Контрольные вопросы

1. Какое значение имеет санитарно-микробиологический контроль на пищевых производствах?

2. Что включает в себя санитарно-микробиологический контроль?

3. Каковы санитарные требования к технологическому оборудованию, инвентарю, таре, спецодежде, рукам?

Лабораторная работа № 11 Санитарно-гигиеническое исследование почвы

Опасность загрязнения почв определяется уровнем ее возможного отрицательного влияния на контактирующие среды (вода, воздух), пищевые продукты, непосредственно на человека, а также на биологическую активность почвы и процессы самоочищения.

Гигиенические требования к качеству почв территорий населенных мест устанавливается в первую очередь для наиболее значимых территорий (зон повышенного риска): детских и образовательных учреждений, спортивных, игровых, детских площадок, жилой застройки, площадок отдыха, зон рекреации (скверы, парки, бульвары, пляжи, лесопарки), зон санитарной охраны водоемов, прибрежных зон, санитарно-защитных зон.

Гигиеническая оценка почвы проводится с целью определения ее качества и степени безопасности для человека, а также разработки мероприятий (рекомендаций) по снижению химических и биологических загрязнений.

По степени опасности в санитарно-эпидемиологическом отношении почвы населенных мест могут быть разделены на следующие категории по уровню загрязнения: чистая, умеренно опасная, опасная и чрезвычайно опасная (табл. 3).

Таблица 3

Оценка степени эпидемической опасности почвы

(СанПиН 2.1.7.1287-03)

Категория загрязнения почв	Индекс БГКП	Индекс энтерококков	Патогенные, в том числе сальмонеллы	Яйца гельминтов экз/кг	Личинки Л куколки К кол-во экз., в почве площадью 20х20 см
Чистая	1-10	1-10	0	0	0
Умеренно опасная	10-100	10-100	0	До 10	Л до 10 К - отс.
Опасная	100-1000	100-1000	0	До 100	Л до 100 К до 10
Чрезвычайно опасная	1000 и выше	1000 и выше	0	> 100	Л > 100 К > 10

Согласно МУ 2.1.7.730-99 в почвах на объектах повышенного риска (детские площадки, игровые площадки, зоны санитарной охраны и т.п.) санитарно-бактериологические показатели:

БГКП (колиндекс), энтерококки (индекс энтерококков) - косвенно характеризуют интенсивность биологической нагрузки на почву. В крупных городах с высокой плотностью населения биологическая нагрузка на почву очень велика и, как следствие, высоки индексы санитарно-показательных микроорганизмов.

Индекс санитарно-показательных микроорганизмов БГКП и энтерококков 10 и более клеток/г почвы - свидетельствует о загрязнении почвы сальмонеллами.

Концентрация колифага на уровне 10 БОЕ на грамм и более - свидетельствует об инфицировании почвы энтеровирусами.

Таким образом, при отсутствии возможности прямого определения возбудителей кишечных инфекций, патогенных энтерококков, энтеровирусов оценка безопасности может быть проведена ориентировочно по индикаторным микроорганизмам.

Почву оценивают как "чистую" без ограничений по санитарно- бактериологическим показателям при отсутствии патогенных бактерий и индексе санитарно-показательных микроорганизмов до 10 клеток на грамм почвы.

В соответствии с МУ 2.1.7.730-99 при необходимости более углубленной оценки санитарного состояния почвы и способности ее к самоочищению исследуют биологическую активность почвы.

Основными интегральными показателями биологической активности почвы являются: общая микробная численность (ОМЧ), численность основных групп почвенных микроорганизмов (почвенных сапрофитов, актиномицетов, почвенных микромицетов), показатели интенсивности трансформации соединений углерода и азота в почве ("дыхание" почвы, "санитарное число", динамика азота аммиака и нитритов в почве, азотфиксация, аммонификация, нитрификация, денитрификация) и другие показатели. Перечень показателей определяется целями исследования, природой и интенсивностью загрязнения, характером землепользования и регламентируется МУ 2.1.7.730-99 "Гигиеническая оценка почвы населенных мест" и СанПиН 2.1.7.1287-03 "Санитарно-эпидемические требования к качеству почвы". Кроме того, схемы оценки санитарного состояния почвы на основании отдельных санитарно-микробиологических критериев можно найти в ряде нормативных документов. Так в "Методических указаниях по санитарному микробиологическому исследованию почвы" МУ № 1446-76 приведена оценочная таблица, регламентирующая содержание БГКП, нитрифицирующих бактерий, клостридий и термофильных бактерий (табл. 4).

Таблица 4

Схема оценки санитарного состояния почвы по микробиологическим показателям (МУ № 1446-76).

Категория почв	Титр (г)			Индекс термофильных м/о, кл/г
	БГКП	нитрифицирующих бактерий	клостридий
Чистая	1,0 и выше	0,1 и выше	0,01и выше	102-103
Загрязненная	0,9-0,01	0,09-0,001	0,009-0,0001	103-105
Сильно загрязненная	0,009 и ниже	0,0009 и ниже	0,00009 и ниже	105-4·106

В "Оценочных показателях санитарного состояния почвы населенных мест" № 1739-77 в основу оценки положены только два показателя - БГКП и перфрингенс-титр, по которым выделяются четыре степени загрязнения почвы (табл. 5).

Таблица 5

Оценка санитарного состояния почвы по титру санитарно-показательных микроорганизмов (по оценочным показателям санитарного состояния почвы населенных мест № 1739-77).

