
- •Введение 6
- •1 Аналитический обзор
- •1.1 Характеристика энтомопатогенного гриба Verticillium lecanii
- •1.2 Характеристика отряда Homoptera (равнокрылые)
- •1.2.1 Семейство Aleyrodinea – белокрылки
- •1.3 Инфицирование и развитие микозов
- •1.4 Изучение процесса патогенеза с помощью электронной
- •1.5 Факторы, влияющие на процесс патогенеза
- •1.6 Влияние ультрафиолетового облучения
- •1.7 Разработка препаративных форм биоинсектицидов на основе спор энтомопатогенных грибов
- •2 Цели и задачи исследования
- •3 Экспериментальная часть
- •3.1 Объекты исследования
- •3.1.1 Культура гриба Verticillium lecanii
- •3.2 Материалы и методы
- •3.2.1 Питательные среды
- •3.2.2 Культивирование гриба Verticillium lecanii
- •3.2.3 Определение титра спор
- •3.2.4 Получение образца биопрепарата гриба
- •Verticillium lecanii на ферментационной установке
- •3.2.5 Получение препаративных форм
- •3.2.6 Определение жизнеспособности спор гриба
- •3.2.7 Определение вирулентности препаративных
- •3.2.8 Определение вирулентности препаративных
- •3.2.9 Определение биологической эффективности
- •3.2.10 Изучение процесса патогенеза с помощью
- •3.2.11 Изучение влияния уф-излучения на
- •3.2.12 Изучение влияния уф-облучения на
- •3.3 Статистическая обработка результатов
- •4 Результаты исследований и их обсуждение
- •4.1 Результаты оценки влияния добавок к препаративным формам на жизнеспособность спор гриба Verticillium lecanii
- •4.2 Результаты опыта по изучению биологической
- •4.3 Результаты оценки влияния уф-излучения
- •4.4 Результаты опыта по изучению влияния уф-облучения
- •4.5 Результаты опыта по изучению процесса патогенеза с помощью электронной сканирующей и световой микроскопии
- •5 Выводы
- •Технико-экономическая оценка результатов исследования
- •Б.2 Расчет затрат на проведение исследовательской работы
- •В.3.2 Основные правила безопасности работы в лаборатории При работе с едкими веществами:
1 Аналитический обзор
1.1 Характеристика энтомопатогенного гриба Verticillium lecanii
В соответствии с классической систематикой грибов вид Verticillium lecanii (Zimmermann) Viegas относят к классу дейтеромицетов, порядку гифомицетов, семейству Moniliaceae и роду Verticillium. Но поскольку класс несовершенных грибов – это формальный таксон, то на сегодняшний момент его не «выносят» в отдельный класс. Согласно современной концепции, данный вид гриба относится к классу аскомицетов Ascomycota. Благодаря исследованиям в области молекулярной генетики было выявлено, что многие виды сапрофитных, фито-, энтомо-, нематопатогенных и микофильных грибов, которые условно объединяли в род Verticillium, имеют мало общих признаков, позволяющих относить их к единому роду. А вид Verticillium lecanii, считавшийся продуцентом биопрепарата вертициллин, утратил это привычное название и был «раздроблен» на несколько видов. Типовой вид Lecanicillium lecanii (Zimm.) Zare et W.Gams – патоген кокцид и не имеет никакого отношения к другим насекомым. Его половая стадия – Torrubiella confragosa Mains (Ascomycota, Clavicipitales). Штаммы прежнего Verticillium lecanii, отличающиеся крупными конидиями и довольно высокой специфичностью в отношении тлей, отнесены к виду Lecanicillium longisporum (Petch) Zare et W.Gans, половая стадия неизвестна. А на белокрылке в основном встречается вид, получивший название Lecanicillium muscarium (Petch) Zare et W.Gans, и он может поражать также тлей, трипсов, гусениц чешуекрылых, клещей и даже паразитировать на ржавчинных и мучнисторосяных грибах, телеоморфа неизвестна [2].
На агаризованной среде Чапека через 12 дней роста при (24-27) оС вырастают пушистые, белые, грязновато-кремовые или желтоватые колонии диаметром (3-4) см в соответствии с рисунком 1. Часто на них образуются тяжи воздушного мицелия. Нижняя сторона колонии обычно желтоватая. Гифы септированные, слаборазветвленные, толщиной (1,5-2,5) мкм, несут конидиеносцы длиной до 200 мкм в виде боковых веточек с мутовками из 2-5 фиалид (12-40)×2 мкм в соответствии с рисунком 1. Иногда фиалиды одиночные, могут отходить непосредственно от гиф мицелия. Конидии бесцветные, узко-овальные или продолговатые с закругленными концами (2,5-2,9) мкм, собраны по 5-7 штук в склеенные слизью шаровидные головки диаметром до 30 мкм в соответствии с рисунком 1. Конидии или бластоспоры, попав на кутикулу насекомого, в благоприятных условиях прорастают и образуют ростовые гифы, которые внедряются в его тело. Внутри гифы распадаются на гифальные тела, которые постепенно заполняют внутренние органы. Гибель насекомого происходит из-за токсикоза и истощения. На трупах при высокой влажности образуется дочернее поколение конидий в соответствии с рисунком 2.
Препараты, разработанные на основе Verticillium lecanii, успешно применялись и были зарегистрированы до 2003 года. Среди них: Вертицилин БЛ+зерновой, производимый на основе конидий глубинно-поверхностным способом, Вертицилин Ж (жидкий), СХП (порошок), и Г (гранулы), получаемый глубинным культивированием, при этом образуются бластоспоры [3].
Рисунок 1 – Культура гриба и конидиеносец с конидиями гриба Verticillium lecani
Рисунок 2 – Микоз личинки оранжерейной белокрылки