3.2.12 Изучение влияния уф-облучения на

вирулентность препаративных форм

Влияние УФ-облучения на вирулентность препаративных форм оценивали с помощью опыта на белокрылке. Листья предварительно выращенной гидропонно и зараженной белокрылкой фасоли раскладывали на чашки с влажной ватой. В качестве исследуемой препаративной формы использовали пасту ЛПФ, испытывали УФ-протекторы – активированный уголь, каолин и диоксид титана. Готовили суспензию спор с титром 5×10⁶ спор/мл и добавляли УФ-протекторы в количестве 5% от общего объема. Полученной суспензией обрабатывали листья с известной численностью особей белокрылки. Часть чашек оставляли необработанными в качестве контроля. Опыт содержал варианты без облучения и варианты с облучением. Облучение вели в течение 1 минуты лампой с энергетической освещенностью 15200 Вт/м². Через 4 суток и 7 суток после обработки подсчитывали количество живых и микозных личинок белокрылки. О результатах опыта судили по биологической эффективности (формула 3) и проценту микозов (отношение численности микозных личинок к численности личинок до обработки) [26].

3.3 Статистическая обработка результатов

Все опыты (определение титра спор образцов, жизнеспособности спор гриба и вирулентности биопрепарата) проводились в 3-х повторностях. Определение вирулентности препаративных форм в вегетационных опытах выполнялось в пяти повторностях для каждого варианта, а в производственных опытах – в 20 повторностях. Для проведения статистической обработки использовалась программа Microsoft Excel для расчета среднего значения, стандартного отклонения и ошибки среднего. В формуле 4 представлен расчет среднего арифметического:

,

(4)

где – среднее арифметическое;

– объём выборки;

– сумма вариантов или значений признака.

В формуле 5 представлен расчет стандартного отклонения:

,

(5)

где – стандартное отклонение;

– i-й элемент выборки;

– среднее арифметическое;

– объём выборки.

В формуле 6 представлен расчет ошибки среднего:

m = ±(S/n1/2),

(6)

где m – ошибка среднего;

– стандартное отклонение;

– объём выборки.

4 Результаты исследований и их обсуждение

4.1 Результаты оценки влияния добавок к препаративным формам на жизнеспособность спор гриба Verticillium lecanii

Для получения опытных образцов препаративных форм был получен концентрат биомассы гриба. Титр спор в культуральной жидкости составил 9,2×10⁹ спор/мл, после фильтрации 9,3×10¹⁰ спор/г. Пасты готовили на основе стандартной (ЛПФ). В качестве новых добавок использовали антибиотики: гентамицин и ампициллин вместо стрептомицина, а также технический лецитин вместо пищевого. В результате были получены следующие образцы препаративных форм: лецитиновая препаративная форма со стрептомицином (ЛПФ ст.), лецитиновая препаративная форма с ампициллином (ЛПФ амп.), лецитиновая препаративная форма с гентамицином (ЛПФ гент.), лецитиновая препаративная форма с техническим лецитином и стрептомицином (ЛПФ техн., ст.), лецитиновая препаративная форма с техническим лецитином и ампициллином (ЛПФ техн., амп.), лецитиновая препаративная форма с техническим лецитином и гентамицином (ЛПФ техн., гент.) [32]. В качестве контроля использовали свежие бластоспоры гриба без добавок. В таблице 3 представлено количество компонентов для каждой пасты. Влияние добавок на жизнеспособность спор гриба оценивали с помощью метода предельных разведений. Опыт проводили для ЛПФ, ВПФ, ППФ и СП через 1 неделю, месяц и 2 месяца после изготовления, для препаративных форм с техническим лецитином, ампициллином и гентамицином через 2 недели, 1 и 2 два месяца после изготовления. Результаты этого опыта находятся в таблице 4 и таблице 5.

