Контрольные вопросы

1. В каких случаях используется метод предельных разведений для определения микроорганизмов?

2. В чём заключается сущность этого метода?

3. Какие виды микроорганизмов относятся к газообразующим анаэробам?

4. Каковы условия культивирования анаэробов?

5. Как составляется числовая характеристика в методе предельных разведений (предварительная, окончательная)?

Лабораторная работа №13 Микробиологическое исследование воды поверхностных водоёмов

Вода является естественной средой обитания разнообразных микроорганизмов. Характер микрофлоры водоёмов определяют особенности конкретной водной среды. Микрофлору водоёмов образуют 2 группы: автохтонные (или водные) и аллохтонные (попадающие извне) микроорганизмы.

Воды поверхностных водоёмов открыты для всех видов контаминации. Со сточными, ливневыми, талыми, водами в водоёмы попадают многие виды микроорганизмов, резко изменяющие микробный биоценоз и санитарный режим.

Основной путь микробного загрязнения – попадание неочищенных городских отходов и сточных вод.

Микрофлора сточных вод состоит из обитателей кишечника человека и животных, включая представителей нормальной и условно патогенной флоры. Также в её состав могут входить патогенные виды (возбудители кишечных инфекций, туляремии, иерсиниозов, лептоспирозов, вирусы полиомиелита, гепатита и др.)

Следует помнить, что вода не является благоприятной средой для размножения патогенных микроорганизмов, для которых биотопы – организм человека и животных.

Контроль поверхностных водоёмов даёт возможность дать заключение о возможности использовать водоём (для питьевых, хозяйственных или других нужд), выяснить причины фекального загрязнения, определить способность водоёма к самоочищению.

Все санитарно-микробиологические исследования воды регламентированы стандартными документами.

В соответствии с СанПиН 2.1.5.980-00 «Гигиенические требования к охране поверхностных вод» гигиенические нормативы установлены в водных объектах для двух категорий водопользования:

I категория: водные объекты или их участки, используемые в качестве источника питьевого и хозяйственно-бытового водопользования, а так же для водоснабжения предприятий пищевой промышленности.

II категория: водные объекты или их участки для рекреационного водопользования, а так же все водные объекты, находящиеся в черте населённых мест.

По микробиологическим показателям водные объекты должны соответствовать требованиям указанным в таблице 7

Таблица 7

Показатели	Категории пользования
	Для питьевого и хозяйственно-бытового водоснабжения, так же для водоснабжения пищевых предприятий	Для рекреационного водопользования, а так же в черте населённых мест
Возбудители кишечных инфекций	Вода не должна содержать возбудителей кишечных инфекций
Термотолерантные колиформные бактерии (ТКБ)	Не более 100 КОЕ/100 см3	Не более 100 КОЕ/100 см3
Общие колиформные бактерии (ОКБ)	Не более 1000 КОЕ/100 см3	Не более 500 КОЕ/100 см3
Колифаги	Не более 10 БОЕ/100 см3	Не более 10 БОЕ/100 см3
Жизнеспособные яйца гельминтов	Не допускается в 25 литрах

Микробиологические исследования проводят согласно МУК 4.2.1884-04 «Санитарно-микробиологический и санитарно-паразитологический анализ поверхностных водоёмов»

Общие колиформные бактерии (ОКБ) – грамотрицательные, оксидазоотрицательные, не образующие спор палочки, способные расти на дифференциальных лактозных средах, ферментирующие лактозу до кислоты и газа при температуре (37±1)⁰С, в течение 24-48 ч.

Термотолерантные колиформные бактерии (ТКБ)- входят в число ОКБ. Обладают всеми их признаками и кроме того способны ферментировать лактозу при (44±0,5)⁰С в течение 24 ч.

ОКБ – основной нормируемый показатель при оценке качества воды водоёмов. ОКБ – интегральный показатель степени фекального загрязнения, который включает ТКБ, E.coli и поэтому обладает индикаторной надёжностью в отношении возбудителей бактериальных кишечных инфекций.

