- •Введение 6
- •1 Аналитический обзор
- •1.1 Характеристика энтомопатогенного гриба Verticillium lecanii
- •1.2 Характеристика отряда Homoptera (равнокрылые)
- •1.2.1 Семейство Aleyrodinea – белокрылки
- •1.3 Инфицирование и развитие микозов
- •1.4 Изучение процесса патогенеза с помощью электронной
- •1.5 Факторы, влияющие на процесс патогенеза
- •1.6 Влияние ультрафиолетового облучения
- •1.7 Разработка препаративных форм биоинсектицидов на основе спор энтомопатогенных грибов
- •2 Цели и задачи исследования
- •3 Экспериментальная часть
- •3.1 Объекты исследования
- •3.1.1 Культура гриба Verticillium lecanii
- •3.2 Материалы и методы
- •3.2.1 Питательные среды
- •3.2.2 Культивирование гриба Verticillium lecanii
- •3.2.3 Определение титра спор
- •3.2.4 Получение образца биопрепарата гриба
- •Verticillium lecanii на ферментационной установке
- •3.2.5 Получение препаративных форм
- •3.2.6 Определение жизнеспособности спор гриба
- •3.2.7 Определение вирулентности препаративных
- •3.2.8 Определение вирулентности препаративных
- •3.2.9 Определение биологической эффективности
- •3.2.10 Изучение процесса патогенеза с помощью
- •3.2.11 Изучение влияния уф-излучения на
- •3.2.12 Изучение влияния уф-облучения на
- •3.3 Статистическая обработка результатов
- •4 Результаты исследований и их обсуждение
- •4.1 Результаты оценки влияния добавок к препаративным формам на жизнеспособность спор гриба Verticillium lecanii
- •4.2 Результаты опыта по изучению биологической
- •4.3 Результаты оценки влияния уф-излучения
- •4.4 Результаты опыта по изучению влияния уф-облучения
- •4.5 Результаты опыта по изучению процесса патогенеза с помощью электронной сканирующей и световой микроскопии
- •5 Выводы
- •Технико-экономическая оценка результатов исследования
- •Б.2 Расчет затрат на проведение исследовательской работы
- •В.3.2 Основные правила безопасности работы в лаборатории При работе с едкими веществами:
3.2.3 Определение титра спор
Титр спор в культуральной жидкости в концентрате биомассы и в готовых препаративных формах определяли с помощью камеры Горяева. Подсчитывали количество спор в 5 больших квадратах, в разных полях зрения. Расчет титра спор приведен в формуле 1:
Т=(Ncp/4)×n×106, (1)
где Nср – среднее количество спор в квадрате;
n – разведение (во сколько раз разведена навеска биомассы или пасты) [27].
3.2.4 Получение образца биопрепарата гриба
Verticillium lecanii на ферментационной установке
Выращивание биомассы гриба Verticillium lecanii производилось на ферментационной установке ЗАО «Агробиотехнология» г. Москва. В ферментатор вместимостью 100 литров вносили глюкозо-пептонную среду и засевали её посевным материалом, выращенным в течение 5 суток на качалке. Длительность ферментации составила трое суток, при температуре 28 оС, аэрации 3,6 м3/ч, перемешивании 260 мин-1. Титр спор составил 9,3×1010 спор/мл. Концентрирование проводили на нутч-фильтре, затем вносили необходимые добавки для получения пасты (лецитиновой препаративной формы ЛПФ) с титром 8,6×1012 спор/г.
3.2.5 Получение препаративных форм
Свежую отфильтрованную, промытую и взвешенную биомассу, полученную после выращивания гриба в колбах, делили на 6 частей и готовили препаративные формы. Варианты препаративных форм: лецитиновая (ЛПФ), вазелиновая (ВПФ), полиакриламидная (ППФ), смачивающийся порошок (СП) и контроль (споры без добавок). В таблице 2 представлено количество компонентов, добавленных к биомассе.
Чтобы изготовить смачивающийся порошок перед добавлением аэросила вносили защитную смесь (25 мл), состоящую из: 1,8 г глицерина, 13 г сахарозы, 10,5 мл растительного масла и 0,1 г глюконата натрия. Защитная смесь предохраняет биомассу гриба от сильного высушивания и потери жизнеспособности спор, а аэросил предотвращает биомассу гриба от слипания в процессе высушивания [28].
Таблица 2 – Компонентный состав образцов препаративных форм
Компоненты |
ЛПФ |
ВПФ |
ППФ |
Контроль (споры) добавок)
|
СП |
Лецитин, г |
1 |
– |
– |
– |
– |
Вазелин, г
|
– |
0,5 |
– |
– |
–
|
Полиакриламидный гель (ПААГ), г |
– |
– |
5 |
– |
– |
Крахмал, 7,5%, мл |
10 |
10 |
10 |
– |
– |
Борная кислота, 1%, мл |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
– |
– |
Стрептомицин, 0,5%, мл |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
– |
– |
Биомасса, г |
10 |
10 |
10 |
10 |
148 |
Аэросил, г |
– |
– |
– |
– |
74 |
Защитная смесь, мл |
– |
– |
– |
– |
25 |
|
|||||