Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
МУ Санитарная микробиология.doc
Скачиваний:
0
Добавлен:
01.05.2025
Размер:
871.94 Кб
Скачать

Определения понятий показателей

Определение общего числа микроорганизмов,

образующих колонии на питательном агаре (ОМЧ)

ОМЧ - это общее число мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (ОМЧ), способных образовывать колонии на питательном агаре при температуре 370 С в течение 24 ч.

Определение спор сульфитредуцирующих клостридий

Сульфитредуцирующие клостридии - спорообразующие анаэробные палочковидные микроорганизмы, редуцирующие сульфит натрия на железосульфитном агаре при температуре (44 ±1) 0С в течение (16-18) ч.

Принцип метода: Метод основан на выращивании посевов в железосульфитном агаре в условиях, приближенных к анаэробным, и подсчете числа черных колоний.

Определение общих и термотолерантных бактерий

Общие колиформные бактерии (ОКБ) - грамотрицательные, оксидазоотрицательные, не образующие спор палочки, способные расти на дифференциально лактозных средах, ферментирующие лактозу до кислоты, альдегида и газа при (37 ±1)0С в течение (24-48) ч.

Термотолерантные колиформные бактерии (ТКБ) входят в число общих колиформных бактерий, обладают всеми их признаками и, кроме того, способны ферментировать лактозу до кислоты, альдегида и газа при (44 ±0,5) 0С в течение 24 ч.

Определение ОКБ и ТКБ методом мембранной фильтрации. Принцип метода. Метод основан на фильтрации установленного объема воды через мембранные фильтры, выращивании посевов на дифференциальной питательной среде с лактозой и последующей идентификации колоний по культуральным и биохимическим свойствам.

При исследовании питьевой воды анализируют 3 объема по 100 см3.

Отмеренный объем воды фильтруют через мембранные фильтры с соблюдением следующих требований:

а) мембранные фильтры должны быть подготовлены к анализу в соответствии с указанием изготовителя;

б) воронку и столик фильтровального аппарата обтирают марлевым тампоном, смоченным ректифицированным спиртом, и фламбируют. После охлаждения на столик фильтровального аппарата кладут фламбированным пинцетом стерильный мембранный фильтр, прижимают его воронкой;

в) в воронку прибора наливают отмеренный объем воды, затем создают вакуум;

г) после окончания фильтрования отключают вакуум, воронку снимают, фильтр поднимают за край фламбированным пинцетом и переносят, не переворачивая, на питательную среду (Эндо), избегая пузырьков воздуха между средой и фильтром. Поверхность фильтра с осевшими на ней бактериями должна быть обращена вверх. На одну чашку можно поместить 3-4 фильтра с условием, чтобы они не соприкасались.

д) посевы термостатируют при (37 ±1) 0С в течение (24 ±2) ч.

Если на фильтрах нет роста или выросли колонии пленчатые, губчатые, плесневые, прозрачные, расплывчатые, то выдают отрицательный ответ: отсутствие ОКБ и ТКБ в 100 см3 исследуемой воды.

Если на фильтрах обнаружен рост изолированных типичных лактозоположительных колоний: темно-красных, красных с металлическим блеском или без него или других подобного типа колоний, подсчитывают число колоний каждого типа и приступают к подтверждению их принадлежности к ОКБ и ТКБ:

  • наличие оксидазной активности

  • принадлежность к окраске по Граму

  • ферментация лактозы до кислоты и газа

Определение ОКБ и ТКБ титрационным (бродильным) методом. Принцип метода. Метод основан на накоплении бактерий после посева установленного объема воды в жидкую питательную среду, с последующим пересевом на дифференциальную плотную питательную среду с лактозой и идентификацией колоний по культуральным и биохимическим тестам.

Отбор проб воды из крана производят после предварительной его стерилизации обжиганием и последующего спуска воды не менее 10 мин. Объем пробы должен быть не менее 500 см3. После наполнения емкость закрывают стерильной пробкой.

Доставку проб питьевой воды осуществляют в контейнерах-холодильниках при температуре (4-10)0С. При соблюдении указанных условий срок начала исследований от момента отбора проб не должен превышать 6 ч. Если пробы нельзя охладить, их анализ следует провести в течение 2 ч после забора.

Отобранную пробу маркируют и сопровождают документом отбора проб воды с указанием места, даты, времени забора, фамилии специалиста.

Задание: Определить микробиологическое качество питьевой воды.

Материалы и оборудование: стерильные флаконы, чашки Петри, спиртовки, пипетки, бактериологические петли, термостаты, весы, микроскопы, питательные среды: концентрированная лактозо-пептонная среда, Эндо, среда Гисса с лактозой, железосульфитная среда.

Ход работы.

  1. Приготовить питательные среды (см. приложение 6).

  2. Отобрать пробы воды.

  3. Сделать посев по микробиологической схеме:

Т итрометрический метод определения ОКБ и ТКБ

3

1

3

500 см3

2

V
100 см3

3 V по 100 см3

ОМЧ

1 см3

10 см3 конц. ЛПС

1

2V по 10 см3

см3

Термостатирование (37±1)0С,

24-48 ч.

Сульфит-

редуцирующие Термостатирование При наличии признаков роста

клостридии 37 0С, 24 ч. пересев на Эндо штрихом

Подсчет: 1) число колоний

на обеих чашках суммируют и

20 см3среды делят на 2. Результат: КОЕ в 1 см3.

2) если выросли расплывчатые

Термостатирование колонии или более 300 КОЕ, то от- Термостатирование

(44 ±1) 0С (16-18) ч. мечают "КОЕ в 1 см3 ориентировочно" (37 ±1) 0С, 18-20 ч

Подсчет колоний в 3) если подсчет невозможен, то от- При росте типичных

20 см3 воды* мечают "сплошной рост" лактозоположительных

пробу воды перед колоний:

посевом прогревают на 1) отношение к окраске

водяной бане в пробирках по Граму

для исключения 2) пересев в среду с лак-

вегетативных форм тозой уколом

Лактоза с ВР

ОКБ ТКБ

Термостатирование

(37 ±1) 0С (44 ±1) 0С

ТКБ + посинение среды

ОКБ +

  1. Сделать вывод о качестве воды.