
- •Введение 6
- •1 Аналитический обзор
- •1.1 Характеристика энтомопатогенного гриба Verticillium lecanii
- •1.2 Характеристика отряда Homoptera (равнокрылые)
- •1.2.1 Семейство Aleyrodinea – белокрылки
- •1.3 Инфицирование и развитие микозов
- •1.4 Изучение процесса патогенеза с помощью электронной
- •1.5 Факторы, влияющие на процесс патогенеза
- •1.6 Влияние ультрафиолетового облучения
- •1.7 Разработка препаративных форм биоинсектицидов на основе спор энтомопатогенных грибов
- •2 Цели и задачи исследования
- •3 Экспериментальная часть
- •3.1 Объекты исследования
- •3.1.1 Культура гриба Verticillium lecanii
- •3.2 Материалы и методы
- •3.2.1 Питательные среды
- •3.2.2 Культивирование гриба Verticillium lecanii
- •3.2.3 Определение титра спор
- •3.2.4 Получение образца биопрепарата гриба
- •Verticillium lecanii на ферментационной установке
- •3.2.5 Получение препаративных форм
- •3.2.6 Определение жизнеспособности спор гриба
- •3.2.7 Определение вирулентности препаративных
- •3.2.8 Определение вирулентности препаративных
- •3.2.9 Определение биологической эффективности
- •3.2.10 Изучение процесса патогенеза с помощью
- •3.2.11 Изучение влияния уф-излучения на
- •3.2.12 Изучение влияния уф-облучения на
- •3.3 Статистическая обработка результатов
- •4 Результаты исследований и их обсуждение
- •4.1 Результаты оценки влияния добавок к препаративным формам на жизнеспособность спор гриба Verticillium lecanii
- •4.2 Результаты опыта по изучению биологической
- •4.3 Результаты оценки влияния уф-излучения
- •4.4 Результаты опыта по изучению влияния уф-облучения
- •4.5 Результаты опыта по изучению процесса патогенеза с помощью электронной сканирующей и световой микроскопии
- •5 Выводы
- •Технико-экономическая оценка результатов исследования
- •Б.2 Расчет затрат на проведение исследовательской работы
- •В.3.2 Основные правила безопасности работы в лаборатории При работе с едкими веществами:
Б.2 Расчет затрат на проведение исследовательской работы
Затраты на проведение данной работы состоят только из текущих затрат, так как для ее выполнения не требуется приобретения специального оборудования и приборов. Работа проводилась в рамках лабораторных исследований.
В состав текущих затрат включаются затраты на сырье, материалы, реактивы, различные виды энергии, заработная плата руководителя и консультантов, других привлеченных лиц; лабораторная посуда и приборы, амортизационные отчисления от стоимости лабораторного оборудования и приборов, общеинститутские накладные расходы [36].
Стоимость энергии, технической воды, а также зарплата консультантов взяты по данным лаборатории микробиологической защиты растений для условий НИИ ВИЗР. Амортизационные отчисления на реновацию оборудования и приборов, используемых в работе, определялись исходя из балансовой стоимости этого оборудования и времени его использования на выполнение данной работы.
Б.2.1 Затраты на сырье, материалы и реактивы
Общее количество затрат на сырье, материалы и реактивы определяется следующим образом:
Зм= ∑Рi×Цi , (Б.1)
где Цi - планово – заготовительная цена i-го вида ресурсов, руб.;
Рi – расход i-го вида материальных ресурсов, натуральные единицы.
Для определения общей суммы затрат на сырье, материалы и реактивы составлена таблица Б.1.
