VII. 1. 2. Дыхание

Дыхание – это окислительно-восстановительный процесс, сопровождающийся синтезом АТФ. Окисляемыми субстратами (донорами водорода/электронов) у бактерий могут быть как органические, так и неорганические соединения. Если в реакциях окисления конечным акцептором электронов служит молекулярный кислород, то такой тип дыхания называется аэробным, если терминальными акцепторами являются другие соединения (нитраты, сульфаты, карбонаты и др.) дыхание называют анаэробным.

VII. 1. 2.1. Аэробное дыхание

Аэробное дыхание – наиболее распространенный процесс получения энергии у микроорганизмов. Среди микроорганизмов есть как строгие, так и факультативные аэробы. Последние способны расти как в присутствии так и отсутствии кислорода.

В процессе аэробного дыхания происходит полное окисление субстрата, восстановление переносчиков (НАД · Н₂, НАДФ · Н₂, ФАД · Н₂), которые поступают в дыхательную цепь, функционирование которой приводит к запасанию энергии.

Базовым субстратом, который используют бактерии при дыхании и брожении является глюкоза. Многие реакции катаболизма глюкозы протекают у аэробных и анаэробных бактерий одинаково. Гликолиз доминирует у большинства микроорганизмов. Образовавшийся пируват полностью окисляется в циклическом процессе – цикле трикарбоновых кислот (ЦТК, цикле Кребса) (рис. 27).

ЦТК начинается с конденсации ацетил-КоА с молекулой щавелевоуксусной кислоты, катализируемой цитратсинтетазой. Продуктами реакции являются лимонная кислота и свободный кофермент А. Лимонная кислота с помощью фермента аконитазы последовательно превращается в цис-аконитовую и изолимонную кислоты. Последняя превращается в -кетоглутаровую кислоту в реакции, катализируемой изоцитратдегидрогеназой. На первом этапе реакции имеет место дегидрирование изолимонной кислоты, в результате которого образуется щавелевоянтарная кислота и НАД·Н₂. На втором этапе щавелевоянтарная кислота подвергается декарбоксилированию. Продукты реакции – -кетоглутаровая кислота и СО₂.

-Кетоглутаровая кислота подвергается далее окислительному декарбоксилированию, катализируемому -кетоглутаратдегидрогеназным комплексом, в результате чего образуется сукцинил-КоА. Из сукцинил-КоА образуется янтарная кислота под действием фермента сукцинилтиокиназы, в результате реакции энергия, освобождающаяся при разрыве тиоэфирной связи, запасается в фосфатной связи ГТФ. ГТФ затем отдает свою фосфатную группу молекуле АТФ, что приводит к образованию АТФ.

Янтарная кислота окисляется в фумаровую с помощью фермента сукцинатдегидрогеназы. Далее фумаровая кислота гидратируется под действием фермента фумаразы, в результате чего возникает яблочная кислота, которая подвергается дегидрированию, приводящему к образованию ЩУК. Реакция катализируется НАД-зависимой малатдегидрогеназой. Этой реакцией завершается ЦТК, так как вновь регенерируется молекула-акцептор (ЩУК), запускающая следующий оборот цикла. Однако поскольку из цикла происходит постоянный отток для биосинтезов промежуточных метаболитов, приводящих к понижению уровня ЩУК, возникает необходимость в ее дополнительном синтезе. Это обеспечивается как в реакциях карбоксилирования пирувата или фосфоенолпирувата, так и с помощью последовательности из двух реакций, получивших название глиоксилатного шунта (рис. 27). В первой из них изолимонная кислота под действием изоцитратлиазы расщепляется на янтарную и глиоксиловую кислоты. Во второй реакции, катализируемой малатсинтетазой, глиоксиловая кислота конденсируется с ацетил-КоА с образованием яблочной кислоты, превращающейся далее в ЩУК. В результате двух новых реакций происходит синтез С₄-кислоты из двух остатков С₂-остатков. Глиоксилатный шунт не работает при выращивании на субстратах, катаболизирование которых приводит к образованию пировиноградной кислоты. Он включается при выращивании организмов на С₂-соединениях.

