Примечания: то, что нужно вписывать в протокол отмечено синим курсивом

Протоколы были когда-то подписаны Норман.

Дата…………………………… ФИО……………………………….

Тема: ВОЗБУДИТЕЛИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ

Занятие №…..

Программа занятия

1. Биологические свойства возбудителей бактериальных кишечных инфекций, их экология, эпидемиология, патогенность и особенности патогенеза вызываемых ими заболеваний.

2. Методы лабораторной диагностики бактериальных кишечных инфекций.

Демонстрация:

1. Мазки из чистых культур возбудителей кишечных инфекций: Escherichia coli, Shigella sonnei, Salmonella typhу, Staphylococcus aureus, Vibrio cholerae. Окраска по методу Грама.

2. Диагностические и лечебно-профилактические препараты.

Задание студентам:

1. Микроскопировать и зарисовать мазки из чистых культур возбудителей кишечных инфекций.

2. Бактериологическая диагностика кишечных инфекций.

2.1.Задача №1. Диагностика брюшного тифа и паратифов.

А. Бактериологическая диагностика:

а) Выбрать материал для исследования.

б) Учесть результаты первичного посева исследуемого материала.

в) Учесть результаты пересева бактерий со среды Рапопорта на среду Эндо: описать и зарисовать колонии и обосновать выбор подозрительных колоний для дальнейшего исследования.

г) Учесть результаты пересева подозрительных колоний со среды Эндо на среду Ресселя.

д) Учесть результаты идентификации выделенной чистой культуры по биохимическим свойствам. Сделать вывод и наметить план дальнейшего исследования.

Б) Серодиагностика. Проанализировать результаты реакции агглютинации Видаля.

2.2. Задача №2. Бактериологическая диагностика холеры.

5) Отметить способности к росту на среде с полимиксином. Дать заключение.

3. Диагностика пищевых интоксикаций.

А. Выбрать материал для исследования.

В. Проанализировать результаты РНГА для обнаружения ботулотоксина в сыворотке больного (реакция Бойдена). Дать заключение.

ПРОТОКОЛ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ

1. Микроскопия мазков из чистых культур возбудителей кишечных инфекций. Окраска по методу Грама (отметить тинкториальные свойства).

Escherichia coli Shigella sonnei Salmonella typhy

Staphylococcus aureus Vibrio cholerae

2.1. Задача №1. Диагностика брюшного тифа и паратифов.

А. Бактериологическая диагностика:

а) Материал для исследования: сыворотка крови, фекалии, мазки с рук, рвотные массы

б)Результат посева исследуемого материала с) Результат посева со

(кровь) на среду Рапопорт: среды Рапопорт на среду

Эндо: Лактонегативные колонии – возможно, Salmonella

(т.к. не расщепляют лактозу)

Помутнение, изменение цвета

без газообразования

Выбор подозрительных колоний на основании следующих признаков:

Бесцветные колонии

d) Результат посева материала из подозрительных колоний на среду Ресселя:

микроорганизмы сбраживают глюкозу и не сбраживают лактозу, след. Это предположительно Salmonella

Заключение: Культура относится к роду Salmonella

е) Идентификация выделенной чистой культуры по биохимическим свойствам.

Условные обозначения: К – ферментация до образования кислоты; КГ - ферментация до образования кислоты и газа; (+) – образование продукта; (-) – отсутствие реакции.

Ферментация					Образование
Глюкоза	Лактоза	Мальтоза	Маннит	Сахароза	H2S	Индол
К	-	К	К	-	+	-

Заключение: S. typhy

План дальнейшего исследования выделенной чистой культуры:

Реакция Видаля

Серотипирование

Фаготипирование

Определение чувствительности к АБ

В. Серодиагностика:

Проанализировать результаты реакции агглютинации Видаля:

Диагностикум	Разведения сыворотки				Контроли
	1/100	1/200	1/400	1/800	Диаг ности кумов	Сыв-ки
Брюшнотифозный О-монодиагностикум	+++ +++ +++ ++ - - +++ +++ ++ - - ++ - - - - + - - - -
Брюшнотифозный Н-монодиагностикум
Паратифозный А ОН-диагностикум
Паратифозный В ОН-диагностикум

Вывод: Разгар заболевания (т.к. много АТ и преобладают О)

2.2. Задача №2. Бактериологическая диагностика холеры.