Таблица Б.1 – Затраты на сырьё, материалы и реактивы
Наименова- ние |
Техни-ческая характе-ристика |
Едини-цы измере- ния
|
Израсходован- ное количество, натур. единиц |
Цена за единицу, руб. |
Сумма затрат, руб |
Агар-агар |
имп |
кг |
0,088 |
3159,45 |
278,03 |
Пептон |
имп |
кг |
0,030 |
2601,90 |
78,06 |
Дрожжевой экстракт |
имп |
кг |
0,006 |
655,07 |
3,93 |
Глюкоза |
имп |
кг |
0,060 |
140,00 |
8,40 |
Сахароза |
имп |
кг |
0,088 |
238,36 |
20,98 |
Лецитин |
|
кг |
0,020 |
143,00 |
2,86 |
Крахмал картофельный |
|
кг |
0,080 |
23,50 |
1,88 |
Вазелин |
|
кг |
0,001 |
83,00 |
0,083 |
Полиакрил- амидный гель |
|
кг |
0,005 |
22,00 |
0,11 |
Аэросил |
|
кг |
0,060 |
260 |
15,60 |
Борная кислота |
|
кг |
0,001 |
158,00 |
0,158 |
Стрептомицин |
|
г |
1 |
8,5 |
8,5 |
Ампициллин |
|
г |
1 |
12,63 |
12,63 |
Гентамицин |
|
мл |
2 |
16,115 |
32,23 |
Ледяная уксусная кислота |
|
л |
0,005 |
175,33 |
0,88 |
Хлороформ |
|
л |
0,015 |
137,53 |
2,06 |
Продолжение таблицы Б.1 |
|||||
Наименова- ние |
Техни-ческая характе-ристика |
Едини-цы измере- ния
|
Израсходован- ное количество, натур. единиц |
Цена за единицу, руб. |
Сумма затрат, руб |
Этанол |
|
л |
0,100 |
74,00 |
7,40 |
Каолин |
|
кг |
0,005 |
18,00 |
0,09 |
Диоксид титана |
имп |
кг |
0,010 |
159,60 |
1,596 |
Активирован-ный уголь |
|
г |
5 |
22,12 |
110,60 |
Твин 80 |
|
л |
0,005 |
73,00 |
0,365 |
Тритон Х-100 |
|
л |
0,010 |
20,70 |
0,207 |
Глицерин |
чда |
л |
0,006 |
45,00 |
0,27 |
Растительное масло |
|
л |
0,042 |
49,00 |
2,058 |
Глюконат натрия |
|
г |
0,400 |
24,00 |
9,600 |
Семена в пакетах |
|
шт |
10 |
5 |
50 |
Земля |
|
кг |
6 |
10 |
60 |
Фасоль |
|
кг |
20 |
1 |
20 |
Фильтры бумажные |
|
шт |
10 |
3 |
30 |
Бумага фильтровальная
|
|
шт |
69,52 |
1 |
69,52 |
Вата |
|
шт |
15 |
1 |
15 |
Марля |
|
шт |
15 |
1 |
15 |
Средства для мытья посуды |
|
шт |
25 |
2 |
50 |
Средства для мытья посуды |
|
шт |
25 |
2 |
50 |
Продолжение таблицы Б.1 |
|||||
Наименова- ние |
Техни-ческая характе-ристика |
Едини-цы измере- ния
|
Израсходован- ное количество, натур. единиц |
Цена за единицу, руб. |
Сумма затрат, руб |
Итого |
|
|
|
|
908,097 |
Б.2.2 Энергетические затраты
В составе энергетических затрат определяются затраты на электроэнергию, воду, пар, газ израсходованные при выполнении исследований на технологические нужды [37].
Суммарные затраты на электроэнергию определялись следующим образом:
Зм =М×Ки×Т×Ц, (Б.2)
где М – паспортная мощность электроприборов, кВт;
Ки – коэффициент используемой мощности, равный 0,8;
Ц – цена за 1 кВт×ч электроэнергии, руб. (Ц = 1,15);
Т – время работы оборудования в часах за весь период.
Расчет затрат на электроэнергию приведен в таблице Б.2.
