при грундиммунизации не обнаружи­вают антител или обнаруживают в титре менее 1:800, подвергают выбраковке.

Гипериммунизация животных.

Гипериммунизация - это метод парэнтерального введения живот­ным нарастающих доз соответствующих антигенов с целью получе­ния наивысшей ответной иммунологической реакции организма, а следовательно, и максимального увеличения в крови животных тит­ра специфических антител, который должен обеспечить лечебный, профилактический и диагностический эффект препаратов.

При гипериммунизации состав сыворотки крови меняется. Обыч­но нарастает количество общего белка, увеличивается количество гамма - и бета-глобулиновых фракций, уменьшается содержание аль­буминов.

Так, если в нормальной сыворотке крови лошадей альбумины со­ставляют 50 % от общего количеств белков, то в иммунной сыворот­ке их бывает 35 % и ниже.

Успех гипериммунизации животных-продуцентов во многом за­висит не только от тщательного их подбора, качества антигена и адьювантных веществ, но и от правильно выбранной схемы гиперимму­низации, правильной технологии выполнения этих схем, а также тех­нологии кровопускания или обескровливания продуцентов в конце их эксплуатации.

Антиген вводится обычно подкожно или внутримышечно в не­сколько мест с таким расчетом, чтобы точки инъекции находились вблизи лимфатических узлов. При этом в иммуногенез быстрее вов­лекается большое количество лимфоузлов, что повышает общую и иммунологическую реактивность организма. Введение антигена од­новременно в несколько мест обеспечивает лучшую рассасываемость его и появление более равномерных и менее болезненных инфильт­ратов.

Антигены в небольших дозах (5 - 25 мл) обычно вводят подкожно в верхнюю часть шеи животного, а в больших количествах - в об­ласть спины и крупа внутримышечно.

Места введения антигена или крововзятия протирают дезинфи­цирующими растворами.

Для гипериммунизации, как было показано выше, чаще всего ис­пользуют лошадей. Цикл гипериммунизации обычно длительный и составляет 1 - 2 и более месяцев. Впрочем, в каждом случае цикл иммунизации во многом зависит от вида получаемой гипериммун­ной сыворотки.

Например, для получения гипериммунной противосибиреязвен­ной сыворотки используют лошадей в возрасте от 3 до 10 лет. Внача­ле здоровым животным вводят четырехкратно вакцину Ценковского II для создания стойкого иммунитета (грундиммунизация), а потом лошадей подвергают гипериммунизации вирулентной суточной бу­льонной культурой возбудителя сибирской язвы. Всего используют 12 вирулентных штаммов возбудителя, комбинируя их по четыре в виде смеси для каждой иммунизации.

Гипериммунизацию лошадей начинают с малых доз: 0,5; 1,0; 2,5 и 5,5 мл с интервалом в трое суток. Затем культуры возбудителя си­бирской язвы вводят с интервалами в 3 - 4 суток и в дозах 10,0; 20,0; 40,0; 80,0; 100,0; 110,0 120,0; 130,0; 140,0; 150,0 мл.

Обычно бывает достаточным ввести антиген 13 раз и сыворотка лошадей-продуцентов становится активной. При введении доз от 10 до 80 мл к культуре добавляют 0,2 % алюминиевых квасцов, а к до­зам от 100 до 150 мл - 0,1 % квасцов. При повышении у животных температуры тела интервал между инъекциями увеличивают до 4 или 5 суток.

В каждом конкретном случае схемы иммунизации могут быть раз­ными и отличаются одна от другой даже при получении одной и той же сыворотки.

Специалисты сывороточного производства считают, что каждое животное отличается индивидуальной реактивностью организма и для него необходима своя, отдельная схема гипериммунизации.

Разнообразие схем иммунизации определяется: различием мето­дов введения антигена; дозировкой антигена; количеством инъекций; интервалами между инъекциями; объемом забираемой у животного крови; кратностью цикловых кровопусканий.

По окончании гипериммунизации, когда в сыворотке крови жи­вотного установлен максимальный титр специфических антител, у него берут кровь обычно через 7-10 суток после последней инъекции антигена. Этот период соответствует максимальному накоплению антител в крови животных и полностью укладывается в закономер­ности иммуногенеза.

Количество забираемой крови зависит: от массы животного; от привычки его к кровопотерям с учетом начального и последующих циклов; количества предполагаемых кровопусканий в данном цик­ле; количества титра антител; состояния здоровья животного.

К взятию крови животных приучают постепенно.

Обычно при каждом крововзятии кровь берут из яремной вены из расчета 800 мл на каждые 50 кг массы животного (или 13 % к общей массе крови животного).

Многочисленные эксперименты и клинические исследования сви­детельствуют о том, что гемодинамика, эритропоэз, лейкопоэз, реге­нерация сывороточных белков, функциональное состояние различ­ных органов при кровопусканиях в значительной мере зависит от дозы и кратности взятия крови.

Однократное кровопускание в дозах, не превышающих 1 % от массы тела животного, не вызывает заметных гемодинамических, гемоцитологических и биохимических сдвигов в ближайшие сроки от момента взятия крови.

В то же время установлено, что двукратное кровопускание стиму­лирует образование иммуноглобулинов М (IgM), плазмоцитарную реакцию лимфоидных органов, влияет на уровень гамма- и бета-гло­булинов, повышает синтез пропердина, лизоцима и бета-лизинов, увеличивает бактерицидность сыворотки крови и фагоцитарную ак­тивность лейкоцитов, повышает превентивные свойства сыворотки, а также сопротивляемость организма инфекции.

Совершенно иным является эффект многократных взятий крови. Они приводят к изменению иммунных реакций. В частности, они стимулируют образование различных факторов иммунитета, но уг­нетают активность IgM-антител.

Тотальное обескровливание проводят тогда, когда решается воп­рос о прекращении использования животных как продуцентов. Обыч­но это делают в момент максимального накопления антител и появ­ления тенденции снижения их синтеза.

Перед тотальным взятием крови для получения её в наибольших количествах животным обычно вводят сердечные вещества. Но нуж­но отметить, что животные-продуценты могут пройти несколько цик­лов гипериммунизации (5 - 8) и решение вопроса о тотальном кро­вопускании принимается строго индивидуально.