а) Материал для исследования: рвотные массы, желчь, испражнения

б) Методы экспресс-диагностики:

1. иммобилизация холерными сыворотками и фагами

2. иммуннофлюорисцентный метод

в) Идентификация чистой культуры вибрионов, выделенных от больного.

1) Микроскопия мазка из чистой культуры, выделенной от больного. Окраска по методу Грама. (испражнения)

Заключение: Предположительно, V. cholerae

2) Серологическая идентификация:

Развернутая реакция агглютинации с диагностической 01 сывороткой (титр сыворотки 1:3200)

Разведения сыворотки	1/50	1/100	1/200	1/400	1/800	1/1600	1/3200	Контроли
								Сыв-ки	К-ры
Результат	+++	+++	+++	+++	+++	+++	++	-	-

Заключение: Титр сыворотки 1:3200. По антигенным свойствам это V. cholerae

3) Биохимические свойства. Гексаминовый тест.

Опыт Контроль Заключение:

Положительный гексаминовый тест.

Предположительно, V. Cholerae el-tor

4) Определение чувствительности к холерным бактериофагам.

Условные обозначения: (+) – лизис; (-) – нет лизиса.

Х

_

олерный фаг С (фаг IV) - Заключение: Холерный вибрион чувствителен

к фагу Эль-Тор 2

Фаг Эль-Тор 2 +

5) Рост на среде с полимиксином: Наблюдается рост колоний

Заключение: V. Cholerae el-tor

Вывод: V. Cholerae el-tor

3. Диагностика пищевых интоксикаций.

А. Материал для исследования: Испражнения, рвотные массы, промывные воды желудка

В. Диагностика ботулизма:

Реакция Бойдена (РНГА)

Условные обозначения: (+) – гемагглютинация; (-) – нет гемагглютинации.

Диагностикум ботулинический эритроцитарный антительный	Исследуемая сыворотка	Нормальная сыворотка
Тип А	-	-
Тип В	-	-
Тип Е	+	-

Заключение: Исследуемая сыворотка содержит ботулотоксин типа Е

Антимикробные препараты:

Название препарата	Механизм действия	Спектр действия
Тетрациклин Бисептол Ампициллин Канамицин Левомицетин	Блок синтеза белка (связ с 30S рибосомы) Нарушает обр-е ТГФК Нарушение образования пептидных связей Блок синтеза белка (связ с 30S рибосомы) Блок синтеза белка на стадии элонгации	Широкий Гр(+) гр(-) Гр(+) гр(-), анаэробы Гр(+)

Диагностические и лечебно-профилактические препараты:

Содержащие антигены	Содержащие антитела	Бактериофаги
диагностические Сальмонулезная О и М монодиагностикумы 2)Лечебно-профилактические Холерная вакцина, Холерный анатоксин, Дизентерийная вакцина, Брюшнотифозная моновакцина, Брюшнотифозная спиртовая вакцина обогащ vi АГ	Противохолерная агглютинин. О-сыворотка Типовые сыворотки Огава и Инаба Сальмонулезные групповые адсорб. моновалентн. О- и Н- агглютинин. Сыворотки Антитоксическая сыворотка перфрингенс Агглютинин. ОВ-сыворотка против энцефалита Противоботулиз. Сыв-ки 1) Противоботулиз. сыворотка	Типовые холерные фаги Стаффилококовые бактериофаги Поливалентный холерный фаг Поливалентный брюшнотифозный бактериофаг Поливалентный дизентерийный бактериофаг