Вопрос 29.
Изготовить мазок из агаровой культуры Bacillus subtilis,зафиксировать и покрасить по методу Грамма.
Подготовить микроскоп,рассматреть препатрат,опредилить форму и цвет бактериальних улеток.
А
)
На предметном стекле готовят фиксированный мазок исследуемой чистой культуры;
Мазок окрашивают красителем генцианвиолетом через полоску фильтровальной бумаги. Можно также использовать заранее приготовленные фильтровальные бумажки, смоченные 1 %-ным спиртовым раствором кристаллвиолета и высушенные (метод Грама в модификации А.В. Синева). Окраску препарата проводят в течение 2…3 мин;
Фильтровальную бумагу снимают с мазка, краску сливают и наносят на мазок раствор Люголя на 2 мин;
Раствор Люголя сливают с мазка и обрабатывают 96 %-нам спиртом в течение 30…60 сек. Затем препарат промывают водой и подсушивают фильтровальной бумагой;
Мазок окрашивают красителем фуксином 2…3 мин, второй раз промывают водой и подсушивают фильтровальной бумагой.
Затем на стекло наносят каплю иммерсионного масла и рассматривают препарат с объективом х90 или х100 при максимальном освещении.
Б) Вегетативные клетки хорошо адсорбируют красители на своей поверхности и полностью окрашиваются. Оболочка споры малопроницаема, краски в них почти не проникают и под микроскопом споры имеют вид округлых или овальных блестящих зерен.
У бацилл размер споры не превышает ширину клетки и поэтому при образовании споры форма клетки не меняется.Споры овальные, не превышающие размер клетки, расположены центрально. Перитрихиальное расположение жгутиков, подвижная.
Корнюшкина Алина
Впорос 30
Объяснить принцип постановки несерологической реакции гемагглютинации для диагностики гриппа .Для чего ее используют ?Как оценить результат?
Ответ. Диагностика гриппа базируется на выявлении возрастания титра противогриппозных антител в динамике заболевания или на определении специфических иммуноглобулинов класса М.В процессе серологического исследования сывороток крови в РТГА используют их последовательные (начиная с 1:10) двукратные разведения на изотоническом растворе натрия хлорида, диагностикумы вирусов гриппа А(Н1N1), A(H3N2) и В в рабочем разведении 4 ГАЕ в 25 мкл, а также взвесь эритроцитов петуха или человека с группой крови 0 в концентрации 0,4-0,5% (соотношение объемов перечисленных компонентов РТГА 1:1:2). При отдельном определении антител класса М сыворотку крови больного предварительно разделяют на 2 порции, одну из которых сохраняют до постановки определенной серологической реакции, а другую обрабатывают для разрушения макроглобулинов класса М физическими или химическими методами. Один из них - прогревание порции сыворотки при 60 °С на протяжении 30 мин, второй - обработка порции сыворотки 2-меркаптоэтанолом. После этого обе порции исследуют в РТГА.
Используется для определения типа вируса гриппа (A или В) методом реакции торможения гемагглютинации;
Снижение титров противогриппозного антигемагглютинина в 4 и более раз в порции сыворотки, в которой предварительно разрушали иммуноглобулин, свидетельствует об их наличии в исследуемой сыворотке, что лабораторно подтверждает диагноз гриппа.
Корнюшкина Алина