Рис. 27. Цикл трикарбоновых кислот и глиоксилатный шунт:

Ф₁ – цитратсинтетаза; Ф₂ – аконитаза; Ф₃ – изоцитратдегидрогеназа; Ф₄ – α-кетоглутаратдегидрогеназа; Ф₅ – сукцинилтиокиназа; Ф₆ – сукцинатдегидрогеназа; Ф₇ – фумараза; Ф₈ – малатдегидрогеназа; Ф₉ – изоцитралиаза; Ф₁₀ – малатсинтетаза. Пунктирными линиями изображены реакции глиоксилатного шунта

Субстратами, перерабатываемыми в ЦТК, могут быть, помимо углеводов, и жирные кислоты (после предварительной деградации до ацетил-КоА), а также многие аминокислоты (после удаления аминогруппы в реакциях дезаминирования и переаминирования). В результате одного оборота цикла происхдят два декарбоксилирования, четыре дегидрирования, одно фосфорилирование. Итогом является образование двух молекул СО₂, трех молекул НАД · Н₂, одной молекулы ФАД · Н₂.

ЦТК имеет важное значение не только для дыхания, но и для биосинтеза. Образующиеся в ЦТК соединения могут трансформироваться в аминокислоты, жиры, углеводы и становиться частью структуры клетки.

Электроны с восстановленных переносчиков НАД · Н₂, ФАД · Н₂ поступают в дыхательную цепь, локализованную в цитоплазматической мембране. Дыхательные электротранспортные цепи микроорганизмов состоят, подобно дыхательным цепям митохондрий, из большого числа переносчиков электронов и протонов. У разных групп бактерий дыхательные цепи различаются по составу переносчиков (рис. 28).

Рис. 28. Дыхательные цепи Azotobacter vinelandii (A), Micrococcus lysodeikticus (Б), Escherichia coli (B) в аэробных (1), микроаэрофильных (2) и анаэробных условиях (3)

Фп – флавопротеин; FeS – железосероцентр; УБ – убихинон; МХ – менахинон; ФР – фумаратредуктаза; b, c, d, o, a – цитохромы

Согласно хемиосмотической теории П. Митчелла в дыхательной цепи происходит сопряжение электронного транспорта с фосфорилированием (рис. 29). Электроны, поступив на дыхательную цепь, проходят ряд этапов и акцептируются конечным акцептором. Мембрана непроницаема для протонов, однако в ней есть три участка, где происходит выделение протонов во внешнюю среду (первый участок расположен в начале дыхательной цепи и связан с функционированием НАД (Ф)·Н₂-егидрогеназы; второй – определяется способностью убихинона переносить водород; третий локализован в конце дыхательной цепи и связан с активностью цитохромоксидазы). Вывод протонов ведет к созданию между наружной и внутренней сторонами мембраны трансмембранного электрохимического градиента, или протонного потенциала, энергия которого идет на синтез АТФ.

Рис. 29. Дыхательная цепь митохондрий:

ФМН – простетическая группа НАД · Н₂-дегидрогеназы;

ФАД – простетическая группа сукцинатдегидрогеназы;

FeS – железосодержащий белок; b, c₁,c , a, a₃ – цитохромы

Полное окисление одной молекулы глюкозы приводит к образованию 38 молекул АТФ. Две молекулы АТФ образуются в процессе гликолиза, две – в ЦТК. Перенос каждой пары электронов с НАД · Н₂ приводит к синтезу 30 молекул АТФ (2 молекулы НАД · Н₂ дает процесс гликолиза, 2 молекулы НАД · Н₂ – окислительное декарбоксилирование пирувата, 6 молекул НАД · Н₂ – ЦТК). Перенос каждой пары электронов с ФАД · Н₂ приводит к синтезу 2 молекул АТФ, при двух оборотах – 4 молекулы АТФ.