Таблица Б.2 – Затраты на электроэнергию
Наименование |
Количество, шт. |
Мощность, кВт |
Время работы, час |
Затраты, руб. |
Автоклав |
1 |
6 |
10 |
55,2 |
Микроскоп |
1 |
0,1 |
2 |
0,184 |
Весы электронные |
1 |
0,11 |
1 |
0,1 |
Термостат |
1 |
0,18 |
600 |
99,36 |
Микроволновая печь |
1 |
1,5 |
5 |
6,9 |
Ламинар |
1 |
0,3 |
50 |
13,8 |
Орбитальная качалка |
1 |
1,2 |
3 |
1,3 |
Сушильный шкаф |
1 |
2,0 |
50 |
92 |
Насос |
1 |
5,5 |
3 |
15,18 |
Холодильник |
1 |
0,13 |
2000 |
239,2 |
Итого |
|
|
|
523,85 |
Таблица Б.3– Расчет затрат на воду и газ
Наименование |
Единицы измерения |
Количество |
Цена, руб. |
Сумма, руб. |
Вода холодная водопроводная |
м3 |
30 |
10,3 |
309 |
Газ |
м3 |
20 |
15,73 |
314,6 |
Итого |
|
|
|
623,6 |
Б.2.3 Затраты на основную и дополнительную заработную плату
Основная зарплата руководителя дипломной работы (ЗПрук) и рецензента (ЗПрец) определяется исходя из установленных норм затраты их рабочего времени в часах на одну дипломную работу и их среднечасовой заработной платы.
Заработная плата рассчитывается по формуле:
ЗП = Дс×Т, |
(Б.3) |
где ЗП – заработная плата, руб;
Дс – среднечасовой доход, ч
Т - продолжительность работы, ч
Расчеты приведены в таблице Б.4.
Под отчислениями понимают:
1 отчисления в Пенсионный фонд Российской Федерации – 26%;
2 отчисления в Фонд социального страхования Российской Федерации – 2,9%;
3 отчисления в Фонды обязательного медицинского страхования — 5,1%.
Итого: 34%.
Таблица Б.4 – Затраты на основную и дополнительную заработную плату
Наименование затрат |
Среднечасовая заработная плата, руб. |
Количество затраченного времени, час |
Сумма, руб. |
|
Зарплата исполнителя |
- |
- |
4000 |
|
Зарплата руководителя |
76 |
50 |
3800 |
|
Зарплата консультанта по экономике |
100 |
2 |
200 |
|
Зарплата консультанта по охране труда |
100 |
2 |
200 |
|
Зарплата рецензента |
72
|
3 |
216
|
|
Продолжение таблицы Б.4 |
||||
Наименование затрат |
Среднечасовая заработная плата, руб. |
Количество затраченного времени, час |
Сумма, руб. |
|
Итого основная заработная плата |
|
|
8416 |
|
Отчисления |
|
|
2861,44 |
|
Итого |
|
|
11277,44 |
Б.2.4 Затраты на стеклянную посуду
Затраты на стеклянную посуду определяются в зависимости от вида, ёмкости и цен на неё. Цены были взяты в лаборатории микробиологической защиты растений НИИ ВИЗР.
После завершения исследований посуда сдаётся в лабораторию, поэтому в состав затрат включается не её стоимость, а амортизационные отчисления, которые принимаются в размере 50% от стоимости стеклянной посуды.
Расчет затрат на стеклянную посуду приведен в таблице Б.5.
Таблица Б.5 – Расчет затрат на стеклянную посуду и приборы
Наименование |
Единицы измерения |
Количество |
Цена, руб. |
Сумма, руб. |
||||
Колба вместимостью 250 мл |
шт |
15 |
19 |
285 |
||||
Бюксы для хранения веществ |
шт |
15 |
10 |
150 |
||||
Колба вместимостью 100мл |
шт |
10 |
14 |
140 |
||||
Пипетка-дозатор |
шт |
1 |
3000 |
3000 |
||||
Пробирки |
шт |
30 |
5 |
150 |
||||
Стекло покровное |
шт |
10 |
1,18 |
11,8
|
||||
Продолжение таблицы Б.5 |
||||||||
Наименование |
Единицы измерения |
Количество |
Цена, руб. |
Сумма, руб. |
||||
Камера Горяева |
шт |
1 |
165 |
165 |
||||
Цилиндр вместимостью 500 мл |
шт |
1 |
224 |
224 |
||||
Цилиндр вместимостью 50 мл |
шт |
1 |
15,5 |
15,5 |
||||
Ламповое стекло (фонарь) |
шт |
12 |
12,6 |
151,2 |
||||
Чашки Петри ГОСТ 25-336 |
шт |
30 |
20 |
500 |
||||
Горшок пластиковый |
шт |
10 |
4,5 |
45 |
||||
Пульверизатор ручной с грушей, 15 мл. |
шт |
1 |
15 |
15 |
||||
Контейнер пластиковый |
шт |
1 |
40 |
40 |
||||
Пинцет 10 см |
шт |
1 |
45 |
45 |
||||
Пинцет 15 см |
шт |
1 |
100 |
100 |
||||
Бур |
шт |
1 |
200 |
200
|
||||
Шпатель микробиологический |
шт |
1 |
56,64 |
56,64 |
||||
Петля микробиологическая |
шт |
2 |
64 |
128 |
||||
Итого |
|
|
|
4997,2 |
||||
Амортизационные отчисления (50%) |
|
|
|
2498,6 |
Б.2.5 Амортизационные отчисления
Амортизационные отчисления вычисляются по формуле:
где Ф – стоимость приборов и оборудования;
Н – норма амортизации;
Т – время использования оборудования.