Санитарное состояние	Титр БГКП (г)	Перфрингенс-титр (г)
Чистая	1,0 и выше	0,1 и выше
Слабозагрязненная	0,1-0,01	0,1-0,01
Умеренно загрязненная	0,01-0,001	0,01-0,0001
Сильно загрязненная	0,001 и ниже	0,0001 и ниже

В "Методических указаниях по оценке загрязнения почвы химическими веществами" МУ № 4266-87 используется альтернативная оценка ("чистая-грязная") и в то же время учитывается степень потенциальной опасности самого объекта (табл.6).

Таблица 6

Оценка эпидемической опасности почв населенных пунктов

(МУ 4266-87).

Объекты	Категории загрязнения	Показатели загрязнения
		БГКП (кл/г)	Патогенные	Энтеровирусы
Зоны повышенного риска: детские сады, игровые площадки, зоны санитарной охраны водоемов	чистая загрязненная	1-9 >10	- +	- +
Санитарно-защитные зоны предприятий	чистая загрязненная	1-99 >100	- +	- +

Объем исследований, и перечень загрязнителей определяется аккредитованными организациями по согласованию с органами и учреждениями государственного санитарно-эпидемиологического надзора в зависимости от их функционального назначения (табл. 7).

Таблица 7

Основные микробиологические показатели санитарного состояния почв территорий населенных мест в зависимости от из функционального назначения (СанПиН 2.1.7.1278-03)

№	Наименование показателя	Объекты наблюдения, функциональные зоны, территории
		Жилая зона	Детские дошкольные и школьные учреждения, игровые площадки, территории дворов	Зоны санитарной охраны водоемов	Рекреационные зоны (скверы, парки, бульвары, пляжи, лесопарки)	Транспортные магистрали	Промышленная зона	Почвы с/х (опытные поля, сады и огороды, приусадебные участки, тепличные хозяйства)
1	Лактозоположительные палочки (колиформы), индекс	+	+	+	+	+	+	+
2	Энтерококки (фекальные стрептококки), индекс	+	+	+	+	+	+	+
3	Патогенные микроорганизмы (по эпидпоказаниям), индекс	+	+	+	+	+	+	+
4	Яйца и личинки гельминтов (жизнеспособных), экз./кг	+	+	+	+	+	+	+
5	Цисты кишечных патогенных простейших экз./100г	+	+	+	+	+	+	+
6	Личинки и куколки синантропных мух экз./в почве площади 20х20 см	+	+	+	+	+	+	+

Примечание:

Знак "+" - обязательное определение

Знак "+" - обязательное определение при наличии источника загрязнения.

Санитарно-бактериологические исследования почв проводятся в соответствии с нормативно-методической документацией: МР № ФЦ 4022 от 24.12.2004 г. "Методы микробиологического контроля почвы"; ГОСТ 17.4.3.01.83 "Общие требования к отбору проб почва"; ГОСТ 17.4.4.02-84 "Методы отбора и подготовки проб для химического, бактериологического, гельминтологического анализа"

Задание. Провести микробиологические исследования почвы для определения категории почвы по степени опасности в санитарно эпидемиологическом отношении: а) определить индекс БГКП; б) определить индекс энтерококков.

Материалы и оборудование. Пробы почвы с детских площадок, рекреационных зон, спиртовки, петли, чашки Петри, пробирки, предметные стекла, микроскоп, термостат, питательные среды: ЛПС, Эндо, МИС, среды Гисса, перекись водорода 3%.

Ход работы:

1. Приготовить питательные среды, посуду для исследования (см. прил.6).

2. Отобрать пробы с участка не менее чем 5х5 м из 5 точек (метод конверта), с глубины 0-20 см (из песочниц с глубины 0-10 см), для приготовления смешанной пробы весом 1 кг, соблюдая правила асептики, доставить в лабораторию. Допускается хранение образцов до начала исследования при (4-5)⁰С не более 24 ч.

3. Приготовить из доставленных образцов усредненную пробу весом около 0,5 кг, предварительно убрав камни, корни растений и др. твердые предметы. Из усредненной навески отобрать 10 г почвы в колбу добавить 90 см³ стерильной водопроводной воды (разведение 1:9), перемешать суспензию в течение 10 мин для десорбции микроорганизмов с почвенных частиц. После отстаивания суспензии в течение 10 сек, приготовить ряд последовательных 10-кратных разведений, общее количество которых зависит от предполагаемого уровня микробного загрязнения.

4. Произвести посев и идентификацию микроорганизмов по схеме:

Десятикратные разведения почвы:

10^-1 10^-2 10^-3 10^-n

БГКП и энтерококки

1 см³ 1 см³ 1 см³ 1 см³

9 см³ ЛПС 9 см³ ЛПС 9 см³ ЛПС 9 см³ ЛПС

Термостатирование 24-48 ч (36±1)⁰С. при проявлении признаков роста, пересеять штрихом на дифференциально-диагностическую среду Эндо и МИС.

БГКП Энтерококки

Эндо МИС

Термостатирование 24-48 ч (36±1)⁰С.

Окрашивание мазков по Граму, микрокопирование

Тест на сбраживание Тест на каталазу

углеводов (пересев в среду Гисса К энтерококкам относятся

с лактозой) термостатирование грамположительные кокки,

24-48 ч (36±1)⁰С расположенные парами,

К колиформным бактериям короткими и длинными

относятся факультативно-анаэробные цепочками.

не образующие спор грамотрицательные Каталозоотрицательные,

палочки, сбраживающие лактозу образующие на МИС с

с образованием кислоты и газа теллуритом калия черные

колонии

5. Перевести титр (Т) БГКП и титр энтерококков в индекс. Титр наименьшее количество материала (г), в котором ещё обнаруживаются микроорганизмы.

5. Сделать вывод. Определить категорию почвы.