Таблица 3 – Компонентный состав новых образцов препаративных форм

Компонент	ЛПФст	ЛПФамп	ЛПФген	ЛПФт,ст	ЛПФт, ген	ЛПФт, амп
Лецитин, г	1	1	1	–	–
Лецитин технический, г	–	–	–	1	1	1
Крахмал, 7,5%, мл	10	10	10	10	10	10
Борная кислота, 1%, мл	10	10	10	10	10	10
Гентамицин, 0,5%, мл	–	–	0,1	–	0,1	–
Стрептомицин, 0,5%, мл 0,5 %, мл	0,1	–	–	0,1	–	–
Ампициллин, 0,5%, мл	–	0,1	–	–	–	0,1
Биомасса, г	10	10	10	10	10	10

По данным таблицы 4 можно сказать о том, что в целом внесение добавок к биомассе гриба Verticillium lecanii положительно влияет на прорастание спор, так как титр спор в контроле существенно ниже, чем в пастах (примерно в 2 раза).Наилучшей добавкой-прилипателем является лецитин, поскольку титр спор для пасты, содержащей его, максимален (1,86×10⁹).

Таблица 4 – Титр жизнеспособных спор препаратов

Препаративная форма	КОЕ, спор/г ×109 КОЕ, спор/г через 1 мес. хранения КОЕ, спор/г через 2 мес. хранения
	1 неделя	1 месяц	2 месяца
ЛПФ	5,42±0,71	1,86±0,32	1,50±0,45
ВПФ	2,35±0,36	1,69±0,29	1,42±0,31 __
ППФ	2,07±0,54	1,79±0,34	1,46±0,29 __
Контроль	1,15±0,31	0,83±0,18	0,56±0,36 __
СП	1,73±0,46	1,36±0,34	0,70±0,43

Таблица 5 – Титр жизнеспособных спор препаратов

Вид препарата	КОЕ, спор/г×108
	2 недели	1 месяц	2 месяца
ЛПФ стрептомицин	2,00±0,19	0,13±0,33	0,12±0,02
ЛПФтехн стрептомицин	1,90±0,33	0,20±0,31	Посторонняя микрофлора
ЛПФ ампициллин	Посторонняя микрофлора	Посторонняя микрофлора ми микрофлора	Посторонняя микрофлора
ЛПФтехн ампициллин амп-н)
ЛПФ гентамицин	2,10±0,12	0,50±0,19	0,30±0,03
ЛПФтехн гентамицин	0,30±0,32	0,12±0,13	0,10±0,01

Рисунок 6 – Изменение титра образцов паст при хранении в течение 1 недели

Рисунок 7 – Изменение титра образцов паст при хранении в течение 1 месяца

Рисунок 8 – Изменение титра образцов паст при хранении в течение 2 месяцев

Наиболее низкий титр спор среди композиций оказался у смачивающегося порошка (1,36×10⁹), но это связано скорее не с тем, что его компоненты оказывают ингибирующее воздействие на прорастание спор, а с тем, что порошок был недостаточно полно суспендирован в воде.

В целом, в качестве наполнителей могут использоваться все исследуемые добавки, поскольку титр спор после хранения композиций в течение месяца остается на высоком уровне. По сравнению с первоначальным (9,3×10¹⁰ спор/мл) титр спор падает примерно на порядок.

По данным таблицы 5 можно сказать о том, что, титр спор во всех вариантах существенно падает при хранении в течение 2-х месяцев. Наиболее высокий титр у пасты с лецитином пищевым и гентамицином. Комбинация с техническим лецитином и гентамицином оказалась не очень удачной, титр на протяжении срока хранения низкий. Для вариантов со стрептомицином титр не сильно различался для технического и обычного лецитина, но через 2 месяца в пасте с техническим лецитином выросла посторонняя микрофлора. В целом, технический лецитин может служить заменой пищевому, но только в комбинации с гентамицином. Напротив, ампициллин в изученной концентрации, не защищал пасту от посторонней микрофлоры и не может использоваться в качестве альтернативы стрептомицину.