ОКБ – наиболее чувствительный показатель для выявления источников фекального загрязнения, в том числе небольших.

ТКБ – рекомендуется определять одновременно в одном и том же посеве с ОКБ для подтверждения фекального происхождения загрязнения.

При выборе нового источника водоснабжения или места рекреации в воде водоёмов дополнительно следует определять число колоний, вырастающих:

• при температуре 37⁰С в течение 24 ч;

• при температуре 22⁰С в течение 72 ч.

К общему числу микроорганизмов (ОМЧ) относят мезофильные аэробы и факультативные анаэробы (МАФАМ), способные образовывать на питательном агаре колонии, видимые при увеличении в 2 раза при температуре 37⁰С в течение 24 ч (ОМЧ 37⁰С) и при температуре 22⁰С в течение 72 ч (ОМЧ 22⁰С).

Общее микробное число не нормируется в воде водоемов в местах действующих водозаборов централизованного питьевого водоснабжения, черте населённых мест, зонах рекреации, поскольку уровень этой группы микроорганизмов в большей мере зависит от природных особенностей каждого объекта, времени года и т.п.

ОМЧ при температуре инкубации 37⁰С – индикаторная группа микроорганизмов, в числе которых определяют в большей мере аллохтонную микрофлору, внесённую в водоём в результате антропогенного загрязнения, в т.ч. фекального.

ОМЧ при температуре инкубации 20-22⁰С - индикаторная группа микроорганизмов, в числе которых, помимо аллохтонной, определяют водную микрофлору данного водоёма (автохтонную).

При температуре 22⁰С, как правило, вырастает больше сапрофитных микроорганизмов, чем при температуре 37⁰С. Соотношение численности этих групп микроорганизмов позволяет судить об интенсивности процесса самоочищения, активными участниками которого они являются. Эта разница более выражена при завершении процесса самоочищения (коэффициент соотношения ОМЧ 22⁰С : ОМЧ 37⁰С равен четырём и выше). В местах загрязнения хозяйственно-бытовыми сточными водами численные значения обеих групп близки. Показатель позволяет получить дополнительную информацию о санитарном состоянии водоёмов, источниках загрязнения, процессах самоочищения.

Задание: определить микробиологическое качество воды открытого водоёма.

Материалы и оборудование: стерильные пробирки, чашки Петри, пипетки, флаконы, спиртовки, бактериологические петли, термостаты, микроскопы, питательные среды: ЛПС, концентрированный ЛПС, Эндо, среда Гисса с лактозой, физиологический раствор (0,85% NaCl).

Ход работы:

1. Приготовить питательные среды.

2. В стерильную ёмкость отобрать пробу воды, закрыть ёмкость резиновой, силиконовой или другой пробкой с колпачком из фольги. Стерильные ёмкости открывают перед отбором проб, не касаясь её и пробки. В ёмкости должно оставаться пространство между пробкой и поверхностью воды. Поверхностные пробы отбирать с глубины 10-15 см от поверхности воды или от нижней кромки льда. Придонные пробы отобрать в 30-50 см от дна. Отбор проб следует производить с мостов, помостов, где глубина водоёма не менее 0,5 м недопустимо производить отбор проб с берега. Пробы отбирают батометром (ГОСТ 51592-00), маркируют (место отбора, дата, время забора, температура воды, погодные условия). Объём пробы на индикаторные микроорганизмы составляет не менее 500 см³, на индикаторные патогенные (сальмонеллы) – не менее 1,5 л. Доставить пробы в лабораторию. Время транспортировки и хранения до момента исследования не должно превышать 6 ч (МУК 4.2.1884-04).

3. Произвести посев на ОКБ и ТКБ титрометрическим методом (согласно МУК 4.2.1884-04) по схеме: