
- •Санитарная микробиология
- •Введение
- •Лабораторная работа № 1 Общие правила в микробиологии
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа № 2 Микробиологические методы исследования
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа № 3 Микробиологическое исследование мяса и продукции из мяса
- •Микробиологическая схема посева
- •Определение бгкп (отсутствие в 1 г)
- •И кислоты Определение St. Aureus (отсутствие в 1 г)
- •Определение бактерии рода Salmonella
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа № 4 Микробиологическое исследование рыбы и рыбных изделий
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа № 5 Микробиологическое исследование молока и молочных изделий
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа № 6 Микробиологическое исследование плодоовощной продукции
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа № 8 Микробиологическое исследование воды централизованного водоснабжения (му 4.2.1018-01)
- •Определения понятий показателей
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа № 9 Микробиологическое исследование воздуха
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа № 10 Санитарно-микробиологическое исследование оборудования, рук и спецодежды персонала
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа № 11 Санитарно-гигиеническое исследование почвы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №12 Определение наиболее вероятного числа (нвч) микроорганизмов по методу предельных разведений
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №13 Микробиологическое исследование воды поверхностных водоёмов
- •500 См3 проб
- •Контрольные вопросы
- •Гигиенические требования безопасности консервированных пищевых продуктов
- •Микробиологический контроль санитарного состояния производства
- •Приготовление питательных сред
- •Расчёт наиболее вероятного числа бактерий в 100 см3 воды поверхностных водоёмов, обеззараженных сточных вод
- •Список использованной литературы:
Определения понятий показателей
Определение общего числа микроорганизмов,
образующих колонии на питательном агаре (ОМЧ)
ОМЧ - это общее число мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (ОМЧ), способных образовывать колонии на питательном агаре при температуре 370 С в течение 24 ч.
Определение спор сульфитредуцирующих клостридий
Сульфитредуцирующие клостридии - спорообразующие анаэробные палочковидные микроорганизмы, редуцирующие сульфит натрия на железосульфитном агаре при температуре (44 ±1) 0С в течение (16-18) ч.
Принцип метода: Метод основан на выращивании посевов в железосульфитном агаре в условиях, приближенных к анаэробным, и подсчете числа черных колоний.
Определение общих и термотолерантных бактерий
Общие колиформные бактерии (ОКБ) - грамотрицательные, оксидазоотрицательные, не образующие спор палочки, способные расти на дифференциально лактозных средах, ферментирующие лактозу до кислоты, альдегида и газа при (37 ±1)0С в течение (24-48) ч.
Термотолерантные колиформные бактерии (ТКБ) входят в число общих колиформных бактерий, обладают всеми их признаками и, кроме того, способны ферментировать лактозу до кислоты, альдегида и газа при (44 ±0,5) 0С в течение 24 ч.
Определение ОКБ и ТКБ методом мембранной фильтрации. Принцип метода. Метод основан на фильтрации установленного объема воды через мембранные фильтры, выращивании посевов на дифференциальной питательной среде с лактозой и последующей идентификации колоний по культуральным и биохимическим свойствам.
При исследовании питьевой воды анализируют 3 объема по 100 см3.
Отмеренный объем воды фильтруют через мембранные фильтры с соблюдением следующих требований:
а) мембранные фильтры должны быть подготовлены к анализу в соответствии с указанием изготовителя;
б) воронку и столик фильтровального аппарата обтирают марлевым тампоном, смоченным ректифицированным спиртом, и фламбируют. После охлаждения на столик фильтровального аппарата кладут фламбированным пинцетом стерильный мембранный фильтр, прижимают его воронкой;
в) в воронку прибора наливают отмеренный объем воды, затем создают вакуум;
г) после окончания фильтрования отключают вакуум, воронку снимают, фильтр поднимают за край фламбированным пинцетом и переносят, не переворачивая, на питательную среду (Эндо), избегая пузырьков воздуха между средой и фильтром. Поверхность фильтра с осевшими на ней бактериями должна быть обращена вверх. На одну чашку можно поместить 3-4 фильтра с условием, чтобы они не соприкасались.
д) посевы термостатируют при (37 ±1) 0С в течение (24 ±2) ч.
Если на фильтрах нет роста или выросли колонии пленчатые, губчатые, плесневые, прозрачные, расплывчатые, то выдают отрицательный ответ: отсутствие ОКБ и ТКБ в 100 см3 исследуемой воды.
Если на фильтрах обнаружен рост изолированных типичных лактозоположительных колоний: темно-красных, красных с металлическим блеском или без него или других подобного типа колоний, подсчитывают число колоний каждого типа и приступают к подтверждению их принадлежности к ОКБ и ТКБ:
наличие оксидазной активности
принадлежность к окраске по Граму
ферментация лактозы до кислоты и газа
Определение ОКБ и ТКБ титрационным (бродильным) методом. Принцип метода. Метод основан на накоплении бактерий после посева установленного объема воды в жидкую питательную среду, с последующим пересевом на дифференциальную плотную питательную среду с лактозой и идентификацией колоний по культуральным и биохимическим тестам.
Отбор проб воды из крана производят после предварительной его стерилизации обжиганием и последующего спуска воды не менее 10 мин. Объем пробы должен быть не менее 500 см3. После наполнения емкость закрывают стерильной пробкой.
Доставку проб питьевой воды осуществляют в контейнерах-холодильниках при температуре (4-10)0С. При соблюдении указанных условий срок начала исследований от момента отбора проб не должен превышать 6 ч. Если пробы нельзя охладить, их анализ следует провести в течение 2 ч после забора.
Отобранную пробу маркируют и сопровождают документом отбора проб воды с указанием места, даты, времени забора, фамилии специалиста.
Задание: Определить микробиологическое качество питьевой воды.
Материалы и оборудование: стерильные флаконы, чашки Петри, спиртовки, пипетки, бактериологические петли, термостаты, весы, микроскопы, питательные среды: концентрированная лактозо-пептонная среда, Эндо, среда Гисса с лактозой, железосульфитная среда.
Ход работы.
Приготовить питательные среды (см. приложение 6).
Отобрать пробы воды.
Сделать посев по микробиологической схеме:
Т
итрометрический
метод определения ОКБ и ТКБ
3
1
3
500 см3
2
V
100
см3
3
V
по
100 см3
ОМЧ
1
см3
1
2V
по 10 см3
Термостатирование (37±1)0С,
24-48 ч.
Сульфит-
редуцирующие Термостатирование При наличии признаков роста
клостридии 37 0С, 24 ч. пересев на Эндо штрихом
Подсчет:
1) число колоний
на
обеих чашках суммируют и
20 см3среды делят на 2. Результат: КОЕ в 1 см3.
2) если выросли расплывчатые
Термостатирование колонии или более 300 КОЕ, то от- Термостатирование
(44 ±1) 0С (16-18) ч. мечают "КОЕ в 1 см3 ориентировочно" (37 ±1) 0С, 18-20 ч
Подсчет колоний в 3) если подсчет невозможен, то от- При росте типичных
20 см3 воды* мечают "сплошной рост" лактозоположительных
пробу воды перед колоний:
посевом прогревают на 1) отношение к окраске
водяной бане в пробирках по Граму
для исключения 2) пересев в среду с лак-
вегетативных форм тозой уколом
Лактоза с ВР
ОКБ ТКБ
Термостатирование
(37 ±1) 0С (44 ±1) 0С
ТКБ
+ посинение среды
ОКБ +
Сделать вывод о качестве воды.