Для расчета амортизационных отчислений составлена таблица Б.6
Таблица Б.6 – Амортизационные отчисления на оборудование
Наименование |
Ф, руб. |
Н,% |
Т, мес. |
А, руб. |
Весы электронные |
28000 |
4 |
4 |
373 |
Автоклав |
39000 |
6 |
4 |
780 |
Термостат |
11910 |
10 |
4 |
397 |
Микроскоп бинокулярный |
22300 |
10 |
5 |
557,5 |
Ламинар |
30000 |
10 |
4 |
500 |
Орбитальная качалка |
17000 |
7 |
4 |
396 |
Микроволновая печь |
4000 |
10 |
6 |
200 |
Сушильный шкаф |
29500 |
6 |
4 |
590 |
Насос |
7600 |
7 |
4 |
177 |
рН – метр |
5616 |
4 |
4 |
75 |
Итого |
|
|
|
4045,5 |
Б.2.6 Накладные расходы
Накладные расходы, включающие затраты на содержание учебно-вспомогательного и административно-управленческого персонала, на отопление, содержание зданий и т. д. принимаются в размере 30% от суммы прямых затрат [38]:
Нр = 0,3×Пз. |
(Б.5) |
Б.2.7 Общая смета затрат на проведение НИР
Общая смета затрат на проведение НИР приведена в таблице Б.7.
Таблица Б.7 – Смета затрат на проведение НИР
Наименование статей и расходов |
Сумма, руб. |
Удельный вес статей в сумме затрат,% |
а) электроэнергия б) вода и газ |
908,097 523,85 623,6 |
3,122
1,801 2,144
|
Итого |
2055,547 |
7,067 |
а) исполнитель б) руководитель в) рецензент г) консультанты 4. Отчисления |
4000 3800 216 400 2861,44 |
13,751 13,064 0,743 1,375 9,837
|
Итого |
11277,44 |
38,770 |
5. Стеклянная посуда 6. Амортизационные отчисления |
4997,2 4045,5 |
17,179 13,908 |
Итого |
9042,7 |
31,087 |
7. Итого прямых затрат 8. Накладные расходы |
22375,687 6712,706 |
76,924 23,077 |
Всего затрат |
29088,393 |
100 |
Б.2.8 Определение цены НИР
Цена НИР определяется по формуле:
ЦНИР = ЗНИР ×(1 +Р/100), |
(Б.6)
|
где ЦНИР - цена НИР, руб;
ЗНИР - затраты на выполнение НИР, руб;
Р - уровень рентабельности (принимается в размере 20%);
Таким образом:
ЦНИР = 29088,393×(1+20/100) = 34906,072 руб
Б.3 Выводы
В результате установлено, что затраты на проведение дипломной работы составляют 34906,072 руб. при уровне рентабельности 20%. Основные результаты исследований и расчет затрат на проведение работы направлены на изучение эффективности инсектицида на основе бластоспор Verticillium lecanii в отношении оранжерейной белокрылки. По полученным результатам можно сделать вывод о целесообразности проведенных исследований.
