500 См3 проб

90 см³ 0,85% NaCl

10 см³ 1 см³ 1 см³

9 см³ 0,85% 9 см³ 0,85%

NaCl NaCl

10^-1 10^-2 10^-3

2Vх 1 см³

2Vх 1 см³

2Vх 1 см³

2Vх 1 см³

10 см³ ЛПС 10 см³ ЛПС 10 см³ ЛПС 10 см³ ЛПС

Термостатирование (37±1)⁰С 24 ч

Полное отсутствие изменения среды позволяет дать отрицательный ответ.

Из посевов в среду накопления, где отмечено помутнение, образование кислоты и газа или только помутнение, произвести высев петлёй на сектора среды Эндо. Посевы на среде Эндо инкубируют при (37±1)⁰С, 16-18 ч.

Для типичных лактозоположительных колоний (тёмно-красных с металлическим блеском или без него) выполняют оксидазный тест. При наличии оксидазоотрицательных колоний дают положительный ответ на наличие ОКБ в данном объёме пробы. При необходимости подтверждения ОКБ делают пересев изолированных колоний со среды Эндо в лактозную среду с индикатором уколом, посевы инкубируют при (37±1)⁰С 48 ч.

Одновременно делают высев в лактозную среду с индикатором для обнаружения ТКБ с последующим инкубированием при (44±0,5)⁰С, 24 ч.

Сбраживание лактозы, образование кислоты и газа свидетельствует о присутствии ОКБ и ТКБ.

4. Учёт результатов. После определения положительных и отрицательных результатов на наличие ОКБ и ТКБ в объёмах воды, засеянной в среду накопления, вычисляют наиболее вероятное число (НВЧ) в 100 см³ по таблице приложения 8, соответствующих схеме и полученным результатам.

5. Определить ОМЧ 37⁰С и ОМЧ 22⁰С согласно МУК 4.2.1084-04, для этого из каждой пробы делают посев 1 см³ и по 1 см³ исходного или двух разбавлений, приготовленных по п.3. Выбранный объём засевают по схеме:

проба

10^-1 10^-2 10^-3

Посев по 1 см³

В каждую чашку вливают 8-10 см³ расплавленного и остуженного до 45-48⁰С питательного агара, затем круговыми движениями на горизонтальной поверхности смешивают содержимое чашек. Тонкий слой агара увеличивает эффективность учёта сапрофитной микрофлоры водоёмов за счёт лучших условий роста аэробных и факультативно анаэробных бактерий, преобладающих в водоёмах. Колонии вырастают более крупные, легко подсчитываемые на фоне прозрачного тонкого слоя агара. Ограничен рост расплывчатых колоний. Две чашки Петри с посевами одной повторности помещают в термостат и инкубируют при (37±1)⁰С, (24±2) ч. Две другие чашки – при (20-22)⁰С, (72±2) ч. По истечении времени инкубирования подсчитать все выросшие колонии. Результат записать число КОЕ при ОМЧ 37⁰С в 1 см³, число КОЕ ОМЧ 22⁰С в 1 см³. при расплывчатом росте колоний делают запись «ползучий рост»; при слишком многочисленном росте – «сплошной рост».

6. Рассчитать соотношение ОМЧ 22⁰С : ОМЧ 37⁰С. Сделать вывод о самоочищении водоёма, санитарном состоянии водоёма, источниках загрязнения.