Реакция преципитации

В реакции участвуют мелкодисперсные антигены (преципитиногены), которые связываются с соответствующими антителами (преципитинами). Чаще всего эту реакцию применяют для выявления антигенов по известной иммунной преципитирующей сыворотке, содержащей антитела-преципитины. Это - качественный метод исследования. Наиболее популярна в медицинской и ветеринарной практике реакция Асколи для обнаружения антигена возбудителя сибирской язвы.

В узкую преципитационную пробирку добавляют стандартную иммунную сыворотку и на нее осторожно наслаивают жидкость, содержащую определяемый антиген. Появление на границе двух жидкостей кольца (преципитина) свидетельствует о наличии антигена возбудителя сибирской язвы в исследуемой жидкости. Преципитат возникает вследствие укрупнения коллоидных частиц антигена. Иногда эту реакцию называют кольцепреципитацией. Важным условием образования нерастворимого комплекса антиген - антитело является полная прозрачность жидкостей, а также эквивалентное соотношение ингредиентов, т.к. образующийся комплекс растворяется в избытке антигена или антитела.

Реакция преципитации в агаре по Оухтерлони

Метод диффузной преципитации позволяет детально изучать состав сложных водорастворимых антигенных комплексов. Средой для растворения является слой застывшего агара, в котором пробиваются лунки. В одну лунку помещают жидкость, содержащую исследуемый антиген, в другую - стандартную иммунную сыворотку. Компоненты, входящие в состав антигена, диффундируют навстречу соответствующему антителу с различной скоростью. Комплекс антиген - антитело расположен в различных участках геля, где образуются линии преципитации. Каждая из линий соответствует только одному комплексу антиген - антитело.

Радиальная иммунодиффузия по Манчини

При соотношении антигена и антитела, близком к оптимальному, образуется кольцо преципитации. Чем выше концентрация внесенного в лунку антигена, тем больше диаметр кольца. Чем выше концентрация антигена, тем на большее расстояние он продиффундирует до того как сформируется кольцо и тем шире будет диаметр этого кольца.

Если в реакции использовать 3 стандарта с известной концентрацией антигена, то можно получить калибровочную кривую. Такой подход можно использовать для определения концентрации иммуноглобулинов, компонента комплемента С, и т.д.

Радиальная иммунодиффузия по Манчини позволяет использовать моноспецифические антисыворотки и эталон с известным содержанием антигена. Тест-антиген и разведения растворов, исследуемых на наличие данного антигена, помещают в лунки, вырезанные рядами в пластине геля, куда предварительно внесена соответствующая моноспецифическая антисыворотка . Антиген диффундирует в гель и, соединившись со специфическими антителами, формирует кольца преципитации, диаметры которых зависят от концентрации антигена в лунках. Полученные результаты используют для построения калибровочной кривой, выражающей зависимость диаметров преципитантов от концентрации антигена в исследуемых растворах (рис. 3). Принцип радиальной диффузии положен в основу метода, применяемого для изучения токсигенности бактериальных культур и отбора из бактериальной популяции клонов с высокой степенью токсичности. В этом случае исследуемые культуры засевают в чашки с агаром , содержащим антитоксическую сыворотку. Вокруг отдельных колоний образуются кольца преципитации, диаметр которых прямо пропорционален степени токсичности штамма (рис. 3).

Рис. 3. Простая радиальная иммунодиффузия :а - кольца преципитации;б - калибровочная кривая.