ПРИЛОЖЕНИЕ В
(обязательное)
Охрана труда и окружающей среды
Дипломная работа была проведена в лаборатории микробиологической защиты растений Государственного Научного Учреждения Всероссийского Научно-исследовательского Института Защиты Растений Российской Академии Наук (ГНУ ВИЗР РАН). Данная работа посвящена изучению эффективности новых препаративных форм биоинсектицида на основе бластоспор энтомопатогенного гриба Verticillium lecanii.
В.1 Основные опасные и вредные факторы
При работе в лаборатории существует возможность появления опасных и вредных производственных факторов. В лаборатории встречаются все четыре класса: физические, химические, биологические и психофизиологические [39].
Группа физических факторов включает в себя ультрафиолетовое излучение, открытое пламя газовой горелки, электрический ток, использование стеклянной посуды, работа с лабораторным оборудованием, отсутствие или недостаток естественного света.
Группа химических факторов представляет собой вредные воздействия химических веществ, действие озона после облучения ламинара. Сведения о химических веществах, используемых в работе и оказывающих вредное воздействие на человека, представлены в таблице В.1 [40].
По характеру воздействия на организм различают: токсичные, раздражающие, канцерогенные, мутагенные, влияющие на репродуктивную функцию. Пути проникновения в организм – через органы дыхания, желудочно-кишечный тракт, кожные покровы и слизистые оболочки.
К биологическим факторам относятся патогенные микроорганизм (бактерии, вирусы, риккетсии, спирохеты, грибы, простейшие) и продукты их жизнедеятельности. В данной работе биологически опасные и вредные факторы отсутствуют, так как используемые микроорганизмы являются непатогенными [41].
Психофизиологические факторы включают физические перегрузки (статические, динамические), нервно-психологические (умственное перенапряжение, перенапряжение анализаторов, монотонность труда, эмоциональные перегрузки).
ГОСТ 12.1.007-76
СанПиН 2.1.4.1074-01
Таблица В.1 – Характеристика физико-химических, пожаровзрывоопасных и токсичных свойств сырья, готового продукта и отходов производства
Вещества |
Физико-химические свойства |
Пожаровзрывоопасные свойства |
Токсичные свойства |
Классификация опасности |
ПДК, мг/куб.м |
||||||||||||||||||||
Агрегатное состояние |
Температура кипения, °С |
Температура плавления, °С |
Плотность, Кг/куб.см |
Темпера-тура, °С |
Предел распространения пламени |
||||||||||||||||||||
Вспышки |
Самовоспла-менения |
Температура, °С |
Концентрация,% |
||||||||||||||||||||||
Нижний |
Верхний |
Нижний |
Верхний |
||||||||||||||||||||||
Спирт этиловый |
ж |
78.3 |
-114 |
789,3 |
13 |
365 |
11 |
41 |
3,6 |
17,7 |
Действие на ЦНС |
IV |
1000 |
||||||||||||
Хлороформ |
ж |
61,2 |
−63,5 |
1483 |
Не горит |
Действие на ЦНС и внутренние органы |
II |
20 |
|||||||||||||||||
Едкий натр |
тв |
1378 |
320 |
2130 |
Не горит |
Прижигает ткани |
II |
0,5 |
|||||||||||||||||
Ледяная уксусная кислота |
ж |
118,1 |
16,75 |
1049 |
38 |
454 |
35 |
76 |
3,3 |
22 |
Прижигает ткани, действует на верхние дыхатель-ные пути |
III |
5 |
||||||||||||
Борная кислота |
тв |
- |
171 |
1435 |
Не горит |
Раздражает кожу, при-жигает ткани |
III |
0,02 |
|||||||||||||||||
Продолжение таблицы В.1 |
|||||||||||||||||||||||||
Вещества |
Физико-химические свойства |
Пожаровзрывоопасные свойства |
Токсичные свойства |
Классификация опасности |
ПДК, мг/куб.м |
||||||||||||||||||||
Агрегатное состояние |
Температура кипения, °С |
Температура плавления, °С |
Плотность, Кг/куб.см |
Темпера-тура, °С |
Предел распространения пламени |
||||||||||||||||||||
Вспышки |
Самовоспла-менения |
Температура, °С |
Концентрация,% |
||||||||||||||||||||||
Нижний |
Верхний |
Нижний |
Верхний |
||||||||||||||||||||||
Диоксид титана |
тв |
- |
- |
2600 |
Не горит |
Пылит |
|
10 |
|||||||||||||||||
Аэросил (коллоидный диоксид кремния) |
тв |
- |
- |
2150 |
Не горит |
Пылит |
|
|
В.2 Характеристика помещения для проведения НИР
В соответствии с НПБ 105-95 помещение (лаборатория) относится к категории В-1(q>2200 МДж/м2), то есть пожароопасное помещение, где находятся горючие и трудногорючие жидкости, вещества и материалы, способные при взаимодействии с водой, с кислородом воздуха или друг с другом воспламеняться и гореть [42].
В помещении выделяется зона взрывоопасности В1б по ПУЭ, то есть зона, расположенная в помещениях, в которых при нормальной эксплуатации не образуется взрывоопасных смесей, где горючие газы и ЛВЖ имеются в небольших количествах. Эти зоны не относятся к взрывоопасным, если работа с горючими газами и ЛВЖ проводится в вытяжных шкафах. На случай возникновения пожара, лаборатория снабжена средствами пожаротушения: огнетушители марки ОУ-5(углекислотный) и специальными ящиками для легковоспламеняющихся жидкостей, асбестовыми одеялами и ящиками с песком.
По задачам зрительной работы помещение относится к группе I – работа средней точности. Разряд и подразряд зрительной работы – IV-В, так как наименьший размер объекта составляет (0,5-1) мм.
Искусственное освещение создается газоразрядными лампами. Рабочее место освещается отдельно. Освещение искусственное, комбинированное, норма 200 лк.
Естественное освещение осуществляется через оконные проемы, расположенные сбоку от рабочего места. Оно составляет около 15% от общего освещения [43].
В помещении лаборатории имеется вытяжная вентиляция: вытяжной шкаф, вытяжная труба. Скорость движения воздуха в рабочем проеме вытяжного шкафа составляет 0,65 м/с (скорость по норме 0,7 м/с), что обеспечивает безопасность работы с опасными веществами [44].
Для микробиологических исследований имеются специальные биологические столы с покрытием, легко подвергаются дезинфекции, термостаты и холодильники. Обязательным условием является чистота помещения. Для работы в условиях максимальной стерильности в микробиологических лабораториях устанавливаются специальные ламинарные шкафы площадью не менее 2 м2. Стерильность в них обеспечивается облучением УФ-лампами, которые включаются на (20-40) минут перед началом работы. Нахождение людей в близи облучаемого ламинара недопустимо, так как облучение приводит к тяжелым ожогам глаз и открытых поверхностей кожи.
Пробирки и колбы со средой, на которой выращиваются микроорганизмы, закрываются ватными пробками с бумажными колпаками, которые служат фильтром для воздуха и предотвращают попадание микроорганизмов в окружающую среду и наоборот. Во всех помещениях лаборатории имеются бутыли с дезинфицирующим раствором.
Лаборатория снабжена аптечкой для оказания первой помощи. Аптечка содержит следующие медикаменты:
1 5% раствор йода;
2 нашатырный спирт;
3 пищевая сода;
4 раствор лимонной кислоты;
5 перевязочные материалы;
6 клей БФ-6.
В.3.1 Перечень инструкций по технике безопасности, используемых для выполнения работы
1 Инструкция по технике безопасности при проведении работ в лаборатории микробиологии № 415;
2 Инструкция по охране труда и технике безопасности при эксплуатации электроприборов и электроустановок и оказание первой помощи пораженным электрическим током № 409;
3 Инструкция по технике безопасности при работе на автоклаве № 416;
4 Инструкция по охране труда для операторов ПЭВМ № 413;
5 Инструкция по технике безопасности при работе со стеклянной химической посудой и ампулами № 411;
6 Инструкция по технике безопасности при работе в биохимических лабораториях;
7 Инструкция по технике безопасности при работе с органическими растворителями (ацетон, толуол, бензол, уксусная кислота, диоксан, хлороформ, четыреххлористый углерод, этиловый, амиловый и другие спирты) № 412;
8 Инструкция по охране труда при работе с едкими веществами (щелочи, аммиачная вода, хлориды серы и фосфора, хлорангидриды кислот) № 414.